大蒜素对胃癌细胞BGC823增殖影响的研究

　　作者：张智龙，苏丽娜,荣慧，陈琳琳，侯毅鞠* 作者单位：(吉林医药学院检验系，吉林 吉林132013)

　　【摘要】 目的研究大蒜素对胃癌BGC823细胞增殖的影响。方法通过细胞培养技术、瑞氏染色、MTT实验方法，观察大蒜素对胃癌细胞生长的影响。结果BGC823细胞在大蒜素的作用48 h后，出现体积变小、核固缩等形态学改变。大蒜素对胃癌细胞的生长曲线有明显的抑制作用，其抑制作用与大蒜素的浓度和时间呈正相关。结论大蒜素对体外培养的BGC823细胞具有明显的增殖抑制作用。

　　【关键词】 大蒜素,胃癌,BGC823细胞

　　Abstract:ObjectiveTo study the effects of allicin on proliferation of gastric cancer BGC823 cells. MethodsCell growth inhibition was detected by the method of cell culture technology,auspicious dye and MTT test. ResultsBGC823 cells showed morphologic changes induced by allicin after 48 h,including cell shrinkage,Karyopyknosis and so on.Cell growth curve showed that growth of BGC823 cells was significantly inhibited and the inhibition become stronger as the concentration and time increases.ConclusionAllicin inhibited the growth of BGC823 cells in vitro culture significantly.

　　Key words:allicin;gastric cancer;BGC823 cell

　　大蒜在我国民间药用已有三千多年的历史，在《本草纲目》和《验方新编》中就有关于大蒜药用价值的记载[1]。大蒜素(又名大蒜注射液)是对大蒜进行重整获得的挥发油，有效成分为大蒜辣素。大蒜辣素不仅具有抗菌消炎的作用，而且可以抑制多种癌细胞的生长并诱导其凋亡。胃癌的发生和发展与细胞凋亡关系密切，诱导细胞凋亡已成为治疗胃癌的新手段。大蒜素作为一种可诱导细胞凋亡的天然药物，有望为胃癌治疗开辟一条新途径[2]。本研究将对大蒜素抑制胃癌细胞的生长作用加以探讨。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　大蒜素注射液(三硫二丙烯)购自安徽华源医药有限公司，BGC823细胞为吉林医药学院检验系细胞培养室冻存细胞株。

　　1.2细胞生长状态观察

　　常规培养胃癌细胞至对数生长期[3]，将对数生长期细胞均匀的分成7组(每组设有1个对照孔和5个实验复孔)，以每孔106个细胞接种于96孔细胞培养板中，分别向7组中加入大蒜素使终浓度分别为5 μg/mL、10 μg/mL、15 μg/mL、20 μg/mL、25 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL，其中对照孔中只加入相同体积含10%小牛血清的1640完全培养液，分别于培养24 h、48 h、72 h和96 h时在倒置显微镜下观察细胞形态并照相。

　　1.3瑞氏染色观察

　　取对数生长期细胞,同样将细胞均匀分成7组，分别接种于灭菌处理后放有盖玻片的细胞培养皿中,加入大蒜素使终浓度分别为5 μg/mL、10 μg/mL、15 μg/mL、20μg/mL、25 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL，培养24 h、48 h、72 h和96 h。终止培养后取出盖玻片，自然干燥，滴加瑞氏染液染色1 min，再滴加等量的PBS(磷酸盐缓冲液)，轻轻晃动玻片，混匀，静置5 min;水洗、吸干、镜检观察并照相。

　　1.4MTT法检测

　　取对数生长期细胞，以106个/mL细胞接种到96孔板，每孔体积200 μL。按照药物作用浓度设置7个实验组，使大蒜素终浓度为5 μg/mL、10 μg/mL、15 μg/mL、20 μg/mL、25 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL。每个浓度组分别设置5个实验复孔，并设置1个调零孔。分别于培养24 h、48 h、72 h加20 μL MTT溶液,继续培养4 h后加二甲基亚砜，微量振荡器振荡10 min，在490 nm酶联免疫检测仪检测,记录OD值，并求出生长抑制率(IR),IR(%)=(1-用药组平均OD值/对照组平均OD值)×100%,以时间为横轴，IR为纵轴绘制细胞生长的抑制曲线,并计算出药物的半数抑制浓度(IC50)[4]。

