酒精性与非酒精性脂肪肝模型大鼠肝脏脂质及血脂等指标的比较

　　【摘要】 目的：比较酒精性脂肪肝(AFL)和非酒精性脂肪肝(NAFL)模型大鼠肝脏脂质(肝脂)及血脂等指标的异同。方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、AFL组和NAFL组，10周造模成功，制备病理切片，测定各组血脂、酶学等指标，制备肝匀浆测定肝脏脂质含量。结果：NAFL组大鼠部分肝细胞内出现大小不等的脂滴，AFL组出现大泡状脂滴。与正常对照组比较，AFL组血清甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(BIL)及肝脏TG、TC显著升高(P<0.01);NAFL组血清TG、TC、 LDL、BIL、ALT及肝脏TC水平与正常对照组比较差异有统计学意义。AFL组与NAFL组高密度脂蛋白(HDL)与γ-谷氨酰转肽酶(γ-GGT)指标与正常对照组比较差异均无统计学意义。AFL组血清TG、AST及肝脏TG、TC显著高于NAFL组(P<0.01)。结论：相同的实验周期内,AFL模型大鼠血清TG及肝脏脂质升高比NAFL模型更显著。

　　【关键词】 酒精性脂肪肝 非酒精性脂肪肝 大鼠 肝脏脂质

　　Comparison of serum/hepatic biochemicals between alcoholic fatty liver and nonalcoholic fatty liver in rats

　　ZHANG Yan-zhi, ZHANG Hong, ZHANG Yan, et al

　　(Department of Pharmacology, Xinjiang Medical University, Urumqi, 830011, China)

　　Abstract: Objective：To observe the difference of serum/hepatic biochemicals between alcoholic fatty liver and nonalcoholic fatty liver in rats. Method: Wistar rats were divided into three groups in random :normal group, alcoholic group and nonalcoholic group, serum TG, TC, HDL, LDL, AST, ALT， γ-GGT, AL bumin, and total bilirubin (BIL) were tested, at the same time the hepatic homogenate was prepared and TG,TC were tested. Results: In AFL group, serum ALT， AST， LDL， TG， TC， BIL and hepatic TG， TC were higher than that of the normal group (P<0.01); in NAFL group, serum LDL， TG， TC， BIL， ALT， hepatic TC were higher than that of the normal group. Compare AFL group with NAFL group, serum TG， AST and hepatic TG， TC of the AFL group were higher than that of the NAFL group. Conclusion: In the same experiment period, serum TG and hepatic lipid of AFL group have obvious differences with that of the NAFL group .

　　Key words: alcoholic fatty liver; nonalcoholic fatty liver; rats; liver fat

　　脂肪肝是西方国家人群的多发病。近年来，由于生活水平的提高和饮食结构的改变，我国脂肪肝的发病率也呈逐年上升趋势，已日益成为国内外研究的热点。本研究参考人类脂肪肝的分类及诊断金标准[1]，分别建立大鼠酒精性脂肪肝(AFL)和非酒精性脂肪肝(NAFL)模型，并比较两类脂肪肝模型大鼠血脂、肝脏脂质(肝脂)等指标的异同,为研究脂肪肝发病机制及其药物筛选提供依据。

　　1材料和方法

　　1.1实验动物成年Wistar 大鼠42只，体重(180±20)g,由新疆医科大学实验动物中心提供(医动号：第16-003号)。

　　1.2主要试剂、仪器55°红星二锅头白酒(V/V)(北京酿酒总厂生产),高脂乳剂(自制)。美国雅培2000全自动生化分析仪,TGL-16G型台式离心机。 检测试剂盒:甘油三酯(TG)(批号：20050608)、总胆固醇(TC)(批号：20050725)、高密度脂蛋白(HDL)(批号：20050120)、低密度脂蛋白(LDL)(批号：20050603)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)(批号：20051009)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)(批号：20050922)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GGT，批号：050702)、总胆红素(BIL)(批号：050801)均购自上海荣盛生物技术有限公司。

　　1.3实验方法大鼠按性别、体重随机分为正常对照组、AFL组和NAFL组，每组14只，雌雄各半。AFL组灌胃酒脂混合液(3∶2)，剂量从15 ml/kg开始，每3天按2.5 ml/kg增加至25 ml/kg之后保持此量灌胃;NAFL组灌胃高脂乳剂18 ml/kg;正常对照组灌胃生理盐水18 ml/kg。10周时病理检查显示造模成功后各组动物禁食12 h，称重后摘眼球取血，脱颈椎处死，迅速取出各鼠肝脏并剪取同一部位处各0.3 g制成10%匀浆，检测TC、TG含量。收集大鼠血液,3 000 r/min离心10 min ，取血清测定ALT、AST、TC、TG、HDL、LDL、BIL及γ-GGT的含量。

　　1.4统计学处理采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理。计量资料用(±s)表示，采用单因素方差分析,检验水准α=0.05。

　　2结果

　　2.1各组大鼠血清肝功酶及生化指标的变化AFL组血清肝功酶ALT、AST显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01);NAFL组血清ALT升高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);AFL组血清BIL水平明显高于正常对照组，但低于NAFL组，差异均有统计学意义。AFL组与NAFL组比较，γ-GGT稍有升高但与正常组比较无明显差异(表1)。

