多种耐药基因蛋白在乳腺癌和三阴乳腺癌中表达差别的研究

　　【摘要】 目的 比较分析多种耐药相关基因蛋白在乳腺癌和三阴乳腺癌表达差别，进一步了解三阴乳腺癌的耐药特性，为临床治疗三阴乳腺癌选择化疗方案提供依据。方法 选取术前未行化疗及内分泌治疗的的62例乳腺癌标本，其中三阴乳腺癌病例20例。采用免疫组化方法检测LRP、p170、谷胱甘肽S转移酶(GSTπ)、TopoⅡa在乳腺癌、三阴乳腺癌、非三阴乳腺癌中表达差别。结果 p170、LRP、GSTπ、TopoⅡa四种耐药基因相关蛋白在所有乳腺癌病例中阳性表达率分别为41.94%，59.68%，56.45%，62.90%，p170、LRP、GSTπ、TopoⅡa在非三阴组与三阴组阳性表达率分别为和40.48%，59.52%，47.62%，57.14%和45.00%，60.00%，75.00%，75.00%，其中GSTπ在2组中的表达差异有统计意义(P<0.05)。2组乳腺癌中多基因共表达率分别为40.00%、11.90%，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 初治乳腺癌中存在多个耐药基因蛋白表达及共表达，三阴乳腺癌比非三阴乳腺癌化疗耐药性强，化疗效果不如非三阴组敏感。GSTπ表达强于非三阴组，提示三阴乳腺癌预后较差，化疗不敏感。

　　【关键词】 乳腺癌,三阴乳腺癌,耐药基因蛋白,LRP;p170;GSTπ;TopoⅡa

　　【Abstract】 Objective To investigate the different expression of several different types of drug resistance associated protein between breast carcinoma and triple negative breast carcinoma,and to explore the characteristics of drug resistance protein of triple negative breast carcinoma. Methods The expressions of drug resistance associated protein p170,LRP,GSTπ,TopoⅡa were detected in 62 cases of breast carcinoma without chemotherapy and endocrine therapy, including 20 cases of triple breast carcinoma and 40 cases of nontriple breast carcinoma by immunochemistry.Results The positive rates of p170, LRP,GSTπ,TopoⅡa in 62 cases of breast carcinoma were 41.94%,59.68%,56.45%, 62.90% respectively,which in nontriple negative breast carcinoma group were 40.48%,59.52%, 47.62%,57.14% respectively,and the positive rate in triple negative breast carcinoma group were 45.00%,60.00%,75.00%,75.00% respectively. The positive expression of GSTπ in triple negative breast carcinoma group was significantly higher than that in nontriple negative breast carcinoma group (P<0.05). The coexpression of drug resistance protein in triple negative breast carcinoma group was significantly higher than that in nontriple negative breast carcinoma group (P<0.05). Conclusion The expression and coexpression of drugresistance protein exist in initialtreated breast carcinoma. Chemotherapy may be less sensitive to triple breast carcinoma. The higher expression of GSTπ in triple breast carcinoma may imply poorer outcome of triple breast carcinoma.

　　【Key words】 triple negative breast carcinoma; drug resistance associated protein ;LRP;p170;GSTπ;TopoⅡa

　　乳腺癌耐药基因蛋白表达研究很多，但关于分析三阴型乳腺癌耐药蛋白与非三阴乳腺癌表达区别的研究未见报道。本研究比较分析三阴乳腺癌者中耐药基因表达情况，深入了解三阴型乳腺癌耐药情况。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　选择我院2004至2006年乳腺癌手术切除标本62例，均经病理确诊，且术前未经化疗，均为女性，年龄29～72岁，平均年龄44.2岁。按WHO乳癌组织学分类:浸润性导管癌56例，导管内癌1例，浸润性小叶癌1例，微乳头癌1例，浸润性筛状癌3例，56例浸润性导管癌中包括三阴乳腺癌20例。

