蒲公英多糖的提取及降糖作用的研究

　　作者：侯丽然，孙丽娜，侯 巍，滕 杨，高金波 作者单位：(佳木斯大学化学与药学院，黑龙江佳木斯 154007)

　　【摘要】 目的：探讨提取蒲公英多糖的提取最佳工艺和蒲公英多糖对四氧嘧啶(Alloxan)糖尿病小鼠的降糖作用。方法：采用酶提取法、超声波提取法和超声波协同酶提取法，利用正交试验，优化各种提取方法的试验条件;用四氧嘧啶小鼠进行糖尿病模型的建立，用降糖仪测定小鼠的血糖，考察其降糖效果。 结果：酶提取法的提取率为：9.203%;超声提取的提取率为：13.98%;超声协同酶法的提取率为：15.83%。结论：提取的蒲公英多糖均有降低血糖的作用(P<0.01)。

　　【关键词】 蒲公英多糖;提取;降糖作用

　　Abstract: Objective： To investigate the optimum technological conditions　of Dandelion Polysaccharide and the hypoglycemic effect of its extract in diabetic mice.Methods：Dandelion Polysaccharide was extracted by the methods ofenzyme extraction, ultrasonic extraction and ultrasonic-enzyme synergistic extraction. The orthogonal test was used, and the experimental conditions were optimized. The hypoglycemic effect of Dandelion Polysaccharide was investigated by detecting the blood glucose.Results：The extraction rate of enzymes extraction was9.203%. The extraction rate of ultrasonic extraction was 13.98%. The extraction rate of ultrasonic extraction with enzyme was 15.83%.Conclusion：Dandelion Polysaccharide extracted by all the three methods has hypoglycemic action and Dandelion Polysaccharide extracted by ultrasonic extraction shows the most remarkable hypoglycemic effect.

　　Key words: Dandelion polysaccharide;extraction;hypoglycemic function

　　多糖是重要的信息分子，参与许多生理和病理过程，在医疗上具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、抗辐射、抗突变、降血糖、增强免疫等多方面的作用[1]。本文研究了三种提取方法并对提取的蒲公英多糖用于四氧嘧啶糖尿病小鼠进行了降糖作用的研究，以便进一步探讨其作用机制和为治疗糖尿病的药物的研制和开发提供新的线索。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与仪器

　　蒲公英根，购自于河北省安国市;昆明种小鼠，雌雄各半，普通级，体重18~22g，由佳木斯大学实验动物中心提供;血糖仪和血糖试纸，强生(上海)医疗器材有限公司;四氧嘧啶(Alloxan)，Sigma公司;纤维素酶，40000U/g，由上海蓝季科技发展有限公司提供;其余均为国产分析纯试剂。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 多糖的提取方法

　　蒲公英根→粉碎→石油醚、80%的乙醇回流脱脂脱低聚糖→50℃热风干燥→称取10g用各种方法进行提取→提取液浓缩至总体积的1/3→Sevage法除去蛋白→大孔吸附树脂进行脱色→95%的乙醇进行沉淀→低温干燥→蒲公英多糖粗品。

　　1.2.2 超声提取法和超声波协同酶法的实验优化

　　在单因素的基础上进行正交试验，超声提取的单因素实验分别考察了料液比(1:10、1:20、1:30、1:40)、温度(40℃、50℃、60℃、70℃)、功率(40W、50W、60W、70W)、提取时间(20min、30min、40min、50min)。

　　1.2.3 糖尿病模型的建立方法[2~5]

　　小鼠适应性喂养1周后，将110只随机分成2组，第一组10只为正常对照组，第二组100只为造模组。将造模组小鼠禁食不禁水12h，以200mg/kg的剂量一次性腹腔注射2%的四氧嘧啶(Alloxan)溶液(现用现用生理盐水配制)，注射后自由进食，进水。 72h后，尾尖取血，用血糖仪测定血糖，选择血糖值>11.1mmol/L的小鼠为造模成功的小鼠。

　　1.2.4 试验分组及实验

　　将造模成功的小鼠随机分成8组，每组8只，分别为：模型对照组;阳性对照组(也就是优降糖片组2.5mg/kg·d);超声波提取蒲公英多糖低剂量组(100mg/kg·d)，中剂量组(200mg/kg·d)和高剂量组(400mg/kg·d);超声波协同酶法提取蒲公英多糖低剂量组(100mg/kg·d)，中剂量组(200mg/kg·d)和高剂量组(400mg/kg·d)。

　　1.2.5 给药与血糖测定

　　将正常对照组和模型组给与0.3mL的生理盐水;阳性对照组给与等体积的优降糖片药液;蒲公英多糖组给与等体积的蒲公英多糖的溶液。连续灌胃15d。分别于给药后的1d，7d，14d断尾取血，测定空腹血糖值。

　　2 结果与讨论

　　2.1 酶法提取的正交实验设计优化及结果

　　见表1。表1 酶提取法的正交试验设计L9(34)及实验结果

　　2.2 超声波提取正交试验设计优化及结果

　　超声波提取的试验设计同表1，得到的提取率分别为：11.84%、12.05%、12.97%、13.12%、14.00%、9.791%、12.57%、13.86%、17.38%。由正交实验和数据处理结果可以看出，影响蒲公英多糖提取率的主次关系是：提取时间对蒲公英多糖的提取率影响最大，超声功率的大小影响其次，然后是料液比，提取的温度影响较小。正交实验所获得的优化提取工艺条件为：超声功率60W，料液比1:40，超声处理的时间30min，提取的温度为60℃。多糖的提取率为：13.98%。

　　2.3 超声波协同酶法提取蒲公英多糖的正交实验设计优化及实验结果

　　在正交设计时，以料液比1:40为固定条件，以提取温度、pH、酶量(%对底物)、提取时间为考察因素。正交试验设计表同表1，得到的提取率分别为：7.515%、7.543%、12.49%、14.01%、14.23%、9.183%、8.986%、14.86%、9.705%。由实验数据可以看出，影响蒲公英多糖提取率的主次关系是：提取时间对蒲公英多糖的提取率影响最大，提取温度的大小影响其次，然后是pH值，提取时所加的酶量对提取率的影响最小。正交实验所获得的优化提取工艺条件为：提取温度50℃，pH值为5.0，所加的酶量为底物的3%，提取时间为25min，提取率为：15.83%。

　　2.4 超声波协同酶法提取蒲公英多糖对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降糖作用的实验

　　结果见表2。表2 超声波协同酶法提取降糖作用的血糖结果

　　试验结果表明，超声波提取的蒲公英多糖对正常小鼠的血糖没有明显的作用，血糖仍然维持在相对恒定范围内。给药后，蒲公英多糖各剂量组血糖逐渐降低，与模型组相比较，蒲公英多糖的中剂量和高剂量组都在给药后14d后血糖值明显降低(P<0.01)，说明蒲公英多糖对四氧嘧啶所致的糖尿病小鼠具有显著的降糖作用。

　　【参考文献】

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