哈萨克族传统发酵乳酪乳清的抗炎作用

　　【摘要】 目的: 探讨新疆哈萨克族(哈族)传统发酵乳酪乳清的抗炎作用及其抗炎机制。方法: 急性抗炎作用以阿司匹林为阳性对照,采用角叉菜胶致小鼠足肿胀模型;慢性抗炎作用以布洛芬为阳性对照,采用棉球植入大鼠腋下致肉芽肿模型。在角叉菜胶致大鼠背部气囊滑膜炎模型, 测定灌洗液中白细胞计数灌洗液量及血清中C 反应蛋白(CRP) 、丙二醛(MDA)含量,观察乳酪乳清的抗炎作用。结果: 新疆哈族传统发酵乳酪乳清对角叉菜胶致小鼠足肿胀和棉球致大鼠肉芽肿形成均有显著的抑制作用，乳酪乳清能明显减少角叉菜胶致大鼠背部气囊滑膜炎模型渗出液体量, 降低灌洗液中白细胞计数和血清中CRP、MDA含量。结论: 乳酪乳清具有显著的抗炎作用，与其抑制炎性因子的渗出、降低CRP 含量及消除自由基、抑制脂质过氧化有关。

　　【关键词】 抗炎作用; 乳酪乳清; C反应蛋白; 丙二醛

　　A preliminary study on antiinflammatory effects and mechanisms of Xinjian Kazakh traditional fermented cheese whey

　　Xinhua·Nabi, ZHANG Yanzhi, MA Chunyan, et al

　　Department of Pharmacology, Xingjian Medical University, Urmuqi 830011, China

　　Abstract:　Objective: To study the antiinflammatory activity and the antiinflammatory mechanisms of the fermented cheese whey, a kind of traditional Kazakh medicine. Methods: An acute inflammatory reaction model employing as carrageenan inflammagen to induce mouse ear edema and swelling, and a chronic inflammatory reaction model placing cottons into abdominal cavity of rats to induce granuloma were set up to test antiinflammatory activity of Xingjian Kazakh traditional fermentation cheese whey. To study the mechanism of antiinflammatory action of fermentation cheese whey Rat airpouch acute inflammatory model was used by sc injection of carrageenan. Then determine the amount of WBC (white blood cell) count, and CRP, MDA content of blood serum. Results: Fermented cheese whey showed significant inhibitions of inflammatory activities in all, and fermented cheese whey can reduce the amount of effusions, decrease WBC count, and CRP, MDA content of blood serum. Conclusion: The mechanism of antiinflammatory action of fermentation cheese whey is related to his reduction of inflammatory agent and CRP and MDA contents.

　　Key words: antiinflammatory activity; fermentation cheese whey; Creaction protein; molondialdehyde

　　人类利用乳酸菌已有很长的历史,公元76 年,罗马历史学家Plinius就认为饮用发酵奶可以治疗胃肠炎。俄罗斯的诺贝尔奖获得者、微生物学家Elie Metchnikoff发现,一些地区的居民由于食用含有微生物的发酵乳制品, 从而延年益寿, 该现象引起对此类微生物的研究[1]。目前益生菌及其健康促进功效已成为世界各国科学家深入研究的焦点问题。益生菌对机体免疫系统的调节、抑制及降低肿瘤的危险及营养、抗衰老等作用已经被大众所认识。随着对益生菌作用分子机制的研究,不断从发酵乳中分离得到具有降血压作用的多肽、抑菌肽和调节免疫作用的物质[2，3]。乳酪乳清是将阿勒泰草原牛奶通过传统发酵菌发酵，利用新疆哈萨克族(哈族)传统的发酵工艺，制备成乳酪后留下的乳清部分。乳酪乳清是一种民族药，在我国新疆哈萨克族居住地已有数千年的应用历史，主要用于调血脂、降血糖。有关研究发现新疆哈族传统发酵乳酪乳清具有抗动脉粥样硬化作用[4]，乳酪乳清中含有多种营养成分, 有较高含量的氨基酸、单不饱和脂肪酸和微量元素等[5]。为进一步探讨新疆哈族传统发酵乳酪乳清的抗炎作用及其机制，本研究采用急慢性炎症模型和角叉菜胶(Car) 诱导的大鼠气囊滑膜炎模型[6～8]，观察其对炎症细胞和细胞因子的影响。

