新疆维吾尔族原发性高血压与CYP11B2基因344T/C多态性的关联性

　　【摘要】 目的：探讨维吾尔族人群原发性高血压与醛固酮合成酶基因(CYP11B2)344T/C多态性的关联性。方法：采用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性的方法,检测新疆和田地区维吾尔族233例原发性高血压患者(高血压组)和252例正常人群(对照组)醛固酮合成酶基因(CYP11B2)344T/C多态性。结果：维吾尔族正常人群及高血压患者的344T/C基因多态性CC、TT、TC基因型频率分布分别为0.167、0.401、0.433和0.155、0.386、0.459， C和T等位基因分布频率分别为0.383、0.617和0.384、0.616，符合HardyWeinberg平衡。高血压组与对照组CYP11B2基因344T/C的C及T等位基因分布差异无统计学意义(χ2=0.001，P=0.97)，基因型频率差异无统计学意义(χ2=0.370，P=0.831)。结论：新疆和田地区维吾尔族原发性高血压与CYP11B2基因344T/C多态性无关联。

　　【关键词】 高血压病; 维吾尔族; 醛固酮合成酶基因; 基因多态性

　　基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(200421123)

　　CYP11B2 with essential hypertension in Xinjiang uygur isolated group LI JING, XU Xinjuan

　　(Department of Hypertension, First Affiliated Hospital, Xinjiang Medical University,

　　Urumqi 830011, China)Abstract: Objective: To investigate the association of the 344T/C polymorphism of aldosterone synthase gene CYP11B2 with essential hypertension in Xinjiang Uygur isolated population. Methods: The study covered 233 hypertensive and 252 normotensive controls in Xinjiang Uygur population. The segment of CYP11B2 was amplified from DNA by polymerase chain reaction (PCR). The PCR products were digested by restriction endonuclease. Result: The frequencies of C and T in hypertensive group (0.384 and 0.616) were not significantly different from those in the control group (0.383 and 0.617; χ2=0.001, P=0.97). The frequencies of 344T/C genotypes of CC, TT and TC were 0.155, 0.386and 0.459 in hypertensive respectively, and 0.167, 0.401and 0.433 in controls respectively. There was no significant difference in genotype between hypertensive group and normotensive group (χ2=0.370, P=0.831). Conclusion: The result suggested that the 344T/C polymorphism of CYP11B2 gene may not be associated with hypertension in Uygur population of Xinjiang.

　　Key words: hypertension; uygur; aldosterone synthase gene CYP11B2; gene polymorphism 原发性高血压是一种严重危害人类健康的心血管疾病之一，近几年来我国高血压患病率呈逐年上升趋势，且存在明显的地区和民族差异，高原少数民族患病率较高。新疆维吾尔族(维族)在生活方式、生活习性上与哈萨克族(哈族)相似，然而高血压患病率却不一致。何秉贤等[1]报道1991年新疆地区高血压患病率汉族为5.65%，维族为3.84%，哈族为10.88%。与1979年的高血压调查相比，汉族、维族、哈族分别增高了57%、60%和80%。原发性高血压是遗传易感性和环境因素共同作用的结果, 基因变异所决定的易感体质，在原发性高血压的成因中发挥着重要的作用[2]。有关研究认为醛固酮合成酶基因CYP11B2与原发性高血压密切相关，CYP11B2344T/C是高血压的一个遗传标志,但不同民族、不同种族基因多态性的分布及与高血压关系的结论不一致[3～5]。本研究以新疆和田地区墨玉县维吾尔族485例为研究对象,探讨CYP11B2基因344T/C多态性与高血压的关系。

　　1资料与方法

　　1.1研究对象采用整群抽样随机抽取的方式选取研究对象。 高血压组(EH组)：233例，男性113例，女性120例，平均年龄(47.47±10.30)岁。符合2005年WHO高血压诊断标准：收缩压≥140 mmHg和/或舒张压≥90 mmHg;排除继发性高血压、过度饮酒、服避孕药史、糖尿病、甲状腺和肝肾疾病史。对照组(NT组)：252例,男性125例，女性127例，平均年龄(41.11±10.59)岁。入选标准：查体健康者，收缩压<140 mmHg和/或舒张压<90 mmHg,无高血压治疗史、高血压家族史及其它器质性心脏病史，排除肝、肾、甲状腺、糖尿病病史。

