天合保肾合剂对糖尿病肾病大鼠氧化损伤的影响

　　【摘要】 [目的]观察天合保肾合剂对糖尿病肾病大鼠氧化损伤的影响。[方法]大鼠经背部切除单侧肾，2周后以链尿佐菌素(STZ)尾静脉注射诱导DN模型,观察天合保肾合剂对糖尿病肾病大鼠肾组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响。[结果]天合保肾合剂能够显著降低糖尿病肾病大鼠肾组织MDA含量,升高SOD、GSHPx活力,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。[结论]天合保肾合剂具有显著的抗氧化损伤的作用。

　　【关键词】 天合保肾合剂;糖尿病肾病;大鼠

　　Effects of Tianhe Baoshen Mixture on Oxidative Damage in Diabetic Nephropathy Rats

　　Qian Yanxin,Zhou Daxing,Chen Anping,et al

　　College of Pharmacy,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou( 310053)

　　Abstract：[Objective]To observe the effects of Tianhe Baoshen mixture on oxidative damage in Diabetic Nephropathy rats.[ Methods]Rats were cut the kidney of single side from the back;two weeks later,establish the DN rat model by vena caudalis injection of STZ,observe the effects of Tianhe Baoshen mixture on GSHPx,SOD,MDA of kidney tissue in Diabetic Nephropathy rats.[ Results]Tianhe Baoshen mixture could degrade MDA content,and increase SOD,GSHPx activity significantly;compared with the DN model group,there was significant difference(P<0.01).[Conclusion]Tianhe Baoshen mixture has significant effect of antioxidative damage.

　　Key words: Tianhe Baoshen mixture;diabetic nephropathy;rat

　　糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN) 系指糖尿病时发生的肾小球、肾小管、肾间质和肾血管病变，是导致终末期肾病的首要原因。本研究针对DN与肾阳衰败，湿浊内停，血瘀相关，选用具有温肾益气，解毒活血，疏肝泻浊功效的天合保肾合剂，采用大鼠糖尿病肾病模型，从氧化损伤的角度，观察了各种抗氧化酶对DN的作用，以阐明该方防治DN的作用机理。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物 选用纯系的雄性SD大鼠，体重200～250g(浙江中医药大学动物实验中心提供)。

　　1.2 药品与试剂 天合保肾方系由柴胡、半枝莲、生黄芪、附子、黄芩、海藻、地鳖虫、黄连、土茯苓、水蛭组成，实验用浓缩水煎剂(含生药量1.5g/ml);卡托普利片(批号0608115)浙江得恩德制药有限公司生产;STZ，sigma公司;MDA(批号20060907)、GSHPx(批号20060907)、SOD(批号20060906) 试剂盒均为南京建成生物工程公司产品。观察TGL16G常温高速离心机，湖南星科科学仪器有限公司;电热恒温水浴锅(DKS12型),上海森信实验仪器有限公司。

　　1.3 模型的建立 大鼠腹腔注射3% 戊巴比妥钠进行麻醉，经背部切口切除右肾后缝合伤口,连续3d肌肉注射青霉素钠。14d后将大鼠禁食16 h，正常组注射等量枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液，其余各组大鼠尾静脉1次性注射STZ(55mg/kg)建立动物模型[1]。5d后大鼠眼眶静脉丛采血测血糖，血糖浓度大于16.7mmol/L为造模成功。

　　1.4 分组与给药 糖尿病模型大鼠随机分为5组，即模型组20只,天合保肾合剂高、中、低(25g/kg、15g/kg、9g/kg)剂量组、卡托普利阳性对照组(50mg/kg)各20只，另设正常组12只，造模成功血糖稳定后，每组每天灌胃1次，连续给药8周，模型组和正常组均给等量的生理盐水。

　　1.5 指标的测定 肾皮质SOD、GSHPx、MDA含量测定　给药第8周末,大鼠处死后取左肾组织，分离肾皮质，准确称取肾组织重量，按重量体积比加9倍冰冷生理盐水制成10%的组织匀浆，低温离心机离心，取上清液生化分析仪测定SOD、GSHPx、MDA值。

　　1.6 统计学处理 各组数据均以x±s表示，应用SPSS11.5软件分析，多组间的比较用方差分析。

　　2 结果

　　天合保肾合剂对DN大鼠肾组织SOD、GSHPx、MDA含量的影响见表1。

　　表1 天合保肾合剂对DN大鼠肾组织SOD、GSHPx、MDA的影响(略)

　　与模型组比较：*P<0.01

　　由表可见:与空白组比较，模型组大鼠肾组织SOD活性、GSHpx活性均下降，MDA含量升高，说明DN组大鼠肾组织存在着明显的氧化损伤。与模型组比较，天合保肾合剂高、中、低剂量组肾组织SOD活性、GSHpx活性升高，MDA含量下降。

　　3 讨论

　　DN的发病机制十分复杂,目前认为是在遗传背景基础上多因素综合作用的结果。而越来越多的体内、外实验证实糖尿病情况下存在明显的氧化应激(Oxidative stress)反应增强。因此，氧化应激可能在糖尿病肾病的发生、发展中起重要作用。氧化应激反应中产生的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)在DN的发生发展上起关键性作用,可能是其主要发病机制之一。ROS包括超氧阴离子、羟自由基和过氧化氢等。生理状态的自由基有刺激细胞生长作用,当自由基的产生和清除的平衡状态被打破,自由基大量堆积,对蛋白质、脂肪和核酸均具有损害作用,造成氧化损伤,形成各种不良病理后果[3]。

　　肾脏对氧化损伤敏感,多项研究认为氧化应激在糖尿病肾病的发病中起重要作用[4]。氧化应激对肾组织的损伤可能涉及许多方面,包括ROS对肾组织细胞的直接损伤与间接损伤。本研究表明，糖尿病肾病模型建立8周后，模型组大鼠肾皮质SOD活性、GSHpx活性均下降，MDA含量升高，说明模型组大鼠肾组织存在着氧化损伤，而药物组的抗氧化酶都有一定程度的上升，丙二醛含量下降，说明天合保肾合剂具有抗氧化损伤的作用，从而对糖尿病肾病起到一定程度的治疗作用。

　　本实验结果显示，糖尿病肾病大鼠存在脂质过氧化水平升高及抗氧化酶活力的下降，天合保肾合剂能减轻糖尿病肾病大鼠的氧化损伤，使机体过氧化脂质下降，抗氧化酶水平升高，从而起到保护肾脏延缓糖尿病肾病进展的作用。

　　【参考文献】

　　[1] 刘学政.实验性链尿佐菌素糖尿病动物模型的建立与研究[J].四川解剖学杂志，1996，4(3):45.

　　[2] 王海燕.肾脏病学[M].北京:人民卫生出版社,1997：949.

　　[3] 郑美玲，樊均明.氧化应激对糖尿病肾病对细胞、细胞外基质及血管通透性的影响机制[J].中国组织工程研究与临床康复，2007，11(25)：49884991.

　　[4] Ha H,Lee HB.Reactive oxygen species as glucose signaling molecules in mesangial cells cultured under high glucose[J].Kidney Int,2000,58(Suppl 77):S19S25.