Ang-2和Livin在子宫内膜异位症组织中表达的研究

　　摘要目的 探讨促血管生成因子Ang-2和凋亡抑制蛋白Livin在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学SP法检测40例子宫内膜异位症的卵巢巧克力囊肿组织(异位内膜组织)和30例正常子宫内膜组织标本中Ang-2和Livin的表达情况。结果：Ang-2在异位内膜组织中的阳性表达率为87.50%,高于其在正常内膜中的阳性表达率16.66%，Livin在组织中的阳性表达率为72.50%,显著高于其在正常内膜中的阳性表达率13.33%。并且两者在EM卵巢巧克力囊肿组织中的表达呈正相关。结论：Ang-2和Livin可能在EM卵巢巧克力囊肿的发生发展中发挥着重要作用。

　　Study on the expression of Ang-2 and Livin in the tissues of endometriosis

　　Yan Qiong Qiong Zhu Xin Qun (Department of Obstetrics and Gynecology,Second Affiliated Hospital of Zheng zhou University,Henan 450014)

　　Abstract Objective: To detect the role of Ang-2 and Livin in the development of endometriosis.Methods: Archived tissue sample of 40 Ovary chocolate cyst(eutopic)and 30 normal endometrium we selected and immunohistochemically analyzed for Ang-2 and Livin .Results: the positive rate of Ang-2 in endometriosis was 87.50% higher that in noemal endometrium of 16.66%, the positive rate of Livin in endometriosis was 72.50% higher that in noemal endometrium of 13.33%.They have positive relationship in endometriosis. Conclusions: Ang-2 and Livin may play an important role in particular malignant biological behaviour of endometriosis through their repective moclear mechanisn.

　　子宫内膜异位症 ( EM)是指具有活性的子宫内膜组织 (腺体和间质 )出现在子宫内膜以外的部位。EM中最常见的是卵巢巧克力囊肿，其引起痛经、慢性盆腔疼痛和不孕 , 严重影响着中、青年妇女的健康。本病的发病机制尚未完全阐明,但普遍认为新生血管的形成为内异症的发生、发展奠定了基础。同时近年来越来越多的学者从肿瘤发生的角度探讨子宫内膜异位症的病因,因为EM虽是良性病变 ,但有诸如浸润、 转移及复发等恶性生物学行为,所以认为EM的发病如肿瘤一样与细胞凋亡抑制密切相关。Ang-2是一个作用较强的促血管生成因子,与新生血管的形成密切相关。Livin也是最新发现的一个凋亡抑制蛋白家族成员,具有明显的抑制细胞凋亡的功能。本实验中用免疫组化法检测了Ang-2和Livin在 EM卵巢巧克力囊肿组织和正常内膜组织的表达,探讨二者在EM卵巢巧克力囊肿发生发展中的作用及相互关系。

　　1　资料与方法

　　1 .1　2009 年1月- 2010年2月在本院行开腹及腹腔镜手术病理证实为EM 的患者40例, 取其卵巢巧克力囊肿组织(异位内膜组织)，定为病理组。并选同期因子宫肌瘤或宫颈病变行子宫全切术的患者,术后病理证实为正常子宫内膜的标本30 例作为正常组对照。两组在年龄、体重、月经周期上的差异无统计学意义。所有病例年龄25～ 45 岁,平均年龄36.5 岁; 纳入实验患者术前6个月均未服用过激素类药物或放置宫内节育器, 子宫内膜无其他病理改变。病理切片由病理科专家复核确诊。

　　1.2　采用免疫组化SP法，用 10 %福尔马林固定 , 常规石蜡包埋 , 行 5um厚连续切片。按试剂盒说明书操作。PBS代替一抗作阴性对照 ,已知阳性片作阳性对照。显微镜下观察 , Ang-2和Livin均以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。随机选择5个高倍视野,测量其灰度值,取平均值。

　　1.3 所有资料应用SPSS 13.0。计数资料组间比较采用χ2检验。相关性分析采用Spearman 等级相关。计量资料组间采用方差分析。以 P < 0. 05 作为检验水准。

　　2　结 果

　　2. 1　Ang-2表达　Ang-2 主要定位于在内膜组织腺上皮细胞浆,在部分间质和血管内皮也呈阳性表达(不计入灰度值分析)。Ang-2 在病理组阳性表达率为87.50%,明显高于对照组的阳性表达率16.66%( P < 0. 05),见表1。

表 1　2种子宫内膜组织腺上皮细胞及间质细胞中Ang-2的表达

2. 2 Livin 蛋白的表达 Livin蛋白主要表达于腺体细胞的细胞质,Livin 在病理组的表达的阳性率为72.50%,显著高于对照组的阳性率13.33% (P < 0 .05)，见表2 。

表 2　2种子宫内膜组织腺上皮细胞中Livin蛋白的表达

2. 3   Ang-2和Livin蛋白表达的相关性   经 Spearman等级相关分析Ang-2和Livin在内膜组织中的表达呈正相关( P < 0. 05 ) ,见表 3.