　　1.2方法

　　1.2.1测定临床指标所有研究对象均检测收缩压、舒张压、腹围、身高和体重。全自动生化仪测定血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血糖(GLU)、心房利尿钠肽(ANP)、血钙离子(Ca2+)、钠离子(Na+)、钾离子(K+)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、血尿酸(UA)、血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)及血浆渗透压水平。

　　1.2.2DNA提取 抽取外周静脉全血，EDTANa2 抗凝，红细胞裂解液裂解红细胞，常规酚氯仿抽提法提取基因组DNA。

　　1.2.3PCR检测CYP11B2基因344T/C多态性(1)引物的合成[6]:上游引物5′CAGGAGGAGACCCCATGTGAC3′,下游引物5′CCTCCACCCTGTTCAGCCC3′(上海生工合成)。 (2)目的基因扩增：扩增体系为20 μl。含有基因组DNA 200 ng，10 mmol/L dNTP 0.3 lμ, 10×缓冲液2.0 μl，MgCl2 1.5 μl,TaqDNA 聚合酶1 U(上海生工)，上下引物各10 pmol,1 μl。扩增条件为预变性94℃ 5 min; 变性94℃ 1 mim; 复性 65℃ 1 min;延伸72℃ 1 min;35个循环，最后延伸72℃ 5 min。PCR产物为537 bp,经2.5%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，凝胶成像仪成像。(3)基因型检测：限制性酶切反应体系20 μl，包括PCR产物10 μl,10×缓冲液2 μl, HaeⅢ限制酶 10 U(上海生工)，37℃酶切4 h。酶切产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察电泳带并照相，观察基因型。

　　1.3统计学处理采用SPSS12.0统计软件包进行数据处理。2组基因型及等位基因频率按HardyWeinberg 平衡法确定各样本该基因的群体代表性。计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，校正用多元协方差，检验水准α=0.05。

　　2结果

　　2.1EH组和NT组临床特点2组患者的年龄、体重指数、腹围、TC、TG、LDL差异有统计学意义。GLU、ANP、Na+、K+、Ca2+、HDL、UA、Cr、BUN及血浆渗透压水平差异无统计学意义(表1)。

　　表1EH组和NT组的临床指标(±s)项目EH组(n=233) NT组(n=252)性别(男/女)113/120125/127年龄(岁)47.47±10.3041.11±10.59*收缩压(mmHg)146.31±20.60113.08±11.17*舒张压(mmHg)99.70±11.6674.11±8.59*体重指数(BMI)25.72±3.8724.05±2.89*腹围(cm)92.73±10.8588.63±9.68*血糖(mmol/L)4.19±0.774.07±0.82血ANP(mmol/L)0.27±0.050.26±0.05血钙(mmol/L)2.27±0.142.23±0.19血钠(mmol/L)141.48±4.31140.81±4.64血钾(mmol/L)4.55±0.604.48±0.50血甘油三酯(mmol/L)1.41±0.931.20±0.74*血总胆固醇(mmol/L)4.27±1.043.97±0.81*低密度脂蛋白(mmol/L)2.34±0.742.15±0.64*高密度脂蛋白(mmol/L)1.28±0.321.24±0.26血尿酸(mmol/L)195.94±61.57190.61±60.49血肌酐(mmol/L)73.82±18.6772.06±17.84血尿素氮(mmol/L)4.70±1.544.74±1.58渗透压(mmol/L)294.66±9.46293.50±8.88注：与EH组比较， *P<0.052.2EH 组与NT组344T/C基因型频率和等位基因频率分布比较限制性内切酶HaeⅢ酶切位点为GGCC，经HaeⅢ酶切消化后，可出现2种片段大小的组合：CC：202 bp,TT:273 bp,TC:273 bp、202 bp。344 C基因型存在HaeⅢ酶切位点,而344T没有HaeⅢ酶切位点。因此344C基因型酶切产物为202 bp,344T基因型酶切产物为273 bp,344TC基因型同时具有273 bp和202 bp 2种片段，见图1。