　　2结果

　　2.1大蒜素对BGC823细胞生长状态的影响

　　倒置显微镜观察经不同浓度大蒜素作用后48 h细胞的形态，与对照组对比，细胞间隙变大，细胞浆中出现颗粒样变化，细胞形态改变，体积变小、变圆，有的呈悬浮状态，见图1。对照组15 mg/L大蒜素组图1BGC823细胞生长状态(40×)

　　2.2瑞氏染色

　　瑞氏染色法染色后，经大蒜素作用48 h的细胞出现退行性变，细胞体积变小、变圆，胞质浓染、结构模糊、边缘不清晰、核固缩、深染等特征,见图2。对照组15 mg/L大蒜素组图 2 BGC823细胞生长状态(40×)

　　2.3MTT检测

　　MTT检测结果显示：大蒜素对胃癌细胞具有明显的抑制增殖作用，并且随着药物浓度的增加和作用时间的延长，抑制作用越强、抑制率越大，并求得药物半数抑制浓度(IC50)为15 mg/L。见图3。图 3不同浓度大蒜素对BGC823细胞的抑制作用

　　3讨论

　　胃癌是常见的消化道肿瘤，在我国发病率较高，临床上主要采用外科切除、药物化疗和放射治疗等方法治疗胃癌，手术切除如不彻底,易复发，而药物化疗和放射治疗手段除了杀伤肿瘤细胞以外，对宿主的免疫系统也造成了伤害，且治疗效果不甚理想。而大蒜作为日常生活中常见的食物，不仅仅价格低廉，而且其主要成分大蒜素，含有一些特殊的具有生物活性的物质，如含硫化合物(蒜氨酸、蒜油、蒜素、阿霍烯等)、微量元素(高含量的锗、硒、磷、镁等)、超氧化物歧化酶(SOD)等，使大蒜具有广泛的药效，尤其具有良好的抗菌消炎和抗肿瘤的作用[5]，先前已有资料证明大蒜素对肝、胃、结肠、宫颈、乳房等多种肿瘤均有抗癌活性,作用广泛[6]。

　　本实验观察到胃癌细胞经不同浓度的大蒜素作用后，细胞形态发生明显的改变，与对照组的细胞相比可见细胞体积明显变小、变圆，胞浆中出现明显颗粒样和空泡样改变，有的甚至悬浮，说明不同浓度的大蒜素对胃癌细胞都具有杀伤作用[7]。另外，通过细胞生长曲线的绘制、MTT检测，进一步证明了大蒜素对胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用，并且随着大蒜素浓度的梯度增加和作用时间的延长，其抑制作用也随之增大。生长曲线是观测细胞在一代生存期内增生过程的重要指标，MTT比色实验是一种检测细胞存活和生长的方法,通过这些实验方法都能进一步证明不同浓度大蒜素对胃癌细胞增殖具有抑制作用，为进一步研究大蒜素抑制胃癌细胞生长机制奠定基础。

　　本实验证明了大蒜素对胃癌细胞BGC823增殖具有抑制作用，随着免疫组化技术、分子生物学等技术的发展，对各种药物的药理作用机制研究已经广泛而深入，所以应进一步明确大蒜素中各种成分的药理作用，并且进一步探讨大蒜素抑制胃癌细胞生长机制，从而开发出新的抗癌药物，对肿瘤的治疗产生深刻的影响。

　　【参考文献】

　　[1]黄泰康.常用中药成分与药理手册[M].北京:中国医药科技出版社,1994:905.

　　[2]梁卫江,张万岱,马业俊,等.大蒜油对胃癌细胞增殖的抑制作用[J].中国中西医结合消化杂志,2006,14(4)：252.

　　[3]司徒镇强,吴军正.细胞培养[M].北京:世界图书出版公司,1996:175177,186187,298305.

　　[4]晏莉，黄起壬.大蒜素药理作用和作用机理的探讨[J].实用临床医学,2008,9(1):134135.

　　[5]郑国华,李会庆.大蒜油和白藜芦醇联合应用对胃癌细胞抑制作用及其机制[J].福建中医学院学报,2006,16(6):3436.

　　[6]Siu C W,Lau C P,Tse H F.Prevention of atrial fibrillation recurrence by statin therapy in patients with lone atrial fibrillation after successful cardioversion[J].Am J Cardiol，2003，92(11)：13431345.

　　[7]王海燕,许才绂,王庆莉.大蒜素对胃癌细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用[J].肿瘤防治研究,2001,28(2):9497.