肿瘤抑制素及其受体在原发性肝细胞癌临床各期的表达研究

　　【摘要】 目的 探讨原发性肝细胞癌(HCC)临床各期中肿瘤抑制素(OSM)、肿瘤抑制素受体(OSMR)表达及其在HCC的发生发展中的作用机制。方法 用固相夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测30例HCC(临床Ⅰ期15例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例)，5例正常肝和6例肝血管瘤组织(对照组)中OSM、OSMR的表达水平。结果 30例HCC组织中OSM、OSMR表达水平明显低于对照组(P<0.05);HCC组织中临床Ⅲ期OSM表达低于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05);OSMR临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期无显著差异(P>0.05)。在低、中分化组HCC组织中OSM表达明显低于高分化组(P<0.05)，低分化与中分化组间差异无统计学意义(P>0.05);HCC组织中OSMR表达3组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 OSM、OSMR的表达和HCC临床分期及肿瘤的分化程度密切相关。

　　【关键词】 原发性肝细胞癌;肿瘤抑制素;肿瘤抑制素受体;表达

　　Research on Expression of Oncostatin M and its Receptor at ClinicalStages of Hepatocellular Carcinoma

　　QIAN Junfu, SUN Junjun, LIU Weifeng，et al

　　(First Affiliated Hospital，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，China)

　　Abstract:Objective To explore the expression of oncostatin M (OSM) and its receptor (OSMR) at the clinical stages of hepatoma tissues and possible mechanisms by which they affect hepatocellular carcinoma (HCC). Methods ELISA immunohistochemistry was used to detect the expression of OSM and OSMR in hepatoma tissues in 30 patients with HCC, 5 normal liver tissues and 6 tissues of hemangiomas. Results The expression of OSM and OSMR in 30 patients with HCC，compared with the control group，was significantly lower than the tissues of liver and hemangiomas (P<0.05). The expression of OSM at the clinical stage Ⅲ HCC was lower than Ⅰor Ⅱ(P<0.05), but OSMR expression of Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ was of no significant differences (P>0.05). In the low and medium differentiation group OSM expression in HCC tissues was significantly lower than welldifferentiated group (P<0.05) the low differentiated and the Medium differentiation group was no significant difference (P>0.05); OSMR expression in HCC tissues among the three groups were no statistically significant difference (P>0.05). Conclusion The clinical stages of HCC and the degree of differentiation of the tumor are closely related to the OSM, OSMR expression.

　　Key words:HCC;OSM;OSMR;expression

　　原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC) 是我国常见的恶性肿瘤，因其迅速侵犯肝实质导致肝功能衰竭，病死率高。肝癌的分化程度及所处的临床分期不同，对其治疗及预后也有很大差异。本研究采用ELISA法检测临床各期及不同分化程度的肝癌组织、正常肝组织和肝血管瘤组织中的肿瘤抑制素M(oncostatin M,OSM)及其受体(oncostatin M receptor,OSMR)的表达，旨在了解它们在HCC中的作用机制与临床意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料 30例肝癌(HCC组)标本取自2006年10月～2008年7月河南科技大学第一附属医院肝胆外科手术治疗的HCC患者，所有病例均病理证实为HCC。其中男26例，女4例，中位年龄52.8岁。临床分期[1]：Ⅰ期15例，Ⅱ期10例、Ⅲ期5例(其中3例为Ⅱ期病人术中发现肝门部淋巴结转移，1例术中发现少量腹水，1例为Ⅲ期病人行腹腔氩核刀治疗所取病检);高分化14例，中分化12例，低分化4例;HBsAg阳性25例,肝硬化24例;AFP平均(520.6±25.3) μg/L，7例肿瘤直径<3 cm，23例≥3 cm;单发23例,多发7例;对照组11例，6例来源于同期手术治疗的肝血管瘤患者(均经病理证实)，5例为肝外伤术中切除的肝组织，对照组均无乙肝病毒感染史及肝硬化病史。

