结核性腹膜炎外周血树突细胞亚群的变化

　　[摘要]【目的】探讨结核性腹膜炎外周血树突细胞亚群的变化。【方法】对本院胸科病房收治的65例结核性腹膜炎病人，采用流式细胞法测定外周血树突细胞(dendritic cells，DC)亚群DCl／DC2以及成熟DC／未成熟DC(DCm／DCira)的变化，并检测20名健康体检人员为对照。【结果】病例组外周血中Dcl细胞比例明显增加，DC2细胞比例下降，DCl／DC2比值明显升高(P均<0．05)。DCm比例明显下降(P<0．01)，DCim比例明显增高(P<O．05)。I)cm／DCim比值明显下降(P<O．01)。【结论】结核性腹膜炎外周血D(：亚群明显变化，可能是自身免疫抑制反应，为寻找治疗突破点提供了一定的理论依据。
　　
　　[关键词] 结核，腹膜／血液； 树突细胞／血液
　　
　　近年来，由于结核分枝杆菌(Mtb)耐药株的出现，结核病有抬头趋势[12]。结核性腹膜炎多为全身结核感染的一部分，亦可以单独发病。研究发现，结核性腹膜炎时机体表现Th细胞比例明显增加，血清INF一7水平提高，提示结核性腹膜炎机体为致敏状态，抗结核能力增强[3]。树突状细胞(DC)是专职的抗原提呈细胞(antigen presenting cells，APC)，DC亚群的变化决定了Th细胞亚群的变化[5]。本研究检测肺结核患者外周血DCl及DC2亚群，探讨DC亚群在结核性腹膜炎时的变化和意义。
　　
　　1 资料与方法
　　
　　1．1 一般资料
　　2004年5月至2009年12月于本院胸科病房收治的急性期渗出性结核性腹膜炎病人65例，合并肺结核者35例。男35例、女30例。年龄11～72(32±10．17)岁，符合下列诊断标准：①有结核病史，伴有其他器官结核病证据；②持续不明原因发热2周以上，伴有腹痛、腹水、腹壁柔韧感或腹部肿块；③腹水检查显示渗出液，以淋巴细胞为主，腹水一般细菌培养呈阴性，细胞学检查未发现癌细胞；④结核菌素试验呈强阳性；⑤X线检查发现腹部钙化影、肠粘连等征象；⑥抗结核治疗有效。对照组20例为正常体检人员，男女各10例．年龄(33±8．17)岁，性别、年龄构成与病例组差异无显著性(P>O．05)。
　　
　　1．2检测方法
　　1．2．1 主要仪器和试剂鼠抗人CDl23一PE、CDl 1 C-PE、CD83一Cy5、Lineage cocktail CD3．CDl4．CDl6．CDl9．CD20．CD56)一FITC、FACS溶血素Lysing Solution均购自美国BD公司，BnFACBCalibu流式细胞分析仪(美国BD公司)。
　　1．2．2 标本采集所有对象入院后静脉采血2mL，EDTA抗凝。加入溶血素2 mL，混匀，室温避光放置10 min，离心后加入PBS缓冲液1 mL洗涤细胞，离心5 min，加入固定液300肛L备用。
　　1．2．3 DC成熟度的检测三色分析法检测外周血DC成熟度，将上述标本中加入鼠抗人HLADRFlTC、CDl23一PE、CD83一Cy5，以HLA DR+CDl23+一CD83+为成熟DC(DCm)，以HLADR+CDl23+一CD83一为不成熟DC(DCim)。用CEI。I，lQuest软件分析HI。ADR+CDl23+～CD83+和HLADR+CDl23+-CD83一DC在静脉血单个核自细胞中占的百分率。
　　1．2．4 DC亚群的检测三色分析法检测外周血DC亚群，将上述标本中加入鼠抗人HLADRFITC、CDl23-PE、CDl lcCy5，HLADR对Lineagel的细胞分布图中以Lineagel一设门，在双重设门中获取CDllc+的细胞为DCl，同时获取HLADR+CDl23+的细胞为DC2。用CELLlQuest软件分析CDllc+的DC、CDl23+的DC在静脉血单个核白细胞中占的百分率。
　　
　　1．3统计学处理
　　数据采用SPSSl4．0统计软件进行分析。采用配对t检验。
　　
　　2 结果
　　
　　2．1 结核性腹膜炎患者外周血DC亚群检测水平与正常对照组相比，急性期结核性腹膜炎患者外周血DCI比例明显减少。而DC2比例显著减少(P<O．05)。DCl／DC2比例在结核性腹膜炎患者明显增高(P<O．05)。
　　
　　2．2 结核性腹膜炎患者DC成熟度分析与正常对照组相比，结核性腹膜炎患者成熟DC(DCm)明显下降(P<o．01)，不成熟DC(DCim)比例明显增高(Pd0．05)。DCm和DCim比值明显下降(P<0．01)。
　　3 讨论
　　
　　结核性腹膜炎是由结核菌抗原引起的腹膜的变态反应性疾病，为临床常见病和发多病。结核性腹膜炎以炎症渗出为主要病变，并可能发生组织坏死等病理变化。已有研究开始从免疫学角度理解结核的发病发展机制[3]，而且已经认识到结核病免疫主要是T细胞介导的细胞免疫。DC是体内最强的APC，是免疫过程中是发动者又是调控者，参与多种疾病，特别是免疫相关性疾病的发生发展过程[5-8]。DC可有效地刺激T、B淋巴细胞活化，是机体内惟一能激活初始T细胞的APC，且能决定所触发的T淋巴细胞免疫反应的类型，因此对结核杆菌的清除亦可能有重要的作用。