芪茵颗粒处方筛选

　　【摘要】 目的：通过观察芪茵颗粒3种组方对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠血脂、肝功能、肝脏组织学结构的影响，以获得组方合理、疗效最佳的处方。方法：60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、处方一组(芪茵颗粒组)、处方二组(芪茵颗粒去补骨脂)、处方三组(芪茵颗粒去三七粉、生大黄)，每组12只，每天予Wistar大鼠高脂乳剂灌胃，连续60 d建立NAFLD大鼠模型，除空白对照组外，其余各组继续予高脂乳剂灌胃，同时模型对照组给予生理盐水15 ml·kg-1·d-1灌胃，3个处方组分别予12 g·kg-1·d-1灌药，连续给药1个月，末次给药后禁食12 h，心脏取血，检测各组血清谷丙转氨酶(ALT)、胆固醇(TC)及甘油三脂(TG)水平,光镜下评估肝脏脂肪变性程度。结果：处方一组在改善肝脏脂肪变性、降低血清ALT、TG、TC水平方面优于处方二、三组(P<0.05～0.01)。结论：芪茵颗粒3种处方均可改善肝脏脂肪变性，降低血清ALT水平，调节血脂代谢,其中处方一组疗效优于处方二、三组。

　　【关键词】 芪茵颗粒; 处方筛选; 　非酒精性脂肪肝

　　Qiyin particles of screening prescription

　　LI Yan-ling，ZENG Bin-fang

　　(College of Traditional Chinese Medicine，Xinjiang Medical University, Urumqi 830011，China)

　　Abstract：Objective: To observe effects of three kinds of Qi Yin particles,on non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) rats data of serum lipids, liver function, liver histological structure were analysed in order to obtain the most reasonable prescription.Methods: Half male and half female Wistar rats were randomly divided into blank group, the model group, prescription 1 (Qi Yin particles), prescription 2 (Qi Yin particles except buguzhi) and prescription 3 (Qi Yin particles except to dahuang and sanqi)，each group had 12 rats.Wistar rats were feeded high-fat emulsion every day, The NAFLD rats were established for 60 days.In addition to the blank group, the remaining groups continue to feeding the high-fat emulsion, while the model group was given saline, the remaining three groups were respectively given drugs for 12 g·kg-1·d-1 for a month.At the end of experiment, cardiac blood was obtained and detected alanine aminotransferase (ALT), cholesterol (TC) and triglyceride (TG)，and assessed hepatic steatosis degree with the microscope.Results: Prescription 1 can improve liver steatosis, reduce serum ALT levels and serum TG, TC are lower than those in prescription 2 and 3 (P<0.01, P<0.05).Conclusions: Qi Yin three particles can be improved prescription fatty degeneration of the liver, reduce serum ALT levels, regulating lipid metabolism.The efficacy of prescription 1 is better than that in prescription 2 and 3.

　　Key words: Qiyin particles; screening prescription; non-alcoholic fatty liver disease

　　芪茵颗粒是以 “肝脾肾同调、痰瘀滞同治”的中医理论依据为指导，并结合多年临床经验自创，应用于治疗脂肪性肝病，通过前期临床观察不仅能明显缓解临床症状，还对患者的体重指数(BMI)、血清谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)等指标有明显改善，未发现明显不良反应[1]。本方以生黄芪等药为君，益脾胃、清肝热祛湿浊;以泽泻等为臣，泻浊化痰，痰瘀同治;生大黄、三七粉、补骨脂为佐，活血祛瘀兼补肾;以苦丁茶为使药，清热解毒、健脾消积，达到抑肝扶脾、消导化痰兼活血消积的功效。

