高效液相色谱法测定帕米膦酸二钠中的β丙氨酸

【摘要】  目的 建立帕米膦酸二钠中β丙氨酸的检测方法。 方法 采用高效液相色谱法，以Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)为色谱柱，以甲醇0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用氢氧化钠调节pH值至7.0)(体积比30∶70)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为360 nm。结果 β丙氨酸的质量浓度在3～18 μg/mL范围内与峰面积呈较好的线性关系，回归方程为y=0.0445x+0.2010,r=0.998 6；平均回收率为99.1%，RSD=1.9%。结论 该法简便、灵敏度高，可用于帕米膦酸二钠中β丙氨酸的质量控制。

【关键词】  帕米膦酸二钠 β丙氨酸 高效液相色谱法

帕米膦酸二钠是一种双膦酸类骨吸收抑制剂，临床上广泛应用于治疗骨质疏松症、肿瘤并发的高钙血症和变形性骨炎［1-3］。帕米膦酸二钠的合成主要以β丙氨酸为原料，同时也是降解的主要产物，因此需要控制帕米膦酸二钠中β丙氨酸的量(拟定为不得超过0.3％)。第30版美国药典、2007年版英国药典和国家食品药品监督管理局国家药品标准WS1—(X—294)—2004Z中，帕米膦酸二钠中β丙氨酸的限度检查均采用薄层色谱法。由于薄层色谱法专属性和灵敏度均不如高效液相色谱法，故本文利用2，4二硝基氟苯与β丙氨酸的胺基进行耦合反应(见图1)，结果衍生物具有紫外吸收，采用紫外检测高效液相色谱法对帕米膦酸二钠中β丙氨酸的限度进行检查。帕米膦酸二钠已被列为中国药典2010年版二部拟新增品种，作为承担单位，本实验方法拟收载在中国药典2010年版二部。

图1    2，4二硝基氟苯与β丙氨酸的反应（略）

Figure 1    Reaction of 2,4dinitrofluorobenzene and βalanine

1    仪器与试药

Agilent 1100 高效液相色谱仪，VWD检测器及其配套色谱工作站；2，4二硝基氟苯(International Laboratory USA，批号：194632，质量分数：99.9％)；β丙氨酸对照品(广东信立泰药业有限公司提供，批号：20061120,质量分数：99.4%)；帕米膦酸二钠(深圳信立泰药业有限公司，批号：20080201；宁波人健药业有限公司，批号：070107、070104、070110；浙江迪耳药业有限公司，批号：060403)；水为超纯水；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2    方法与结果