黑加仑果胶的提取及含量测定

　　【摘要】 目的: 探讨黑加仑果胶的提取及含量测定方法。方法: 从新鲜黑加仑中提取黑加仑果胶粉,采用咔唑比色法测定其果胶含量。结果: 2 kg 黑加仑果实制得果胶25 g，其相应测定波长为530 nm，在0～85 μg/ml浓度范围内呈现很好的线性关系，相关系数r=0.999 1,平均回收率100.15%，相对标准偏差RSD=1.93%，测定黑加仑果胶含量为6.373%。结论: 本方法简单准确，显色稳定，灵敏度高，重现性好，可作为黑加仑果胶含量的测定方法。

　　【关键词】 黑加仑; 果胶; 咔唑比色法; 含量测定

　　Abstraction and content measurement of pectin in blackcurrant

　　Reziya·Ablat，LI Li，Tuerxunjiang·Maimaitiming，et al

　　(Department of Nutrition and Food Hygiene, College of Public Health, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China)

　　Abstract： Objective: To extracts the pectin and carry on the determination to its content from the blackcurrant fruit.Methods: To use the colorimetry of carbazole method determination.Results: The pectin 25 g was obtained from 2 kg blackcurrant fruit.The determination wave length was 530 nm.The good linearity range from 0～85 μg/ml (r=0.999 1), average returns-ratio was 100.15%, the relative standard deviation of 1.93%.The content percentage of blackcurrant was 6.373%.Conclusion: The method is accurate, color stability, high sensitivity, stable and suitable for the determination of pectin in Blackcurrant.

　　Key words： blackcurrant; pectin; colorimetry of carbazole; content determination

　　黑加仑(Blackcurrants)，学名黑穗醋栗(Ribes nigrum L)，属虎草科(Saxifragaceae)茶麓子属(Ribes)，多年生小灌木 [1]，是很有发展前景的天然食物资源[2～5]。现代药理学研究表明，黑加仑所含的果胶具有抗菌、止血、消肿、解毒、止泻、降血压、抗辐射等作用[6]。本实验对黑加仑中的果胶进行提取和含量的测定，为进一步开发和利用黑加仑资源提供参考依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 主要仪器与试剂 721型可见分光光度计(上海市第三分析仪器厂)，CS501型超级恒温器、恒温水浴锅(重庆试验设备厂)，AB204-N电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，RE-52旋转蒸发器(上海安亭电子仪器厂)。果胶(AR，Sigma公司)，咔唑、无水乙醇、乙酸乙酯、活性炭、95%乙醇、浓硫酸均为分析纯,实验用水为蒸馏水。0.15%咔唑乙醇溶液,果胶标准溶液(浓度0.855 2 mg/ml)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 黑加仑果胶粉的提取 将2 kg黑加仑鲜果洗净，搅成匀浆，3 000 ml乙酸乙酯提取2 h，共6次，滤液浓缩得到乙酸乙酯10 g,回收率0.5%，鲜果渣晾干挥去乙酸乙酯，95%乙醇3 000 ml提取2 h，共6次，滤液浓缩得到乙醇。黑加仑鲜果渣挥去乙醇，用蒸馏水提取3次，滤液浓缩得600 ml的浓缩液，干燥得到的多糖用水溶解，用80～120目颗粒状的活性炭1%脱色，抽滤，滤液加95%乙醇沉淀使含醇量为75%左右，静置过夜，产生大量的胶冻状物(浮在上层)，在水浴锅蒸发干燥得乳白色果胶粉25 g, 回收率1.2%～1.25%[6]。

　　1.2.2 果胶含量测定[7] 采用咔唑比色法测定,6支10 ml刻度试管中分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml果胶标准液，加蒸馏水至10 ml，得浓度分别是0、17.104、34.208、51.312、68.416、85.52 μg/ml标准稀释液，分别移取6种浓度标准稀释液各1.0 ml于6支试管中，加5.0 ml浓硫酸，摇匀，在75℃ 水浴中加热15 min，取出冷至室温，再加入0.15%咔唑无水乙醇溶液0.2 ml，摇匀，在暗处放置2 h,在530 nm处测定吸光度。以空白试剂作参比，吸光度(A)及对应的果胶标准溶液浓度(C)建立回归直线方程A=7.840 2×10-3C+0.029 7，r=0.999，果胶标准溶液浓度(C)在0～85 μg/ml间与吸光度(A)呈良好线性关系。准确称取0.1 g黑加仑果胶粉共3份，用蒸馏水溶解后，定容于100 ml容量瓶中，移取1.0 ml该液于另10 ml容量瓶中并定容，移取1.0 ml于10 ml比色管中，按标准稀释液的显色操作进行测定。