　　1材料与方法

　　1.1实验动物

　　健康雄性SD大鼠100只，体重(200±10)g，3 个月龄，购自新疆医科大学实验动物中心(合格证号：SYXK新20030001)。

　　1.2药物、试剂及仪器

　　阿司匹林( 新疆西域药业股份有限公司)，布洛芬( 湖北百科亨迪药业有限公司)。角叉菜胶为Sigma产品;MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 乳酪乳清购于新疆阿勒泰牧区，经新疆医科大学药理学教研室制备。日本F820 型微细胞计数仪, C反应蛋白的测定用Beckman Coulter Image。

　　1.3方法

　　1.3.1角叉菜胶致小鼠足肿胀模型制备[7]

　　50只小鼠,随机分为4组：盐水对照组:阿司匹林阳性对照组(15 mg/kg),乳清小、大剂量组(25、100 mg/kg)。各组动物灌胃给药,第天1次,共7 d。于末次给药后1 h 在每只小鼠右后肢皮下注射1 %角叉菜胶混悬液0.11 ml 致炎,并分别在致炎后1、2、3、4 h用游标卡尺测右足肿胀程度,计算抑制率(抑制率P%=盐水组足肿胀度-用药组足肿胀度/用药组足肿胀度×100%)。

　　1.3.2大鼠棉球肉芽肿模型制备[7]

　　40 只大鼠,随机分为4 组,每组10 只。各组动物戊巴比妥钠麻醉,无菌操作下在大鼠腋下植入棉球(每个棉球重20 mg,高压灭菌后,60℃烤箱烘干),分组及给药同上,然后各组动物分别灌胃给药,连续10 d,第11天戊巴比妥钠麻醉,取出棉球,剥离肉芽组织,置60℃烤箱烤至恒重。肉芽肿干重=植入棉球肉芽肿重量-植入棉球重量。计算肉芽肿形成抑制率(抑制率P%=盐水组棉球肉芽肿重量(mg)-给药组棉球肉芽肿重量(mg)/盐水组棉球肉芽肿重量(mg)×100%)。

　　1.3.3角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎模型制备[8]

　　40 只大鼠分4组:盐水对照组、布洛芬组、乳清小剂量组、乳清大剂量组。于实验第1天大鼠背部皮下注射经过滤器过滤的空气20 ml, 使背部形成气囊, 待第3天在原气囊处再注射经过滤器过滤的空气20 ml,同时于当天给各组大鼠开始分别灌药,即给予生理盐水1 ml/100 g, 布洛芬组15 mg/kg, 乳清小剂量组25 mg/kg,乳清大剂量组100 mg/kg，连续给药7 d。实验第8天，在各组大鼠背部皮下注射经过滤器过滤的空气10 ml后, 再在气囊内注射2%角叉菜胶2 ml 致炎。在致炎24 h 后, 采静脉血,大鼠处死后, 用Hank′s 液1 ml 灌洗气囊, 收集灌洗液, 离心, 分别收集上清液, 供各项指标测定。灌洗液中白细胞计数应用细胞计数仪测定; 高敏C反应蛋白采用速率散射法;应用Beckman Coulter Image 测定血清hsCRP含量;丙二醛(MDA)采用TBA法测定。

　　1.4统计学处理

　　采用SPSS11.5 统计分析软件包进行统计学分析,数据以±s表示, 各组间均数比较首先进行方差齐性检验, 如果满足方差齐性, 则采用单因素方差分析或t检验方法, 如不满足方差齐性, 则采用秩转换检验方法,检验水准α=0.05。

　　2结果

　　2.1乳酪乳清对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响与生理盐水组比较，除在致炎后2 h的阿司匹林组外，乳清小、大剂量组和阿司匹林组在致炎后1、2、3、4 h各时间段肿胀度均明显减轻(P均<0.05),特别是乳清小剂量组的足肿胀度显著减轻(表1)。表1乳酪乳清对角叉菜胶致小鼠足肿胀的影响(略)注: 与生理盐水组比较， *P<0.05

　　2.2乳酪乳清对大鼠棉球肉芽肿形成的影响与生理盐水组比较，乳清小、大剂量组及布洛芬组的棉球肉芽肿干重均显著降低(P<0.05)，乳酪乳清小、大剂量组与布洛芬组比较无明显差异(P均>0.05)。布洛芬组对肉芽肿形成的抑制率为24.17%,乳清小、大剂量组对肉芽肿形成的抑制率分别为17.11%和17.18%。乳清小、大剂量组及布洛芬组的大鼠体重, 与生理盐水组比较差异无统计学意义(P均>0.05),见表2。表2乳酪乳清对大鼠棉球肉芽肿形成的影响(略)注: 与生理盐水组比较， *P<0.05

