绝经后妇女血脂与单核细胞趋化因子受体CXCR2关系

　　【摘要】 目的 探讨绝经后妇女血脂与单核细胞趋化因子受体CXCR2表达的关系。方法 选择100例绝经后妇女，100例绝经前妇女，抽空腹静脉血，采用酶法测定低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL);明胶法分离外周血单核细胞、流式细胞仪测定单核细胞趋化因子受体CXCR2的蛋白表达，半定量PCR测定其mRNA水平。结果 绝经后妇女LDL水平明显上升，HDL水平明显下降;CXCR2蛋白表达及mRNA水平均升高;而CXCR2蛋白及mRNA表达水平与LDL_C水平呈正相关，与HDL水平呈负相关。结论 绝经后妇女血脂变化与单核细胞趋化因子受本CXCR2的增加有一定关系。

　　【关键词】 绝经 血脂 单核细胞 受体 CXCR2

　　Correlation between Blood Lipids and Chemokine Receptor CXCR2 of Monocytes in Post_menopause Women. LEI Zhu-bin, SHAO Zhi-hua, ZHENG Xiao-fang, et al. Department of Cardiology, Quhua Hospital, Zhejiang 324004, China

　　[Abstract] Objective To study the correlation between blood lipids and chemokine receptor CXCR2 of monocytes in post_menopause women. Methods 100 post_menopausal and 100 pre_menopausal women were included in this study. Fast venous blood was drawn from all subjects. High density lipoprotein (HDL) and low density lipoprotein (LDL) were measured by enzymic method. CXCR2 and mRNA were assayed by flow cytometry and semi_quantity PCR, respectively. Results Compared with pre_monopause controls, the content of LDL was significantly higher, and HDL was significantly lower in post_monopause women. In addition, protein and mRNA of chemokine receptor CXCR2 were significantly higher in post_monopause women. Correlation analyse showed that protein and mRNA of chemokine receptor CXCR2 were positively correlated with LDL, but negatively correlated with HDL. Conclusions The change of blood lipids is related with the increase of chemokine receptor CXCR2 in monocytes in post_monopause wamen.

　　[Key words] Post_Monopause; Blood lipids; Monocyte; Receptor; CXCR2 文献报道，绝经后妇女雌激素水平较绝经前有明显下降，但TC、TG、LDL_C水平明显升高，HDL_C水平明显下降，绝经后妇女雌激素与TC、LDL_C水平呈负相关，与HDL_C水平呈正相关[1]。妇女绝经前冠心病的发病率显著低于男性，而绝经后冠心病发病率剧增，短期内就可达到与男性相近水平。趋化因子受体已明确与冠心病基础病变—动脉粥样硬化的发生和发展有密切关系[2]。但到目前为止，有关各种血脂与趋化因子受体CXCR2水平的关系，尚未见文献报道[3]。本研究观察二者之间的关系，以探讨CXCR2在防治动脉粥样硬化中的作用机制。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料：选择本院门诊和健康体检的绝经1年以上的妇女100名，对照组为绝经前妇女100例，绝经前与绝经后的平均年龄分别为(34.4±16.6)和(64.3±8.7)。所有妇女无其它急慢性疾病，半年内未服用任何雌激素类药物及影响血脂代谢的药物。

　　1.2 血脂测定：禁食12h以上，空腹取不抗凝静脉血4ml，放置后分离血清，置于-40℃冻存集中检测;各项测定均由专人严格按规定方法操作，质控对照样品每次实验均进行，以保证准确和生化实验的精确。高密度脂蛋白(HDL_C)、低密度脂蛋白(LDL_C)采用酶法测定，由上海长征医学科学有限公司提供试剂，用芬兰产KONE.SUPRA全自动生化分析仪测定。

　　1.3 CXCR2测定：胎牛血清，RPMI 1640, TRIzol逆转录酶，辣根过氧化酶—羊抗免二抗均购自GIBCO公司;藻红蛋白—鼠抗体IgG1(AbIgG1)和藻红蛋白—鼠抗人CXCR2单克隆抗体(AbCXCR2)均购自Pharmigen公司;硝化纤维素膜和增强化学发光系统购自Amershan Pharmacia公司;其余试剂均购自Sigma公司。流式细胞仪(Becton Diksion公司)，PCR仪(美国Stratagene公司)。

　　外周血单核细胞分离：取肝素(10 U/ml)抗凝血，等量生理盐水稀释;在另一试管底部加入人淋巴细胞分离液，由上方缓慢加入2～3倍量的稀释血液;2000×g水平离心30min;制备成RPMI 1640单个核细胞悬液(2×106～4×106cells/ml)。取铺有明胶的塑料细胞培养瓶，加入单个核细胞悬液在5% CO2、37℃潮湿CO2孵箱中培育1h。洗去松散贴附的细胞，收获贴附的单核细胞。经流式细胞仪及非特性脂酶试剂盒鉴定收获的单核细胞，其纯度超过90%[4]。