　　本文以中医理论为指导，根据“君臣佐使”的组方原则和配伍特点，以血清ALT水平、血脂、病理切片为考察指标进行处方筛选，为精简方剂，降低成本，推出组方合理、疗效确切、安全方便的新药奠定基础。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物及分组 60只Wistar大鼠，雌雄各半，体重(180±20)g,购自新疆医科大学动物实验中心。大鼠分笼饲养，自由摄食、饮水,适应性喂养7 d后，按体重、性别随机分为5组，即空白对照组、模型对照组、处方一组(芪茵颗粒)、处方二组(芪茵颗粒去补骨脂)、处方三组(芪茵颗粒去生大黄、三七粉),每组12只。

　　1.2 实验仪器 全自动血液生化分析仪(日立7600-010型，兰州傲胜)、电子天平(AB204-N 上海梅特)由新疆医科大学动物实验中心提供;台式离心机(TOL-5-A 上海安亭),光学显微镜(Moticam 3000),石蜡切片机(LEICA RM2135)。

　　1.3 实验药物与试剂 芪茵颗粒：生黄芪、茵陈、生山楂等。人体日用量为 60 g，按系数折算出大鼠用量，将不同组方的芪茵颗粒加蒸馏水分别稀释成灌胃溶液剂量的浓度为12 g·kg-1·d-1。换算等效剂量，基本根据：人—1，大鼠—6～7的折算系数为依据[2]。ALT试剂盒(上海科华东陵诊断用品有限公司，批号：20071201)，TG试剂盒(上海复星长征医学科学有限公司，批号：D01132)，TC试剂盒(上海科华东陵诊断用品有限公司，批号：D071132)。

　　1.4 实验方法 予空白对照组生理盐水15 ml·kg-1·d-1灌胃，其余各组大鼠每天给予15 ml·kg-1高脂乳剂灌胃 [3]，根据每周称量大鼠的体重变化调整高脂乳剂的剂量，连续60 d后，除空白对照组予以标准饲料喂养，并配以同等剂量的蒸馏水每日下午灌胃，其余4组继续以高脂乳剂灌胃喂养。灌高脂乳剂的同时，模型对照组给予生理盐水15 ml·kg-1·d-1灌胃，处方一组、处方二组、处方三组分别予芪菌颗粒、芪菌颗粒去补骨脂及芪菌颗粒去生大黄、三七粉12 g·kg-1·d-1灌胃，连续给药1个月。末次给药当晚禁食不禁水12 h,于次日清晨以2%的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后行心脏采血,置于4℃、3 000 r/min离心，取血清于全自动生化分析仪检测ALT、TC、TG水平。同时取肝右叶中部0.5 cm×1 cm×0.5 cm置于磷酸缓冲福尔马林溶液固定后,苏木精-伊红染色，根据肝小叶内脂肪变的肝细胞数将脂肪肝程度量化：F0:<5%肝细胞脂肪变;F1: 5%～30%肝细胞脂肪变;F2:31%～50%肝细胞脂肪变;F3:51%～75%肝细胞脂肪变;F4:75 %以上肝细胞脂肪变[4]。在光镜下评估肝脂肪变性程度及炎症程度分级。

　　1.5 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件包对数据进行处理，计量资料用均数±标准差表示，符合正态性、方差齐时采用单因素方差分析，组间比较采用q检验，方差不齐时采用秩和检验，等级资料采用秩和检验，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 各组大鼠肝脏组织HE染色观察及脂肪变性程度比较 空白对照组大鼠肝细胞无脂肪变性(图1);模型对照组肝细胞普遍发生脂肪变性，肝细胞肿大变圆，胞浆疏松，内含大的脂肪滴(图2);处方一、二组肝细胞脂肪变性程度较模型对照组显著减轻[JP2](P<0.05～0.01)，而且肝细胞脂滴数量均减少，且以小脂滴为主，肝细胞体积变小。处方三组肝细胞脂肪变性程度与模型对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05);处方一组肝细胞脂肪变性程度较处方二、三组程度轻(P<0.05)(表1)(图3a、b、c)。

　　图1 空白对照组肝细胞无脂肪变性(×100)(略)