　　1.2 方法

　　标本用甲醛固定，石蜡包埋，连续切片4 μm厚。采用SABC法进行免疫组化染色。鼠抗人P170单克隆抗体，鼠抗人GSTπ单克隆抗体，鼠抗人T单克隆抗体、购自福州迈新生物技术公司，鼠抗人LRP单克隆抗体,SABC试剂盒购自上海长岛生物工程有限公司，鼠抗人ER、PR单克隆抗体购自上海长岛生物技术有限公司。抗体标记前切片经微波修复抗原，用已知阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照，DAB显色。具体操作过程如下:4μm石蜡切片，常规脱蜡水化和微波抗原修复，加50 pl过氧化氢酶阻断溶液，室温下孵育10 min，然后加50 pl正常非免疫动物血清。室温下孵育10 min，除去血清，加50 μl的一抗，4℃过夜后加50 μl生物素标记的二抗，室温下孵育10 min，加50 μl链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶溶液，室温下孵育10 min，加100 μl新鲜配制的DAB溶液显色，苏木素复染。

　　1.3 结果判定

　　阳性细胞褐色细粒状，P170位于细胞膜细胞质，LRP位于细胞膜细胞质,谷胱甘肽S转移酶(GSTπ)表达多位于细胞浆，TopoⅡa，ER和PR均位于细胞核CerBb2。根据肿瘤细胞的阳性数进行判断，用高倍视野随机计数500个肿瘤细胞中的阳性细胞所占比例，将结果分为:阳性细胞<10%(-)，10%～30%(+)，31%～50%(++)，>50%(+++)，(+)～(+++)均为阳性。

　　1.4 统计学分析

　　计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 62例乳腺癌组织中P170、LRP、GSTπ、TopoⅡa的表达见表1。表1 62例乳腺癌组织中P170、LRP、GSTπ、TopoⅡa表达

　　2.2 三阴乳腺癌组耐药基因P170、LRP、GSTπ、TopoⅡa表达见表2。表2 三阴乳腺癌组织中P170、LRP、GSTπ、TopoⅡa表达

　　2.3 非三阴乳腺癌组各种耐药基因表达见表3。表3 非三阴乳腺癌组织中P170、LRP、GSTπ、TopoⅡa表达

　　2.4 三阴乳腺癌组和非三阴乳腺癌组GSTπ表达率分别为75%(15/20)和47.63%(20/22)，2组差异有统计学意义(P<0.05)。

　　2.5 多药耐药基因共表达率三阴乳腺癌组与非三阴乳腺癌组分别为40.0%(8/20)和11.9(5/42)，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

　　3 讨论

　　杨德宏等[1]研究表明三阴型乳腺癌组织学类型主要为髓样癌，组织学分级Ⅲ级的比例较高，复发转移率高于非三阴型乳腺癌(P<0.05)。三阴型乳腺癌和非三阴型乳腺癌5年无瘤生存率分别为78.9%和87.3%，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。三阴型乳腺癌比非三阴型乳腺癌易发生局部复发和远处转移，临床预后差。

　　关于乳腺癌耐药基因研究很多，但关于三阴乳腺癌耐药基因表达情况的研究很少。P170、LRP、GSTπ、TopoⅡa是乳腺癌组织中常见的几个耐药相关基因蛋白，国内外研究[2，3]它们在乳腺癌中均有表达，表达率分别为LRP 57.99%，GSTπ 32.79%和P170 38.12%，本实验研究结果P170、LRP、GSTπ、TopoⅡa各耐药基因阳性表达率分别为41.94%，59.68%，56.45%，62.90%，与文献部分一致，提示乳腺癌在初治时确实存在较为普遍的原发性耐药现象。