　　2 实验结果与分析

　　2.1 样品中果胶含量的测定 将3份待测样品的测定吸光度值代入标准曲线得果胶含量分别为6.387%、6.143%、6.588%，平均含量为6.373%。

　　2.2 稳定性试验 取样品溶液、标准溶液、精制果胶溶液各1.0 ml，按标准曲线绘制方法，每隔40 min测定一次吸光度，连续3 h考察其稳定性，结果表明，0、40、80、120、160、200、240 min时样品溶液吸光度分别为0.397、0.405、0.409、0.413、0.406、0.407、0.395，样品溶液在120 min时吸光度达到最大值，并且有40 min左右时间吸光度几乎不变，表明稳定性良好，可进行测定。对同一个样品在3 h内测定，其中相对标准偏差(RSD)=0.85%(n=6)。

　　2.3 精密度试验 制备黑加仑果胶25、50、75 μg/ml 3个浓度的样品溶液，每个样品平行测定6次,其平均RSD为1.76%(表1)。

　　表1 果胶精密度试验(略)

　　2.4 加样回收率试验 精密吸取3份黑加仑样品液0.5 ml，分别加入25、50、75 μg/ml 3个浓度的果胶标准溶液，并使其总体积至1 ml，测定其果胶含量，每个样品平行测定6次，实验得到的平均回收率为100.15%，平均RSD为1.93%(表2)。

　　表2 果胶的加样回收率试验(略)

　　3 讨论

　　果胶是一种植物胶体，分布于果蔬类植物中，是细胞壁的一种组成成分，将细胞彼此粘合在一起，并以其独特的物理、化学性质在很大程度上影响这些植物源食品(农产品)的口感和品质[8]。果胶物质是复杂的高分子聚合物，分子中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，但基本结构是半乳糖醛酸以a-1,4苷键聚合形成的聚半乳糖醛酸[9]。它又是由植物果实中提取的天然添加剂，具有良好的胶凝化和乳化稳定作用，广泛应用于食品工业、化妆品和医药中。本实验以黑加仑果实为原料采取乙酸乙酯提取，乙醇沉淀制取果胶，测得黑加仑果胶含量为6.373%,对进一步开发和利用黑加仑资源，具有十分重要的意义。

　　果胶的含量测定方法主要有重量法、容量法、滴定法、高效液相色谱法、气相色谱法和比色法等[10，11]，其中前几种方法的操作比较复杂、仪器配置昂贵，且分析时间较长，不宜普遍推广。咔唑比色法测定果胶含量的原理是果胶在硫酸的作用下水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成紫红色化合物，在530 nm处有最大吸收峰。通过测定样品中半乳糖醛酸的含量，从而确定果胶的含量。与以往的植物果胶含量测定方法相比，本法简单准确，显色稳定，灵敏度高，重现性好，是目前定量测定果胶较好的方法，已在多种果胶的测定中得到广泛应用。

　　【参考文献】

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　　[2]张亚楼.黑加仑营养成分及保健功能研究进展[J].国外医学卫生学分册,2004, 31(2):108-110.

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　　[4]Lengsfeld C,Deter A,Falter G,et al.High molecular weight polysaccharides from blackcurrant seed inhibit adhesion of Helicobacter pylory to human gastric mucose[J].Planata Med,2004,70(7):620-626.

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　　[6]蔡定建,谢志鹏,罗六保,等.脐橙皮中黄酮类化合物与果胶的分离和提取研究[J].分析测试技术与仪器,2006,12(4):239-242.

　　[7]李春明,管春梅.咔唑比色法测定玉米种皮中的果胶含量[J].中国公共卫生,2004, 20(4):490-491.

　　[8]徐 汶,王光辉,王存文,等.咔唑比色法测定豆腐柴叶果胶含量的研究[J].食品安全与检测,2006,22(3):133-135.

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　　[10]吴玉萍,杨光宇,王东丹.高效液相色谱法测定烟草中的果胶含量[J].光谱实验室,2004,(1):183-185.

　　[11]李 波,许时婴.气相色谱法测定多糖中的糖醛酸[J].色谱,2004,22(5):560.