EphA2和KAI-1在非小细胞肺癌中的表达及意义

　　【摘要】 目的：进一步从分子水平研究肺癌发生发展的机制。方法：应用免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌(NSCLC)、30例癌旁组织中EphA2，KAI和FAK蛋白的表达。结果：(1)NSCLC中EphA2和FAK高表达，KAI-1低表达，与正常肺组织比较P<0.01，有显著差异性。KAI-1，FAK与肺癌的分化程度，临床分期,淋巴结转移有密切相关性，EphA2只与临床分期，淋巴结转移相关。(2)NSCLC中EphA2与FAK呈正相关, KAI-1与FAK负相关，P均<0.05,EphA2与 KAI-1无明显相关性(P>0.05)。结论：EphA2，KAI1和FAK可联合作为指标，用于评价肺癌的发展和预后。

　　【关键词】 非小细胞肺癌; EphA2; KAI-1,FAK。

　　Abstract：Objective：To study the mechanism of lung cancer occurrence and development at molecular level.Methods：The expression of EphA2, KAI-1 and FAK in 45 cases of non-small cell lung cancer (NSCLC) and 30 cases of normal lung tissue were detected immunohistochemically.Results：The expression of EphA2and FAK in NSCLC was significantly higher than that in the normal lung tissue. But the KAI-1 expression was lower(P<0.01).The expression of KAI-1 and FAK in NSCLC wassignificantly correlated with tumor differentiation degree, stage and cervical lymph node metastasis. EphA2 was only correlated with tumor stage and cervical lymph node metastasis, and the EphA2 expression was positively correlated with FAK, and the KAI-1 expression was inversely correlated with the FAK expression(P<0.05).However, there was no significant correlation between the expression ofEphA2 and that of KAI-1(P>0.05).Conclusion：EphA2, KAI1 and FAK can be jointlyused as the evaluation index for the evaluation of the development and prognosisof lung cancer.

　　Key words：non-small cell lung cancer, EphA2; KAI-1,FAK〖HT〗〖HJ〗

　　近年来肺癌发病率和死亡率不断上升,肺癌的早期诊断及临床监测越来越受到人们重视。目前利用分子标志物判断肿瘤的生物学行为已成为热点。本研究采用免疫组织化学法检测EphA2,KAI-1和FAK在NSCLC中的表达，通过分析三种指标之间的相关性，及他们与肺癌的临床分期、组织分化程度、淋巴结转移，患者性别、年龄的关系，来研究三者在肺癌的发生发展中的生物学意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　非小细胞肺癌标本45例，远离癌旁5cm以上的正常肺组织30例，取自佳木斯大学附属医院2008~2010年患者手术切除标本。其中男30例，女15例，年龄40～75岁;均未行放化疗和免疫治疗。肺鳞癌25例，腺癌20例。按TNM分期标准，Ⅰ-Ⅱ期31例，Ⅲ期14例;组织学分级：高-中分化28例，低分化17例。有淋巴结转移26例，无淋巴结转移19例。

　　1.2 试剂

　　EphA2,KAI-1,FAK兔抗人单克隆抗体由北京博奥森公司提供。其他免疫组化试剂盒由福州迈新生物公司提供。

　　1.3 方法

　　采用SP免疫组织化学法检测癌旁正常组织和NSCLC中EphA2,KAI-1,FAK的表达。所有标本经福尔马林固定，常规石蜡包埋，每张连续切3张，厚4μm。具体步骤严格按照检测试剂盒说明进行。

　　1.4 结果判定

　　 结果由两位病理医师采取双盲法进行判断，三种蛋白染色阳性均为棕黄色颗粒，表达于细胞浆(或细胞膜)，每例随机观察5个高倍镜视野。采用半定量积分法判定结果，阳性细胞<5%为0分，阳性细胞5%~24%为1分，阳性细胞25%~50%为2分，阳性细胞50%以上为3分。按染色强弱:阴性为0,淡黄色染色计分为1,中度黄色染色为2分,棕黄色染色为3分。两种分值相加:0为-,1~2为+,3~4为++,5~6为+++。两种积分之和>2则为表达阳性;≤2则为表达阴性。

　　1.5 统计学处理

　　应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，采用χ2检验和Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 肺癌组和正常对照组EphA2阳性表达率分别为73.3%，36.7%，KAI-1阳性表达率分别为46.7%,80%，FAK阳性表达率分别为64.4%,26.7%，两两比较差异有显著统计学意义(P均<0.01)。

　　2.2 EphA2、KAI-1和FAK的表达与NSCLC的临床病理参数的关系

　　见表1。 表1 EphA2、KAI-1和FAK的表达与NSCLC的临床病理参数的关系

　　2.3 NSCLC组织中

　　EphA2与FAK蛋白的表达呈正相关(r=0.497,P<0.05)，KAI-1和FAK呈现负相关(r=-0.329,P<0.05)，EphA2和 KAI-1无相关性(r=-0.242,P>0.05)。