　　1.2 方法 试剂：人OSM、OSMR ELISA试剂盒购自美国ADL公司。标本的采集及保存：所有标本均取自术中切除的新鲜组织。标本切除离体后,采样时选取无组织坏死或出血的部位，以研钵研磨成组织匀浆，每份标本取组织匀浆1 g加生理盐水200 μl，混匀，高速离心机离心(10 000 r/min)20 min，取上清，-20℃冰箱保存待测(避免反复冻融 )。用ELISA法检测组织匀浆OSM、OSMR水平。操作步骤严格按照OSM、OSMR试剂盒说明书操作。

　　1.3 统计学分析 计量资料以±s表示，数据应用SPSS13.0软件包对试验数据进行单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 各组织中OSM、OSMR 表达水平与比较 30 例HCC组织中OSM、OSMR水平显著低于与对照组(P<0.05);正常肝组织与血管瘤组织中OSM、OSMR水平差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。表1 各组织中OSM、OSMR均数比较①与正常肝组织及肝血管瘤组织比较均有差异(P<0.05)

　　2.2 HCC各期组织中OSM、OSMR表达水平比较HCC组织中临床Ⅲ期OSM表达低于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05)，Ⅰ、Ⅱ期组间差异无统计学意义(P>0.05);HCC组织中 OSMR表达于临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期之间差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。表2 HCC各期组织中OSM、OSMR均数比较　①与Ⅲ期比较均有统计学意义(P<0.05)

　　2.3 不同分化程度HCC组织中OSM、OSMR表达水平比较 在低、中分化组HCC组织中OSM表达明显低于高分化组(P<0.05)，低分化与中分化组间差异无统计学意义(P>0.05);HCC组织中OSMR表达3组之间差异均无统计学意义(P>0.05)，见表3。表3 不同分化程度HCC组织中OSM、OSMR均数比较　①与高分化比较均有统计学意义(P<0.05)

　　3 讨论

　　OSM是Zarling等[2]1986年首次从PMA活化U937细胞培养上清中分离纯化到一种因子，它是由巨噬细胞和T细胞产生的一种耐热、耐酸的分子量为28 000KD的单链糖蛋白。其基因定位于22号染色体，基因组由3个外显子和2个内含子组成，OSM前体有252个氨基酸，切除25个氨基酸的先导序列后称之原OSM。OSM广泛分布于多种肿瘤细胞、内皮细胞和上皮细胞。OSM介导的生物学活性主要是OSMRβ特定受体(II型)[3，4]。当OSM与Ⅱ型受体结合形成异源二聚体复合物后,复合物中结合在gp130BOX1[5]处的吉纳斯蛋白(Janus kinase，JAK)被激活。活化的JAK可使受体分子胞浆区的酪氨酸磷酸化，同时信号传导转录激活因子3(signal transducerand act ivators of transcription-3，STAT3)通过OSMR的BOX3及C末端区中的磷酸化酪氨酸序列结合,且STAT3亦被JAK磷酸化。STAT3分子中的丝氨酸可被一个迄今尚未鉴定的激酶激活，从而使STAT3完全活化，发挥转录激活因子的作用。gp130活化后Ras亦可被激活，CRaf 21(丝氨酸—苏氨酸激酶)的酪氨酸磷酸化亦可发生，有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)也可被磷酸化而发挥转录激活因子的作用。