表 3　A、 B组Ang-2、Livin灰度值比较 (珔 x ±s)

 

 

 

 

 

 

 

＊A组为异位内膜组，B组为正常内膜组。

　　3 讨 论

　　3. 1 Ang-2 是一类重要的血管生成调节因子,广泛分布于子宫和卵巢 ,与血管内皮细胞特异性酪氨酸激酶受体( Tie2) 结合,参与血管形成和重建。血管生成与促血管生成因子密切相关，是在多种细胞因子的调控下完成的，其中VEGF作为血管内皮细胞的有丝分裂原，是促进内皮细胞增殖的最主要因子。Ang-2是继VEGF之后发现的另一个作用较强的促血管生成的因子。Jinghngc(1)等,比较了EM患者异位子宫内膜组织,在位子宫内膜组织与正常子宫内膜组织中Ang-2mRNA及蛋白的表达，发现其在EM患者中的表达较正常者显著增高，但异位和在位子宫内膜间无差异。本研究显示Ang-2在 EM患者卵巢巧克力囊肿组织中表达很强,在正常内膜组织表达很弱，与Jinghngc的研究结果一致，提示Ang-2在卵巢巧克力囊肿组织的过度表达，竞争性抑制Ang-1引起的Tie-2受体的磷酸化，可能使囊肿组织中的血管壁通透性增加，血管不稳定性增加,从而更容易接受其他促血管生成因子如VEGF的作用，促使新生血管的生长,为子宫内膜异位种植存活和EM的发生提供了基本条件，有利于卵巢巧克力囊肿形成。

　　3. 2 细胞凋亡是机体消除多余、衰老和受损伤细胞,以维持机体内环境稳定的一种生理过程。国内外的大量研究己提示细胞凋亡率的下降与多种肿瘤的发生有关 ,子宫内膜异位症作为一种“有恶性肿瘤行为的良性疾病”,细胞凋亡的异常在其发病机制中的作用也得到越来越广泛的研究。Livin是最新发现的一个凋亡抑制蛋白(optososprotein，IAp)家族成员，目前己发现Livin在多种肿瘤细胞中异常表达,与肿瘤发生关系密切。Livin通过BIR结构域与caspase3、7、9蛋白(介导细胞凋亡蛋白)的结合，阻止caspase蛋白在细胞凋亡时执行蛋白切除功能(2),进而抑制细胞凋亡。Yagihashi等(3)采用荧光定量RT-PCR检测多种消化道肿瘤细胞系，发现Livin在胰腺癌细胞系AsPCI和大肠癌细胞系HT29过度表达。本研究结果显示Livin在 EM患者异位内膜组织中表达明显高于其在正常内膜组织中的表达，提示Livin的过度表达可能使 EM的卵巢巧克力囊肿组织细胞(包括血管内皮细胞)凋亡减少,导致增生与凋亡失衡，异位内膜持续处于低凋亡、相对高增生状态, 使凋亡率降低的子宫内膜异位至盆腔后不易凋亡， 有利于EM病灶的侵袭与发展, 促进了卵巢巧克力囊肿形成。

　　3. 3 促血管生成因子VEGF和Ang-2，Zhang L(4)等利用36例鼠的卵巢癌血管发生模型与52例人的卵巢癌标本利用免疫组化、显微切割激光捕获、RT-PCR等实验研究Ang-2在肿瘤血管发生中的表达和作用，结果显示VEGF显著提高Ang-2在人体内的表达。Survivn与Livin同为IAP家族成员,国内外有研究报道认为VEGF及Surivin蛋白在EM中高表达且两者表达相关。本研究结果显示Livin及Ang-2在 EM内膜组织中的表达呈正相关( P < 0.05)，从而提示在抑制细胞凋亡因子Livin有可能使促血管生成因子Ang-2活性增强，有利于EM异位内膜组织新生血管的形成,并使内膜组织移位至盆腔后不易凋亡，导致卵巢巧克力囊肿发生、发展。

　　3. 4 血管的异常增生和细胞凋亡的异常在 EM 发病机制中的作用为从分子生物学的角度治疗子宫内膜异位症提供了新的思路。可以通过基因联合治疗，同时促进异位子宫内膜细胞凋亡和减少EM新生血管的形成，从而达到治疗EM卵巢巧克力囊肿的目的。目前已有以Livin基因为靶点治疗肿瘤的初步研究。本研究表明 ,凋亡抑制基因Livin和促血管生成因子Ang-2在EM卵巢巧克力囊肿发病中有重要作用 ,使以Livin和Ang-2基因为靶点的治疗途径成为可能。

　　参考文献:

　　(1)JingtingC，YangdeZ，YIZ，etal.Expression of heparanase and angiopoietin一2in Patients with endometriosis[J].Eur J Obstet Gyneeol ReProd Biol，2008，136:199一209.

　　(2)Kim YA,Kim YJ,Kim HS,et al.Endocrinology:basic research:Expression of survivingin eutopic endometrium with or without endometriosis.[]Abstracts of the 20th AnnualMeeting of the ESHRE,Berlin,Germany,27-30 June,2004.

　　(3)Yagihshi A,Asanuma K,Tsuju N,et al.Detection of anti-livin antibody in gastrointestinal cancer patients[J].Clin Chem.2003;47(7):1206-1208.

　　(4)Bourlev V，Volkov N，Pavlovitch S，et al.The relationship between microvessel density,proliferative activity andexpression of vascular endothelial growth factor-A and itsreceptors in eutopic endometrium and endometriotic lesions.Reproduction,2006,132(3):501-509.