　　2.2各组大鼠血清脂质变化AFL组与NAFL组大鼠血清TG、TC及LDL水平均显著高于正常对照组, 差异均有统计学意义(P<0.01)，且AFL组血清TG水平又显著高于NAFL组(P<0.01),2组HDL有升高趋势，但与正常对照组比较，差异无统计学意义，见表2。

　　2.3各组大鼠肝脏脂质变化AFL组肝脏TG、TC含量显著高于正常对照组和NAFL组，差异均有统计学意义(表3)。

　　表1各组大鼠血清肝功酶及生化指标的变化(略)

　　注：与正常对照组比较， **P<0.01; 与NAFL组比较， ▲P<0.05， ▲▲P<0.01

　　表2各组大鼠血清脂质变化(略)

　　注：与正常对照组比较， *P<0.05， **P<0.01; 与NAFL组比较， ▲▲P<0.01

　　表3各组大鼠肝脏脂质变化(略)

　　注：与正常对照组比较， *P<0.05， **P<0.01; 与NAFL组比较， ▲▲P<0.01

　　2.4肝脏组织病理学变化正常对照组肝脏外观红褐色，质软富弹性，光镜下观察肝小叶结构正常，肝细胞大小形态正常，肝索排列整齐，核圆，位于细胞中央，胞质均匀(图1);NAFL组肝脏泛黄油腻感，镜下观察肝细胞胞质疏松，造模10周时大鼠部分肝细胞内出现大小不等的脂滴(图2);AFL组肝脏肿大，边缘钝厚，质脆，肝细胞水肿明显(胞浆中有蛋白性颗粒出现)，中央静脉淤血扩张，造模8周时大鼠肝细胞内充满小泡状脂滴，10周时出现大泡状脂滴(雌性大鼠尤其明显)，部分肝细胞出现点状坏死(图3、4)。

　　图1正常对照组大鼠肝组织(HE×100)(略)

　　图2NAFL组大鼠肝组织(HE×100)(略)

　　图3AFL组大鼠肝组织(8周)(HE×100)(略)

　　图4AFL组大鼠肝组织(10周)(HE×100)(略)

　　3讨论

　　天冬氨酸转氨酶(AST)主要存在于肝细胞线粒体,所以检测代表线粒体酶变化的血清AST值能较准确反映出肝细胞病变程度,尤其坏死性病变,因为线粒体有两层膜,一般病变不能促使线粒体中的酶释放入血。本组资料显示，酒精性脂肪肝引起AST显著升高,表明酒精可严重损害肝细胞线粒体,这与酒精易造成线粒体等细胞器肿胀变性有关[2]。γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)主要参与氨基酸的转运和解毒，在机体发生氧化应激反应时被诱导,其量产生会增加谷胱甘肽产量,以增加机体抗氧化能力。杨巧媛等[3]发现γ-GGT对诊断酒精性肝病有独特的敏感性，而本研究显示NAFL与AFL组γ-GGT升高均不明显，提示至本实验周期时(10周)可能体内谷胱甘肽已耗竭。相同的实验周期内，AFL组血清TG水平显著高于NAFL组，而血清TC无差异，表明高脂饮食若合并饮酒将大大提高血清甘油三酯水平,这与Aimin[4]的研究结果一致。本研究结果还显示，NAFL组肝脏脂质以TC升高为主，AFL组肝脏TG、TC均显著升高,并且与NAFL组有显著差异，表明酒精会加速脂质尤其是甘油三酯在肝脏的异位沉积。其分子机制可能与乙醇及其代谢产物乙醛改变了肝脏脂质代谢信号途径有关：抑制了脂肪酸-过氧化物酶体增殖物受体(PPAR-α)的DNA结合活性，继而抑制了脂肪酸的β-氧化途径[5];同时激活了胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1)的转录活性，从而激活了一系列受SREBP-1调控的脂肪合成酶的活性，如乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)等，从而引起脂肪的大量堆积，使肝细胞从脂肪氧化器官变为储脂器官[6]。

　　【参考文献】

　　[1]中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病组. 酒精性脂肪肝诊断标准 [J].中华肝脏病杂志,2003,11(2)：72.

　　[2]顾国妹，杨栓平.大鼠高脂饮食性和酒精性脂肪肝超微结构比较 [J].山西医科大学学报,2005,32(1):1-3.

　　[3]杨巧媛，董胜璋.锌金属硫蛋白对镉中毒小鼠肾损伤的修复作用 [J].卫生毒理学杂志，2002，16(2)：69-71.

　　[4]Aimin XU. Fat-derived hormone adiponectin alleviates alcoholic and nonalcoholic fatty liver disease in mice [J]. Clin Invest ,2003, 112(1):91-100.

　　[5]Galli A, Pinnaire J, Fischer M, et al. The transcriptional and DNA binding activity of peroxisome proliferator-activated receptor α is inhibited by ethanol metabolism[J]. Biol Chem, 2001,27:68-75.

　　[6]You M, Fischer M, Deeg MA, et al. Ethanol induces fatty acid synthesis pathways by activation of steral regulatory element-bing protein [J].J Biol Chem,2002,277:29342-29347.