　　OSM、OSMR的主要生物学功能是抑制多种肿瘤细胞的生长，并能诱导某些肿瘤细胞的分化，大量研究表明OSM参与细胞凋亡、抑癌基因、细胞黏附等调节过程。Douglas等[6]在研究OSM抑制人乳腺癌细胞生长和诱导其分化时发现OSM除造成肿瘤细胞不能通过细胞周期的G期之外，还可以引起原癌基因cmyc和cfos表达水平的增高。提示OSM可能通过对这些原癌基因的调节来参与肿瘤细胞凋亡的诱导。尉承泽等[7]取含OSM的CHOOSMEGFP细胞上清液对大鼠肝癌细胞株HTC和FIScher大鼠肝脏来源的干细胞系WBF344共培养，分析结果显示：含OSM上清液在体外能够诱导 HTC发生凋亡，当浓度为15%～30%时，凋亡比例随着上清液浓度的增加而增加;当上清液终浓度增大至40%时，凋亡比例反而下降，同时细胞死亡明显多于对照组。与之相反，含OSM的上清液能使大鼠肝脏干细胞系细胞阻滞于G1期，处于S期和M期细胞比例下调，同时向成熟细胞形态分化，低剂量OSM可以使HTC肿瘤细胞凋亡，高剂量OSM将导致HTC细胞死亡;而OSM不引起肝脏干细胞的凋亡，可诱导其向成熟细胞分化。

　　本实验结果显示，在低、中分化组HCC组织中OSM 表达明显低于高分化组(P<0.05)，低分化与中分化组间差异无统计学意义(P>0.05)，OSMR表达在3组之间差异均无统计学意义(P>0.05);HCC组织中临床Ⅲ期OSM表达低于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05)，OSMR表达在临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期间无显著差异(P>0.05);HCC组织中OSM、OSMR分子表达均明显低于正常肝组织及血管瘤组织(P<0.05)，正常肝组织与血管瘤组织中OSM、OSMR水平差异无统计学意义(P>0.05)。研究表明，肿瘤细胞无论在原发部位或继发部位都与周边环境存在着密切的关系，在周边的肿瘤浸润及浸润边缘的反应性炎症往往通过调控一些细胞因子(T细胞、巨噬细胞、NK细胞等)以及在这些细胞因子参与下的信号传递，在肿瘤周边形成一种免疫特定环境(immunological privileged milieu)[8]。这种免疫特定环境在局部限制肿瘤细胞生长，防止远处转移，并诱导淋巴细胞归巢。而肿瘤细胞自身的免疫逃避使得肿瘤组织中巨噬细胞活化减少，肿瘤患者T细胞CD3分子§链表达下降，导致T细胞的活化障碍，从而致使HCC临床各期组织中OSM、OSMR的表达差异。本研究认为癌组织中的OSM、OSMR表达减少，尤其OSMR在临床各期表达减少或缺失，OSM、OSMR结合形成异源二聚体复合物明显减少，使得结合在gp130BOX1处的JAK被激活减弱，导致信号传导通路受阻，使得其抑制肿瘤细胞生长的生物学效应难以发挥，肿瘤细胞得以“逃逸”,从而表现为恶性肿瘤无限制生长的特性。

　　综上所述，OSM、OSMR的表达和HCC临床分期及肿瘤的分化程度密切相关，OSM、OSMR 表达的差异对HCC的发生发展可能起重要作用，对肝癌发病机制的阐明，并为肝癌的早期诊断和进一步基因介导治疗可能提供新途径。

　　【参考文献】

　　[1] 孙燕，陆道培，胡亚美，等.内科肿瘤学[M].北京：人民卫生出版社，2001，1：577-578.

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　　[4] Boniface K,Diveu C,et al.Oncostatin M secrested by skin infiltrating S[J].Immunol,2007，178(7):4615-22.

　　[5]Vestweber D. Ligandspecificity of the selectins[J].Cell Biochem,1996,61(4): 585-591.

　　[6] Douglas A M,Grant S L,Goss G A,et al.Oncostatin M Duces defferentiation of the breast cancer cells[J].Int J Cancer,1998,75(1):64-73.

　　[7] 尉承泽，赵士富，李晓莉.抑瘤素对肝源性细胞体外生长的影响[J].军事医学科学院刊,2003;9：26-30.

　　[8] Wang JM,Deng X,Gong W,et al.Chemokines and their role in tumor growth and metastasis[J].Immunol Methods,1998;220(1-2):1-17.