地高辛标记探针检测重组人干扰素α2b中DNA残留量的研究

【摘要】  目的 建立检测注射用重组人干扰素α2b半成品中外源性DNA残留量的方法。

方法 以重组人干扰素α2b工程菌基因组DNA为模板,用地高辛标记探针,以此探针杂交并进行显色反应。

结果 半成品中每人份剂量的外源性DNA残留量均小于10 ng。 结论 该方法检测特异性较强,操作较安全简便,可用于重组人干扰素α2 b制备过程中的质量监控及半成品的检定。

【关键词】  地高辛 DNA残留量 重组人干扰素α2b

注射用重组人干扰素α2b是利用携带人白细胞干扰素α2 b基因质粒的重组大肠杆菌生产所得，具有广谱抗病毒、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用。主要用于治疗一些病毒性疾病，如急慢性病毒性肝炎、带状疱疹、尖锐湿疣等。由于在生产过程中使用了工程菌大肠杆菌,而宿主菌的残留DNA是重组药物中特有的潜在致癌性杂质,因此对干扰素α2 b半成品中外源性DNA残留量的检测极为重要［1，2］。本文使用地高辛标记探针杂交法检测注射用重组人干扰素α2 b半成品中的外源性DNA残留量，操作较安全简便,可用于重组人干扰素α2 b制备过程中的质量监控，从而保证了其安全性,符合相关质控标准［3］。

1     材料与方法

1．1    材料与试剂

重组人干扰素α2b工程菌的宿主菌（北京生研所）和重组人干扰素α2b半成品(深圳海王英特龙生物技术有限公司提供)；地高辛标记和检测试剂盒（Roche）；正电荷尼龙膜（Millipore）；细菌基因组DNA提取试剂盒（DP2001,北京百泰克生物技术有限公司）；蛋白酶K（Amresco）；鲱鱼精DNA（Sigma）；其余试剂均为分析纯。

1.2    工程菌基因组DNA的制备

大肠杆菌的基因组DNA通过百泰克细菌基因组DNA提取试剂盒制备,并通过1%琼脂糖凝胶电泳法和分光光度法测定提取的DNA纯度和浓度,并将提取的DNA于-20 ℃冻存备用。