HDAC1和HDAC6蛋白过表达在卵巢浆液性癌中的临床病理学意义

　　组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylasesHDACs）可以异常结合到特定的启动子区，从而抑制正常功能基因的转录，导致肿瘤发生。目前已知的HDACs家族共有l1个成员 ，均具有介导染色质修复和基因表达的作用。它能够使组蛋白脱去乙酰基，从而增加细胞的能动性。在所有1 1个家族成员中，HDAC6是唯一具有两个催化位点的去乙酰酶，而其它成员均具有一个催化位点[2,3j。因此，近几年来HDAC6倍受关注。
　　等 报道，HDAC6基因表达水平可以独立应用于乳腺癌的预后判定指标并有可能作为乳腺癌治疗的新靶点。但对于HDACs基因与卵巢癌的关系研究国内外报道尚不多见。本实验应用免疫组化法测定和HDAC6蛋白在卵巢病变中的表达情况以明确HDACs蛋白表达在卵巢癌中的临床病理学意义。是指‘++’和‘+++’的病例数占总病例数的百分比。
　　 统计学处理 统计学分析应用SPSS分析系统，数据资料采用x 检验进行分析。
　　材料与方法 结果.1 材料选取延边妇幼保健院、延边肿瘤医院和美国约翰霍普金斯大学医学院病理科2000～年的卵巢浆液性肿瘤存档蜡块标本共147例，其中例为卵巢浆液性囊腺瘤（serous cystadenoma），例为交界性卵巢浆液性囊腺瘤，82例为卵巢浆液性囊腺癌（serous ad—。
　　.2 免疫组织化学染色 免疫组化采用法，免疫组化EnVision检测试剂盒购自DAKO公司，HDAC1、6购自Cell Signaling公司。染色步骤按说明书进行，4 Ixm厚组织切片常规脱蜡、梯度乙醇入水。在抗原修复液中95～99℃处理40 min，室温冷却20 min。缓冲液清洗3次后，分别加入1：
　　稀释的HDAC1、6抗体并置4℃ 过夜。第二天，应用检测和显色试剂盒进行3，3，_Diaminobenzi—显色，Mayer苏木精复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，最后用树胶封片以备观察。为证明免疫组化检测的特异性，实验中应用了鼠IgG代替一抗作为对照，结果为阴性。同时，选择阳性染色的切片，以PBS代替一抗的染色结果为阴性作为结果可信的实验依据。
　　染色结果判定标准：棕褐色的阳性颗粒位于细胞核和（或）细胞质。以阳性染色细胞数和阳性染色强度为主要分级依据，结果分为以下4级：阴性一）是指阳性细胞数<5％ 或阳性染色与对照片比较无差异；弱阳性（+）是指阳性细胞数为5％ ～％ 或阳性信号较弱；阳性（++）是指阳性细胞数为26％ ～50％ 而且阳性染色明显增强；强阳性是指阳性细胞数达50％ 以上而且阳性染色棕褐色较深 j。阳性表达率是指‘+一++’和‘’的病例数占总病例数的百分比；强阳性表达率.1 HDAC1的表达HDAC1蛋白主要表达在卵巢癌细胞核，其强阳性表达率在交界性囊腺瘤和囊腺癌中分别为65.4％（17／26）和80.5％（66／82），与良性卵巢浆液性囊腺瘤组（7.7％ ，3／39）比较明显增高，差异具有统计学意义（表1，图1）。2.2 HDAC6的表达HDAC6蛋白主要表达在卵巢癌细胞质，其强阳性表达率在浆液性交界性囊腺瘤中为34.6％（9／26），在浆液性囊腺癌中则高达86.6％（71／86），而在良性浆液性囊腺瘤中完全阴性（0／39），差异具有统计学意义（表1，图2）。
　　②图2 A：卵巢浆性囊腺瘤中HDAC6蛋白弱阳性表达；B～D：交界性浆液性囊腺瘤HDAC6的弱阳性和阳性表达；E、F：浆液性囊腺癌中蛋白强阳性表达，EnVision法讨论由于每位患者无论肿瘤的形态学表现是否相同，在肿瘤发生过程中所表现的基因改变和蛋白表达谱都明显不同，因而对预后和靶向治疗的个体化分子预测正越来越受到关注。分子靶点研究正在妇科肿瘤中逐步开展。它涉及妇科肿瘤的表达谱、妇科肿瘤中不同类型的基因组及转录组图谱以及分子的靶向治疗 。目前，妇科肿瘤所涉及的靶向治疗的分子靶点包括：表皮生长因子受体（EGFR）家族、—AKT—mTOR、MAPK、Wnt／Hedgehog等信号通路以及VEGF等。其中研究最多的是EGFR家族中的EGFRI和HER2 。
　　卵巢癌是妇科肿瘤中致死率最高的恶性肿瘤，尽管近年来治疗技术不断改进，但其5年生存率仍无明显提高。基因治疗在肿瘤领域的成功应用为卵巢癌的靶向基因治疗奠定了基础 。随着对新的肿瘤特异位点的不断认识及免疫学和分子生物学的发展。对肿瘤形成过程中的受体、基因和信号转导等有了比较深入的了解。近十余年来，组蛋白去乙酰化酶在肿瘤发生中的作用已成为研究热点。目前已经证实HDACs基因在多种肿瘤中呈高表达，Saku—等 研究发现，HDAC6在口腔鳞状上皮细胞癌组织中呈明显的高表达，在肿瘤进展不同阶段也有显著的表达差异，说明HDAC6有可能与肿瘤侵袭性相关；Bazzaro等¨ 研究了HDAC6的新抑制剂对卵巢癌的杀伤作用及其机制，证明了抑制剂对于卵巢癌细胞的体内外杀伤作用，但NK84只特异性地抑制HDAC6基因表达。我们的前期研究表明¨ ，HDAC1、HDAC5和HDAC6蛋白在宫颈癌中有明显的增强表达，而且HDACs的广谱抑制剂曲古抑菌素A（trichostatin A，TSA）可以作为宫颈癌的有效靶向治疗药物。
　　本实验结果表明，HDAC6蛋白在卵巢浆液性囊腺瘤中的强阳性表达率为0（0／39），但在交界性浆液性囊腺瘤中的强阳性表达率为34.6％ ，在浆液性囊腺癌中的强阳性表达率则高达86.6％ ，提示蛋白检测结果可作为卵巢癌诊断的有效辅助指标。与此相似，HDAC1蛋白在卵巢浆液性囊腺瘤中的强阳性表达率仅为7.7％ ，但在交界性浆液性囊腺瘤和浆液性囊腺癌中的强阳性表达率则分别高达65.4％和80.5％ ，提示HDAC1蛋白检测也可作为卵巢癌早期诊断的有效辅助指标，与一起有望成为卵巢癌靶向治疗新的分子靶点，推理的广谱抑制剂（TSA、Trapoxin及一类杂合极性复合物，如SAHA、CBHA以及depudecin，FR901228、、Ms一27-275等 12]）有望成为卵巢癌的有效靶向治疗药物，但尚需进一步的实验证实。