黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后梗死体积的影响

　　【摘要】 目的:本研究主要探讨黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后的梗死体积的影响。方法:采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，腹腔注射黄芪注射液，TTC染色计算脑梗死体积比。结果:缺血2h,3h用药后梗死体积比缺血再灌注组差异有统计学意义(P<0.05)，缺血4h,5h用药后梗死体积比缺血再灌注组差异没统计学意义(P>0.05)。结论:黄芪注射液可以减少时间窗以内的脑梗死体积，超过时间窗对脑梗死体积没有差异性。

　　【关键词】 黄芪注射液;局灶性脑缺血再灌注;TTC染色;梗死体积比

　　Abstract: Objective： To explore the effect of astragalus on infarct volume afterfocal cerebral ischemia-reperfusion of rats. Methods： The focal cerebral ischemia-reperfusion model was built by the fishing line method for middle cerebral artery occlusion in rats. The infract volume ratio was detected by TTC staining after intraperitoneal injection of astragalus.Results：Infarct volumewas significantly decreased after 2h- and 3h- ischemia in the astragalus group compared with the ischemic-reperfusion group(P<0.05).However, The infract volume showed nosignificant decrease after 4h- and 5h- ischemia(P>0.05).Concluion： Astragalus canreduce the infarct volume in the time window of cerebral ischemia, and it failsto have an effect on the infarct volume beyond the time window of cerebral ischemia.

　　Key words: astragalus; focal ischemic-reperfusion; TTC staining;infaract volume ratio

　　我国为缺血性脑病的高发国家，其中由大脑中动脉梗塞造成的脑缺血尤为常见。脑动脉闭塞造成脑缺血后，如果血流得以再通损伤理应得到恢复，然而事实存在再灌注时间窗这个时限,鼠的最大再灌注时间窗为3h,超过这个时限脑损伤继续加剧。黄芪注射液可以抑制自由基的产生，提高超氧化物歧化酶活性，对缺氧的神经细胞具有一定的保护作用。本实验通过建立大鼠大脑中动脉栓塞模型，探讨黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后的梗死体积比的影响。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 动物 

　　清洁级雄性Wistar大鼠，体重250～300g，佳木斯大学动物中心提供。

　　1.1.2 药物 

　　黄芪注射液由上海福达制药有限公司生产。 TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)购自上海前尘生物科技有限公司，使用前用0.9%生理盐水配制成浓度为2%的溶液，4℃冰箱避光保存待用。水合氯醛购自北京鼎国生物公司。

　　1.1.3 仪器 

　　多功能显微图像分析系统。

　　1.2 方法

　　1.2.1 实验分组和给药 

　　实验前自行饲养7d，随机分为3组，分别为:假手术组(即A组，5只，仅分离血管)，脑缺血再灌注组(即B组，共20只，每个时间点5只)、黄芪注射液用药组(即C组，共20只，每个时间点5只)。B组与C组术前3天开始用黄芪注射液(上海达制药有限公司生产)4.5g/kg腹腔注射，每日一次，共4次。A组用等量的生理盐水腹腔注射。B组与C组大鼠分别脑缺血2h、3h、4h、5h，再灌注24h后取材。

　　1.2.2 模型的建立 

　　采用改良的Longa模型建立大鼠大脑中动脉缺血/再灌注线栓法(MCAO)模型，大鼠用10%水合氯醛(0.35mL/100g)腹腔注射麻醉后,颈正中剪开，分离出左侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉并结扎颈总动脉和颈外动脉，用动脉夹夹闭颈内动脉(颈内动脉备线不结扎)，用眼科剪将颈总动脉距离分叉2mm处剪一小口，选择合适的鱼线型号(直径为0.234mm,0.26mm,0.264mm，0.285mm的四种型号),插入鱼线，深度18mm左右，稍遇到阻力后，结扎颈内动脉备用线，缝合(留一部分鱼线在皮肤外易于拔线)。假手术组仅分离出颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉，不结扎血管。模型组和黄芪注射液组于缺血2h、3h、4h、5h各相应时间点将鱼线退至分叉处，再灌注24h后取材。参照Zea-longa的分级标准，1～3分者入组，死亡和不合格的动物随机替补。

　　1.2.3 神经功能评分 

　　参照Zea-longa的分级标准进行行为学评分:0分,无神经缺损体征;1分,不能充分屈曲右侧前爪;2分，向右侧转圈;3分，向右侧倾倒;4分，不能自发行走，意识丧失。各组动物于拔线后2h进行评分。

　　1.2.4 脑梗死体积比 

　　大鼠以10%的水合氯醛麻醉后，断头取脑，将其放入0.9%冰冷生理盐水中洗净组织表面血液，之后迅速放入-20℃冰箱冷冻5~8min，选取视交叉后1mm至乳头体之间的脑组织，冠状位向后取2mm厚度，连续切取组织5片,然后放入置有2%TTC生理盐水的6孔板中，每个5个脑片放在一个孔里。用锡箔纸包住6孔板，放入烘箱染色10min。取出后置中性甲醛中固定24h后拍照，之后结合计算机多功能显微图像分析系统计算梗死面积,将各脑片的梗死(苍白区)面积与厚度2mm的乘积进行累加,获得梗死体积近似值，同样计算出所有脑片总体积，脑梗死体积比=梗死体积/所有脑片总体积。

　　1.3 统计学处理

　　所有数据均以x[TX-]±s表示，应用SPSS11.5统计软件包对数据进行统计分析，组间比

　　较用t检验。

　　2 结果

　　黄芪注射液对脑缺血再灌注后大鼠梗死体积比的影响:假手术组未出现梗死灶，模型组和黄芪注射液组均有梗死。梗死面积分析结果表明：黄芪注射液组脑缺血2h，3h与模型组脑缺血2h，3h再灌注24h相比差异有统计学意义(P<0.05)，黄芪注射液组脑缺血4h,5h与模型组脑缺血4h,5h再灌注24h相比差异无统计学意义(P>0.05)，结果见表1。　　表1 黄芪注射液对脑缺血再灌注后大鼠梗死体积的比的影响

　　3 讨论

　　缺血性脑血管病的病理损伤主要是由于局灶缺血、代谢紊乱、乳酸堆积、脑组织水肿、导致神经细胞的形态结构发生　　　　病理性改变、功能丧失，所以现在治疗脑缺血的总原则就是尽早治疗，恢复脑血流，减少再灌注损伤，减轻脑水肿。　　本研究结果表明，脑缺血2h,3h再灌注24h后，黄芪注射液组比缺血再灌注组梗死体积明显减少，具有保护作用。而缺血4h,5h再灌注24h后，伴随着缺血时间的延长，梗死体积逐渐增加，黄芪注射液组与模型组梗死体积相比没有明显变化，超过时间窗黄芪注射液对缺血再灌注损伤保护作用不明显。因而黄芪注射液对时间窗内缺血缺氧所致的神经元损伤有一定的　　保护作用，可以减少梗死体积。提示临床上尽早使用黄芪注射液已达到减少损伤促进修复的作用，对指导临床用药有重要的意义。

　　【参考文献】

　　[1]张忱,李刚,徐亚萍,等.大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的再灌注时间窗[J].中日友好医院学报,2000,14(5):255258

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　　[5]易健,黄昕,谢勇,等. 脑得健方对大鼠局灶性脑缺血后神经功能及梗死面积的影响[J].湖南中医药大学学报，2010,30(1):911