　　LRP是一种具有药物流出泵功能的蛋白，但不属于ATP结合盒式转运蛋白家族成员，主要介导烷化剂和顺铂等药物耐药。P170是一种ATP依赖型药物排出泵，位于细胞膜上，可耗能将细胞内药物泵出细胞外，使细胞内药物浓度下降，降低对肿瘤细胞的毒性，由此产生了多药耐药性。P170产生耐药的的药物是蒽环类如ADM、长春新碱、紫杉醇和阿霉素，与烷化剂、铂类药物无关。GSTπ是一组具有解毒保护功能的同工酶家族，其中GSTπ主要与天然药物如长春新碱、鬼臼乙叉昔等耐药有关[4]。TopoⅡa在DNA复制、转录和染色体分离中起着重要作用，与TopoⅡa有关的化疗药物有鬼臼毒素、蒽环类、蒽酿类。

　　本组实验表明LRP、P170、GSTπ、TopoⅡa三种耐药基因蛋白在乳腺癌肿表达率分别为、与文献相一致，其中LRP、P170、TopoⅡa在三阴组与非三阴组表达率差别无显著差异，提示二者上述化疗药物敏感性无差别。这与文献中提到的三阴乳腺癌可能对烷化剂、蒽环类、铂类敏感结论一致[5]。本组实验GSTπ的阳性表达率在三阴组表达率明显高于非三阴组，提示三阴乳腺癌的耐药性可能比非三阴组强，某些化疗药如长春新碱、鬼臼乙叉昔化疗效果可能不如三阴组明显，这与文献报道结论一致[5]。目前认为，在正常乳腺组织中几乎检测不到GSTπ蛋白表达，乳腺癌组织GSTπ 蛋白表达较乳腺正常组织显著增高[6]，这种高表达可能是一种诱导表达的结果，其耐药机制主要是GSTπ过度表达不仅可以催化亲电性烷化剂与谷胱甘肽结合，使其更有极性而加强外排，还可直接与亲电物质结合，消除自由基或过氧化物，保护肿瘤细胞，导致化疗的失败。Huang等[7]发现，GSTπ与任何临床病理因素均无关，但GSTπ阳性肿瘤更具侵袭性，患者无瘤生存期短，预后差，提示GSTπ表达是乳腺癌预后不良的指征。本实验结果三阴乳腺癌组GSTπ的表达高于非三阴组，与上述结论一致，提示GSTπ的表达可能是三阴乳腺癌预后较差，化疗不敏感的指标。

　　本实验的结论提示三阴乳腺癌耐药性不完全同于非三阴乳腺癌，其总体共表达率阳性率高于非三阴乳腺癌组(P<0.05)，提示三阴乳腺癌病例可能化疗更困难，从而临床工作中选用合理化疗方案组合，或者研究进一步了解肿瘤的分子机制和潜在的靶点，从而选择靶基因治疗可能更有效。

　　【参考文献】

　　1 杨德宏，刘红，赵晶，等.三阴型乳腺癌临床病理特征及预后分析.中国肿瘤临床，2008，35：501504.

　　2 刘鹏熙,李幸运,周瑞芳.多种耐药基因蛋白在初治乳腺癌中的表达.临床肿瘤学杂志,2007,12：669675.

　　3 Rybbrovb S,Hodorovb I,Hajdukova M,et al .Expression of MDR proteins in breast cancer and its correlation with some clinical and pathological parameters.Neoplasma, 2006,53:128130.

　　4 郭威，宋光，苑凤昌.P糖蛋白和谷胱甘肽硫转移酶在胃癌组织中的表达及临床意义.中国全科医学，2006，9：20352036.

　　5 孙冰，吴世凯，宋三泰，等，ER、PR、HER2均阴性乳腺癌人群的研究进展.癌症进展杂志，2007，5：549552.

　　6 Sreenath AS,Kumar KR,Reddy GV,et al.Evidence for the associationof synaptotagmin with glutathione Stransferases:implications for a novel function in human breast cancer.Clin Biochem,2005,38:436444.

　　7 Huang J,Tan PH,Thiyagarajan J,et al.Glutathion Stransferasepi ininvasive breast cancer.Mod Pathol,2003,16:558565.