　　图2 模型对照组肝细胞脂肪变性(×100)(略)

　　表2 各组大鼠肝脏组织脂肪变性程度的比较(略)

　　注：与空白对照组比较, ▲P<0.05, ▲▲P<0.01;与模型对照组比较, *P<0.01; 与处方一组比较，△P<0.05

　　a: 处方一组[FK)] [FK(W1.16]b: 处方二组[FK)] [FK(W1.16*4]c: 处方三组

　　图3 处方组肝细胞脂肪变性程度较模型对照组减轻(×100)(略)

　　2.2 各组大鼠血清ALT、TG、TC水平的比较 模型对照组血清ALT水平明显高于空白对照组(P<0.01);与模型对照组比较，处方二组血清ALT水平有所降低，但差异无统计学意义(P>0.05)，处方一、三组血清ALT水平显著下降(P<0.05～0.01)。与处方一组比较，处方二组血清ALT水平升高(P<0.05)，处方三组血清ALT水平有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。

　　模型对照组及3个处方组血清TG水平明显低于空白对照组(P<0.05～0.01);与模型对照组比较，处方一组血清TG水平有所下降(P<0.05),处方二、三组亦能降低血清TG水平，但差异无统计学意义(P>0.05)。与处方一组比较，处方二、三组血清TG水平升高(P<0.05)，处方二组与处方三组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

　　模型对照组血清TC水平明显高于空白对照组P<0.01～0.05);与模型对照组比较，处方一、二组血清TC水平均显著降低(P<0.05)，处方三组亦能降低血清TC水平，但差异无统计学意义(P>0.05)。与处方一组比较，处方三组血清TC水平升高(P<0.05)，处方二组血清TC水平有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。处方二组血清TC水平与处方三组比较差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。

　　表2 各组大鼠血清ALT、TG、TC水平的比较(略)

　　注：与空白对照组比较, ▲P<0.05, ▲▲P<0.01; 与模型对照组比较, *P<0.05, **P<0.01;与处方一组比较，△P<0.05

　　3 讨论

　　本课题采用的非酒精性脂肪肝大鼠模型模拟人类饮食习惯,模型稳定、可重复性高，是研究非酒精性脂肪肝筛选新药的一种较好的动物模型。芪茵颗粒中补骨脂、生大黄、三七粉为佐药，文献中医家很少将其用于治疗非酒精性脂肪肝，并且药理研究中关于补骨脂、生大黄、三七粉治疗非酒精性脂肪肝的报道很少，故考虑处方二组为原方去补骨脂，处方三组为原方去生大黄、三七粉。病理组织学检查是诊断非酒精性脂肪肝和判断其预后的金标准[5]。ALT是迄今为止被认为反映肝细胞损害的重要指标，正常时血清内含量很低，当肝脏细胞受损伤，肝细胞膜的通透性亢进时，其活性迅速增加[6，7]。非酒精性脂肪肝常与血脂代谢紊乱密切相关，故本实验将肝脏脂肪变性程度、血清ALT、TG、TC水平作为处方筛选的考察依据。在本课题中，与空白对照组比较，模型对照组血清TG水平降低、血清TC水平升高，考虑原因是长期、大量高脂饮食导致肝脏内源性合成TG增加，引起TG转运障碍，导致肝内脂肪沉积有关;另外机体摄入外源性胆固醇增多，超过了肝脏降解和机体利用的能力[8]。实验证明：芪茵颗粒3种处方均可改善肝脏脂肪变性，降低血清ALT水平，调节血脂代谢，其中处方一组的疗效优于处方二、三组。芪茵颗粒去补骨脂后，出现血清ALT水平异常升高，说明补骨脂对降低血清ALT水平有一定的作用。芪茵颗粒去生大黄、三七粉后，调节血脂代谢的疗效较原方降低，说明生大黄、三七粉在调节血脂代谢方面有一定的作用，其作用机制有待进一步研究。

　　【参考文献】

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