　　2.3乳酪乳清对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎模型灌洗液量的影响与生理盐水组比较,布洛芬组及乳清剂量组小、大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎的灌洗液量有显著抑制作用,差异有统计学意义(P均>0.05)，见表3。表3乳酪乳清对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎灌洗液的影响(略)注: 与生理盐水组比较， *P<0.05

　　2.4乳酪乳清对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎模型灌洗液中白细胞计数的影响与生理盐水组比较,布洛芬组及乳清小剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎的灌洗液中的白细胞计数有显著抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05) 。乳清小、大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎的渗出液中的白细胞的抑制作用差异无统计学意义(P均<0.05),见表4。表4乳酪乳清对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎灌洗液中WBC的影响(略)注: 与生理盐水组比较， *P<0.05

　　2.5乳清对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎模型血清中CRP和MDA的影响与生理盐水组比较,布洛芬组、乳清小剂量和大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎的血清中CRP有显著抑制作用,差异有统计学意义(P均<0.05)。乳清大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎的血清中CRP无显著抑制作用(P>0.05)。与生理盐水组比较，乳清小和大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎的血清中MDA 的含量均有显著抑制作用,差异有统计学意义(P均<0.05), 但各组之间差异无统计学意义(P均>0.05)。布洛芬组则对血清中MDA 的含量无明显影响(P>0.05),见表5。表5乳酪乳清对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎血清中CRP、MDA的影响(略)注: 与生理盐水组比较，　*P<0.05

　　3讨论

　　目前,有关他汀类的非调脂作用的研究报道日见增多[8] ,他汀类药物的非降脂作用机制尚不十分清楚。本实验结果提示,乳酪乳清对角叉菜胶致大鼠足肿胀模型和棉球致小鼠腹腔肉芽肿形成具有一定的抑制作用;乳酪乳清对慢性炎症的作用要优于急性炎症,且低剂量乳酪乳清抗炎效果较高剂量组更好,此结果与国外相关报道相符[9]。炎症反应的最重要功能是将炎症细胞输送到炎症局部, 中性粒细胞和单核细胞渗出可吞噬和降解细菌、免疫复合物和坏死组织碎片, 构成炎症反应的主要防御环节。但白细胞可通过释放酶、化学介质和毒性自由基等, 引起组织损伤并可能延长炎症过程。本实验通过大鼠气囊滑膜炎模型,了解乳酪乳清是否具有抗慢性炎症作用。本研究发现, 乳清小、大剂量组对角叉菜胶致气囊滑膜炎大鼠的渗出有抑制作用,乳清小剂量组对渗出液中的白细胞亦有显著抑制作用。CRP是一种能与肺炎球菌荚膜C 多糖物质反应的急性期反应蛋白, 当机体有发热性疾病、各种炎症及创伤时,此蛋白含量明显升高。本研究结果显示, 乳清小、大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎血清中CRP 有显著抑制作用, 与生理盐水组比较差异有统计学意义。而乳清大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎渗出液中CRP 无显著抑制作用, 与生理盐水组比较差异无统计学意义。说明乳清对急性炎症反应中血清CRP有显著抑制作用, 特别是小剂量组,可显著抑制局部渗出液中的CRP 浓度, 因此可以反映出小剂量的乳清对全身及局部的炎症反应有较好的抑制作用。近年来的研究发现, 氧自由基的化学性质是很活跃的,能够攻击细胞膜产生过氧化物侵害体内的核酸、蛋白质等而引起一系列的细胞破坏作用[10]。组织器官及血清中MDA含量的高低反映体内脂质过氧化程度。本实验结果显示，乳清小、大剂量组对角叉菜胶致大鼠气囊滑膜炎的血清中MDA 的含量亦有显著抑制作用。但阳性对照布洛芬组则对血清MDA的含量均无明显影响。说明乳清可显著抑制MDA的产生。减少氧自由基的生成,可能是乳清抗炎作用的一个重要机制。

　　总之, 本研究通过对乳清抗炎作用的实验研究, 证明乳清具有一定的抗炎作用, 特别是对CRP、MDA 等炎性因子具有抑制作用,所以研究发酵乳清的药理作用,可能将对动脉粥样硬化的患者带来新的治疗希望。

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