p53和Ki67在人脑胶质瘤中的表达及意义

　　【摘要】 目的 探讨p53和Ki67在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法 采用SP免疫组织化学法检测10例正常脑组织及208例人脑胶质瘤组织中p53和Ki67的表达。结果 p53和Ki67在正常脑组织中均无表达。p53在Ⅰ～Ⅱ 级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中的阳性表达率分别为52.8%和74.1%，Ki67在Ⅰ～Ⅱ 级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中的阳性表达率分别为17.8%和67.1%。p53在Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中的表达明显高于其在正常脑组织和Ⅰ～Ⅱ 级胶质瘤组织中的表达(χ2=22.004，P=0.000;χ2=9.610，P=0.002)。p53在Ⅰ～Ⅱ 级胶质瘤组织中的表达明显高于其在正常脑组织中的表达(χ2=10.336，P=0.001)。Ki67在Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中的表达明显高于其在正常脑组织和Ⅰ～Ⅱ 级胶质瘤组织中的表达(χ2=16.765，P=0.000;χ2=51.596，P=0.000)。而Ki67在正常脑组织中及Ⅰ～Ⅱ 级胶质瘤组织中的表达差异无统计学意义(χ2=2.143，P=0.143)。结论 p53和Ki67在脑胶质瘤的发生中可能起重要作用，二者与胶质瘤的恶性程度相关。

　　【关键词】 胶质瘤,p53,Ki67

　　【Abstract】 Objective To investigate the expressions and significance of p53 and Ki67 in human glioma.Methods The expressions of p53 and Ki67 were detected by immunohistochemical methods in 208 cases of human glioma and 10 cases of normal brain tissues.Results There was no positive expression of p53 and Ki67 in normal brain tissues.However,in grade Ⅰ～Ⅱ and grade Ⅲ～Ⅳ gliomas,the positive expression rates of p53 were 53% and 74% respectively,and the positive expression rates of Ki67 were 18% and 67% respectively.The positive expression rate of p53 in grade Ⅲ～Ⅳ gliomas was significantly higher than that in normal brain tissues and in grade Ⅰ～Ⅱ gliomas(P<0.01).The positive expression rate of Ki67 in grade Ⅲ～Ⅳ gliomas was significantly higher than that in normal brain tissues and in grade Ⅰ～Ⅱ gliomas(P≤0.01),but there was no significant difference between the positive expression rate of Ki67 in grade Ⅰ～Ⅱ gliomas and that in normal brain tissues (P>0.05).Conclusion The p53 and Ki67 may play an important role in the pathogenesis of human glioma,which are correlated with the malignant degree of glioma.

　　【Key words】 glioma; p53; Ki67

　　p53基因突变是脑胶质瘤中最常见的基因突变，它使肿瘤细胞能在缺乏p53控制的情况下无性繁殖，导致肿瘤的恶性转化[1]。Ki67是一种与增值细胞相关的核抗原，是近年来被认为更能有效评估肿瘤细胞增殖活性的重要标志物[2]。本研究应用免疫组化方法检测人脑胶质瘤组织中p53、Ki67的表达，探讨二者与胶质瘤发生及恶性程度的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　收集首都医科大学附属北京天坛医院神经外科2009年9月至2010年8月手术切除并经病理证实的人脑胶质瘤标本208例，其中男114例，女94例;年龄13～67岁，平均年龄41.9岁。按2000年WHO中枢神经系统胶质瘤分类标准进行分级，并分为Ⅰ～Ⅱ级组和Ⅲ～Ⅳ级组。其中Ⅰ级5例，Ⅱ级118例，Ⅲ级51例，Ⅳ级34例。所有病例均为首诊患者，术前未经放化疗及生物治疗。另取10例脑外伤内减压获得的正常脑组织作为正常对照组。

　　1.2 方法

　　免疫组化(PV6000法)检测p53和Ki67蛋白表达。p53抗体、Ki67抗体、免疫组化试剂盒和DAB显色试剂均购自中杉公司。严格按照说明书操作。免疫组化染色中以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作阳性对照。

　　1.3 p53和Ki67染色结果判定

　　肿瘤细胞的细胞核内呈弥漫性棕黄色颗粒者为阳性细胞。每张切片均在高倍显微镜下选择肿瘤细胞密集区观察5个视野，计数每个视野的阳性平均细胞数。阳性细胞数<10%判定为阴性(-)，≥10%判定为阳性(+)。

　　1.4 统计学分析

　　应用SPSS 11.5统计软件,采用χ2检验，检验水准α=0.05，各组间比较采用χ2检验，检验水准α=0.017。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 p53的表达

　　p53蛋白阳性染色定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状(图1)。光镜下10例正常脑组织中p53均呈阴性表达。在208例人脑胶质瘤组织中，p53阳性表达128例，阳性率61.5%。其中Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤组中阳性65例，阳性率52.8%，Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组中阳性63例，阳性率74.1%。2胶质瘤组的p53阳性率差异有统计学意义(χ2=9.610,P=0.002)。Ⅰ～Ⅱ级组及Ⅲ～Ⅳ级组中p53的阳性表达率均高于正常对照组，且差异有统计学意义(χ2=10.336，P=0.001;χ2=22.004，P=0.000)。