　　流式细胞仪分析：单核细胞用冷缓冲液洗三次，100ul细胞悬液(含5×105个细胞)加1ug AbIgG1,或AbCXCR2在冰箱中培育45min后上机测定，根据细胞的光散射和大小确定单核细胞群。平均荧光强度(MFI)=MFICXCR2-MFIIgG1。

　　逆转录PCR:用TRIzol从1×106个单核细胞中提取总mRNA,用逆转录酶从2ug总RNA中合成第一条cDNA,而对照组不添加逆转录酶。引物按以下模板合成：CGGAATTCAAATGGAAGATTTTAACATGGAG (CXCR2, sense)，CCGCTCGAGTTAGAGAGTAGTGGAAG TGTG (CXCR2,antisense)，TCCATGACAACTTTGGCATC GTGG (GAPDH,sense)，GTTGCTGTTGA AGTCACAGGAGAC (GAPDH，antisense)。扩增cDNA链30个循环(90℃ 60 S变性，58℃ 60 S退火，72℃ 60 S扩增)。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳分析，特异性用DNA测序来确定。调整逆转录酶cDNA浓度以与PCR产物之间保持直线关系。内参照GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)用作对照。

　　1.4 统计方法：所获数据用SPSS软件处理，样本均数比较采用Student t检验，两变量相关分析采用直线相关与回归，P<0.05为有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 绝经对妇女血脂水平与CXCR2表达水平的影响：绝经后妇女LDL_C水平明显上升(P<0.01)，HDL_C水平明显下降P<0.01)，CXCR2蛋白及mRNA表达水平明显上升(P<0.01)见表1。表1 绝经前后血脂与CXCR2蛋白表达水平的变化注：与绝经前比较P<0.01

　　2.2 绝经后妇女血脂水平与单核细胞CXCR2蛋白表达水平的关系：绝经后CXCR2蛋白表达水平明显升高，绝经后外周血单核细胞CXCR2蛋白表达水平与LDL_C水平相关分析表明r=0.51呈正相关;与HDL_C水平相关分析表明r=-0.48呈负相关。

　　2.3 绝经后妇女血脂水平与单核细胞CXCR2 mRNA水平的关系：与CXCR2蛋白表达水平相似，绝经后外周血单核细胞CXCR2 mRNA表达水平与LDL_C水平呈正相关，相关分析表明r=0.54：与HDL_C水平呈负相关，相关分析表明r=-0.49.附图为绝经后妇女CXCR2 mRNA电泳图。

　　图 妇女单核细胞趋化因子受体CXCR2 mRNA水平3 讨论

　　动脉粥样硬化的过程中单核细胞趋化因子-1/CCR2对动脉粥样硬化的形成作用人们早已熟悉。而趋化因子系统成员中另一组CXC家族在动脉粥样硬化中的作用才逐渐得到重视[2]。Biasert等[6]曾研究白介素-8、GROα/CXCR-2这一对趋化因子系统在动脉粥样硬化形成中的作用。我们早期研究也显示：在外周血单核细胞及前单核细胞U937细胞上，有CXCR2的基因和蛋白表达，oxLDL浓度和时间依赖方式上调单核细胞CXCR2的蛋白及mRNA表达，而且其表达有其生理意义[7，8]。

　　既往研究表明绝经后妇女血脂代谢异常是冠心病发病率上升的主要危险因素之一。动物试验表明[9]：在切除卵巢的大鼠，注射17β_雌二醇(5和20μg·kg-1·d-1)显著减少了胆固醇诱导的CXCR2 mRNA及蛋白表达的增加。血脂变化与单核细胞CXCR2表达水平有一定的关联，它们同动脉粥样硬化的形成有联系。

　　本研究表明：与绝经前相比，绝经后妇女LDL_C水平明显上升，HDL_C水平明显下降，而CXCR2蛋白及mRNA表达水平明显上升。绝经造成雌激素下降，血脂代谢异常，升高外周血单核细胞CXCR2水平，而CXCR2表达水平增加又同动脉粥样硬化的发生与发展相联系。提示绝经造成冠心病危险性增加，可能与血脂水平的改变及外周血单核细胞CXCR2水平上升有关。

　　本文结果显示绝经后外周血单核细胞CXCR2表达水平与LDL_C水平呈正相关，与HDI_C水平呈负相关。血脂变化所致绝经后的冠心病危险性增加可能部分由于单核细胞表面趋化因子CXCR2的参与。至于绝经导致冠心病发病危险性增加中CXCR2同其配体即白介素-8、CROα等趋化因子如何配合，则有待今后进一步探讨。

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