　　3 讨论

　　黏着斑激酶(focal adhe-sion kinase) FAK作为一种非受体型酪氨酸激酶，是整合素和生长因子受体介导的信号传导通路的重要组成,与细胞外基质(ECM)-整合素-细胞骨架复合物所构成的黏着斑(FAP)结合,通过FAK-PI-3K途径，FAK-Ras-MAPK途径[1]，活化多种下游信号分子,调节肿瘤细胞的发生、迁移和浸润。近年来研究发现,在许多肿瘤组织中都有FAK显著高表达[2]。本研究显示,在NSCLC组织中FAK亦呈高表达，与患者的年龄、性别、组织学类型无关(P>0.05),而与肿瘤的分化程度、临床分期、有无淋巴结转移密切相关(P<0.05);随着分化程度降低,FAK蛋白表达增加;临床分期中, Ⅰ、Ⅱ期FAK蛋白表达显著低于Ⅲ、Ⅳ期;伴淋巴结转移的肿瘤组织中FAK蛋白表达明显高于无淋巴结转移者。以上结论进一步说明FAK蛋白高表达参与了肿瘤的发生,发展。

　　EPH(erythropoietin- producing hepatocllular)基因家族是新近发现的受体酪氨酸激酶(RTKs)中最大的家族。EphA2是lindberg于人上皮角化细胞cDNA文库中筛选得到的Eph亚家族成员,它是该家族成员中第一个被发现有酪氨酸激酶活性的基因[3]。EphA2定位在染色体1p36.1 ,编码一个含有976个氨基酸残基的多肽，可以与其配体结合形成受体-配体复合物,激活胞质的酪氨酸激酶而活化,导致自身磷酸化及下游底物蛋白质分子的酪氨酸磷酸化,从而启动不同信号转导途径，参与胚胎发育、细胞迁移及血管形成等生理过程。目前已证实很多的肿瘤组织中EphA2广泛高表达，如卵巢癌，大肠癌等。本研究发现EphA2在NSCLC中表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。且EphA2的表达与TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05),随着临床分期的增高及淋巴结转移的出现, EphA2的表达升高。表明EphA2在肿瘤中的高表达与肺癌的浸润和转移密切相关;研究还发现在NSCLC中EphA2和FAK蛋白的表达呈正相关(P<0.05)，EphA2可能通过自身的磷酸化，使R-Ras活化来控制整合素活性[4],从而调节FAK的表达,影响细胞的黏附、运动,参与肿瘤的发生，发展。

　　KAI-1是新近发现的一个肿瘤转移抑制基因,它位于人类染色体11p1112,编码一种含267个氨基酸的蛋白质。KAI-1基因最初是Dong等在研究前列腺癌中发现的 ,被称为前列腺癌转移抑制基因[5]。目前在消化道肿瘤、膀胱癌等上皮性恶性肿瘤中均已证实KAI-1具有抑制肿瘤转移的作用。本研究结果表明KAI-1蛋白在NSCLC中呈低表达，并且临床分期越晚,癌组织恶性程度越高，KAI-1蛋白表达越低, 伴淋巴结转移者KAI-1表达率明显低于无转移者，说明KAI-1基因的低表达促进了非小细胞肺癌发生、发展。本研究还发现KAI-1和FAK的表达明显负相关(P<0.05)，提示KAI-1蛋白在肺癌组织中表达下调,可能激活粘着斑激酶(FAK)介导的信号转导途径,使细胞获得浸润转移的能力虽然EphA2，KAI-1都和FAK表达有相关性，但二者之间无明显相关，说明两者可能通过不同的信号途径，分别参与肿瘤的发生发展。我们可以将这三个指标联合应用为预测肺癌发展预后的临床指标。

　　【参考文献】

　　[1]朱杰昌,朱理玮.FAK与大肠癌侵袭、转移的关系[J].天津医科大学学报,2004,10(S):181184

　　[2]Roy P, Jacobson K. Overexpression of profiling reduces themigrationof invasive breast cancer cells[J].Cell Motil Ctoskeleton,2004,57:8495

　　[3]Dav IS S, Gale NW,Aldr Ich Th, et al.Ligands for EPH2relat2ed rece2p tor tyrosine kinases that require membrane attachment orclustering for activity[J].Science,1994,266(5):816819

　　[4]Macraem,Neve R M,Rodr Iguez V Iciana P, et al. A conditional feedback loop regulates Ras activity through EphA2[J].Cancer Cell,2005,8(2):111118

　　[5]Dong JT,IsaacsWB,Barrett JC,et al.Genomic organization ofthe human KAI-1 metastasis2supp ressor gene[J].Genomics,1997,41:2532