　　2.2 Ki67的表达

　　Ki67阳性染色定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状(图2)。光镜下10例正常脑组织中Ki67均呈阴性表达。在208例人脑胶质瘤组织中， Ki67阳性表达79例，阳性率37.9%。其中Ⅰ～Ⅱ级组中阳性22例，阳性率17.8%，Ⅲ～Ⅳ级组中阳性57例，阳性率67.1%。两胶质瘤组的 Ki67阳性率差异有统计学意义(χ2=51.596,P=0.000)。Ⅲ～Ⅳ级组中Ki67的阳性表达率均高于正常对照组，且差异有统计学意义(χ2=16.765，P=0.000)。Ⅰ～Ⅱ级组中Ki67的阳性表达率虽高于正常对照组，但差异无统计学意义(χ2=2.143，P=0.143)。图1 p53在胶质瘤中的表达,×400图2 Ki67在胶质瘤中的表达,×400

　　3 讨论

　　野生型p53基因是一种抑癌基因，其表达的野生型p53蛋白在抑制恶性增殖过程中起重要作用。当某种原因使DNA受损时，它能使细胞分裂中止于G1/S期，以便有足够的时间修复损伤，如果不能修复，就启动凋亡过程，保证有癌变倾向的细胞不再存活。野生型p53基因一旦发生突变，不但失去抑制肿瘤的作用，而且还能促进肿瘤细胞的生长与增殖[3]。由于野生型p53蛋白半衰期较短，免疫组化方法检测到的肿瘤组织中的p53蛋白大多是突变型p53基因的产物，即突变型p53蛋白，它是一种癌蛋白。突变型p53蛋白无野生型p53蛋白的功能，不能保持基因的稳定性，使细胞持续增殖，诱发细胞癌变[4]。研究表明，脑胶质瘤的发生、发展与p53失活及p53基因突变率增加有关[5]。本研究中，Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤组织中p53的阳性表达率分别为52.8%和74.1%，均高于正常对照组的阳性表达率(0)(P=0.001，P=0.000)。该结果提示p53的表达与胶质瘤的发生相关。两胶质瘤组相比，p53的阳性表达率差异有统计学意义(P=0.002)，说明p53的表达与胶质瘤的恶性程度相关，随恶性程度升高，p53的阳性表达率上升。

　　研究表明Ki67的表达能可靠而迅速地反应恶性肿瘤的增殖率，与多种恶性肿瘤的发展、转移及预后有关[6，7]。Ki67抗原是存在于增殖细胞核的一种非组蛋白性核蛋白，是与细胞增殖相关的核抗原，与增殖细胞核抗原相比具有半衰期短，不易受生长因子诱导等优点，因此计算增殖指数相对精确[8]。本组实验中，只有Ⅲ～Ⅳ级组中Ki67的阳性表达率高于正常对照组(P=0.000)，而Ⅰ～Ⅱ级组的Ki67阳性表达率虽高于正常对照组，但差异无统计学意义(P=0.143)，提示Ki67过表达与胶质瘤的发生有关,可能是胶质瘤形成过程中的晚期事件。两胶质瘤组相比，Ki67的阳性表达率差异明显(P=0.000)，表明Ki67与胶质瘤的恶性程度相关，随胶质瘤恶性程度升高，其阳性表达率上升。

　　【参考文献】

　　1Hechler D,Nitsch R,Hendrix S.Greenfluorescentproteinexpressing mice as models for the study of axonal growth and regeneration in vitro.Brain Res Rev,2006,52:160169.

　　2 王俊，袁志诚，施洋.P53,Ki67，VEGF和MMP9在胶质瘤中的表达及意义.江苏大学学报医学版,2007，17：228231.

　　3 曾义，龙晓东，游潮,等.脑胶质瘤组织中MDM2、p53、p14ARF和p21ARF1蛋白表达及意义.肿瘤杂志，2009，15：541544.

　　4 胡涛，刘宝来，田新华.p14ARF和p53蛋白表达与脑胶质瘤发生发展的相关性研究.临床医药实践，2010，19:563565.

　　5 徐恩相，李峰.p53、p14ARF蛋白与脑胶质瘤发生发展的相关性研究.实用全科医学，2007，5：390391.

　　6 Schwartz A,Gaigalas AK,Wang L,et al.Formalization of the MESF unit of fluorescence intensity.Cytometry B Clin Cytom,2004,57:16.

　　7 Kay S,Herishanu Y,Pick M,et al.Quantitative flow cytometry of ZAP70 levels in chronic lymphocytic leukemia using molecules of equivalent soluble fluorochrome.Cytometry B Clin Cytom,2006,70:218226.

　　8 Winston KR,Welch K,Adler JR,et al.Cerebral icortioectomy for epilepsy.J Neurosurg,1992,77:889895.