　　图1CYP11B2基因 344T/C经HaeⅢ酶切图，marker为puc19 DNA markerNT组CYP11B2基因344T/C多态CC、TT、TC基因型频率分布分别为0.167、0.401、0.433，C和T等位基因分布频率分布为0.383、0.617;EH组CC、TT、TC基因型频率分布分别为0.155、0.386、0.459，C和T等位基因分布频率分别为0.384、0.616。两者符合HardyWeinberg平衡，具有群体代表性。2组等位基因频率分布及基因型频率分布差异均无统计学意义(表2)。表3高血压组和对照组CYP基因344T/C多态性分布比较组别例数基因频率(n)CTχ2P基因型频率(n)CCTTTCχ2P高血压组2330.384(179)0.616(287)0.0010.970.155(36)0.386(90)0.459(107)0.3700.831对照组2520.383(193)0.617(311)0.167(42)0.401(101)0.433(109) 男性高血压组1130.420(95)0.580(131)0.9750.3230.177(20)0.336(38)0.487(55)1.3060.520对照组1250.376(94)0.624(156)0.160(20)0.408(51)0.432(54)女性高血压组1200.350(84)0.650(156)0.8370.3600.133(16)0.433(52)0.433(52)0.8730.646对照组1270.390(99)0.610(155)0.173(22)0.394(50)0.433(55)

　　3讨论

　　本研究选择生活在新疆和田地区墨玉县托呼拉乡的维吾尔族人群为研究对象，该地区交通不便，人口相对较多，极少与外界通婚，从地理位置及血缘上为相对隔离人群，有较大遗传同源性，同时影响血压的环境因素(如生存环境、饮食习惯、生活方式、精神压力等)比较一致，是良好的遗传模式人群。Taymans 等[7]研究表明CYP11B2基因主要编码醛固酮合成酶，该酶是醛固酮生物合成最后一步反应的关键酶，它主要位于肾上腺皮质球状带,CYP11B2精确定位在8q24.3。Clyne等[8]研究认为，CYP11B2基因344T/C是位于启动子的一个单核苷酸多态性，启动子区域431至221区间段变化可能影响该基因对血管紧张素II的反应。这种改变会导致基因转录效率的不同，导致醛固酮合成酶mRNA的转录和醛固酮的合成分泌失控。近年来有研究发现，CYP11B2基因344T/C基因分布存在种族差异。Kumar等[3]和Tamaki等[4]报道T和C等位基因频率在日本正常人群中分别为0.58和0.40、0.68和0.32;而白人正常人群分别为0.53和0.47[5]。

　　本研究显示中国新疆维吾尔族正常人群T和C等位基因频率分别为0.617和0.383,与Tamaki等[4]报道的日本人结果相近，而与白人正常人不同。李庆祥等[9]研究认为CYP11B2基因344T/C多态性与中国人原发性高血压有关，T等位基因可能是中国人原发性高血压的一个遗传标志。徐新娟等[6]研究认为CYP11B2基因344T/C多态性可能与新疆巴里坤哈萨克族女性高血压有关。本研究中未发现新疆维吾尔族原发性高血压与CYP11B2基因344T/C多态性具有相关性，高血压组和正常血压组间的等位基因和基因型频率差异均无统计学意义，男性与女性的基因型和等位基因频率分布也未见差异，其机理不清，有待于今后扩大样本进一步研究。本研究中维吾尔族高血压组的年龄明显高于对照组(P<0.05)，这与国内外的报道结论一致，证实了血压的变化与年龄呈正相关[10]。高血压患者常伴有脂质代谢紊乱，高血脂患者中高血压患病率也较高。本研究显示，高血压组血TC、体重指数及腹围明显高于对照组，说明高血压与脂质代谢紊乱存在关联性。

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