大黄 虫丸对阿霉素肾硬化大鼠血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α的影响

　　【摘要】 目的 探讨大黄虫丸对阿霉素肾硬化大鼠尿蛋白排泄率、血脂、血浆血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)的影响。方法 大鼠在单侧肾切除、分次阿霉素尾静脉注射的基础上喂饲高脂饲料,造成弥漫性系膜增生伴局灶节段性肾小球硬化动物模型。将大鼠分为假手术组、空白组、大黄虫丸组、苯那普利组,观察各组大鼠尿蛋白、血脂、血浆TXB2和6-Keto-PGF1α水平。结果 大黄虫丸可明显降低大鼠尿蛋白排出量;降低血浆胆固醇含量;升高血浆6-Keto-PGF1α及降低TXB2水平。结论 大黄虫丸能够祛瘀扶正,促进气血运行,通畅血脉,改善血流动力学,对阿霉素所致的肾损害具有一定的保护作用,其机制可能与其调节血栓素/前列腺素平衡有关。

　　【关键词】 大黄虫丸;血栓素B2;6-酮-前列腺素F1α;大鼠

　　Effect of Dahuangzhechongwan on Plasma TXB2 and 6-Ket-PGF1α of Rats with Adriamycin- induced Nephrosclerosis

　　CHEN Ji-hong, SUN Wei, GAO Kun, et al

　　TCM Hospital of Jiangsu Province, Nanjing 210029, China

　　Abstract：Objective To observe the effect of Dahuangzhechongwan on protein excretion, serum cholesterol, TXB2 and 6-keto-PGF1α in rats with adriamycin-induced nephrosclerosis. Methods The rats received twice-intravenous injections of adriamycin after one kidney was removed, and were fed with hyperlipide food to establish an animal model for diffusion mesangioproliferation following with focal segmental glomerulosclerosis. The rats were randomly divided into shame-operated group, adriamycin nephrosclerosis group, Dahuangzhechongwan group, benazepril group. Urinary protein excretion, blood fat, TXB2 and 6-keto-PGF1α were observed. Result Proteinuria extract was decreased, the plasma cholesterol was significantly lower, the level of TXB2 was cut down and 6-Ket-PGF1α was increased by Dahuangzhechongwan. Conclusion Dahuangzhechongwan has the role of simutianeous application of elimination and tonification, promoting the circulation of Qi and blood, eliminating blood stasis, improving the hemodynamics. Dahuangzhechongwan has the renal protection on rat with adriamycin-induced nephrosclerosis, the mechanism may be relate with adjusting the balance of TXB2 and 6-keto-PGF1α.

　　Key word：Dahuangzhechongwan;TXB2;6-keto-PGF1α;rat

　　大黄虫丸出自《金匮要略·血痹虚劳病脉症并治第六》,乃医圣张仲景所创,其方构思精巧,以大黄荡下逐瘀、虫破血通络为君;配以水蛭、虻虫、蛴螬活血通络、攻逐瘀血,合以桃仁、干漆增强活血祛瘀之功;佐以黄芩清热,杏仁利气,芍药、地黄、甘草、白蜜滋阴润燥养血;酒服以行药势为使药。该方融补虚扶正、清利祛邪、活血逐瘀为一体,方中药物配伍适合慢性肾小球疾病肾虚湿瘀这一病理机制,我们用之于临床,对延缓肾功能衰竭的进展取得了良好的疗效。在此基础上,引入阿霉素肾硬化大鼠模型,进一步探讨其作用机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物和饲料

　　健康雄性SD大鼠,周龄8～12周,体重200～220 g,南京江宁青龙山动物繁殖厂提供,合格证号：SCXK20010018。高脂

　　饲料：胆固醇2%,甲硫氧嘧啶0.2%,猪油10%,全价颗粒饲料87.8%(玉米面30%,面粉30%,麸子35%,鱼粉2%,骨粉2%,食盐1%),批号050826。

　　1.2 阿霉素肾硬化大鼠模型的建立

　　大鼠适应性饲养3 d后,测尿蛋白。剔除尿蛋白阳性者,剩余大鼠行右肾摘除术：2%戊巴比妥钠0.1 mL/100 g鼠从腹腔注入后固定于手术台,腹部消毒后,于腹部中线偏右侧切2 cm长小口,结扎肾动脉,切除右肾,保留肾上腺,关闭腹腔。假手术组打开腹腔,剥离肾脏脂肪包膜即关闭腹腔,缝合切口。术后青霉素G肌肉注射3 d,2万U/鼠。术后第7天,予0.2%的阿霉素溶液以3 mg/kg的剂量大鼠尾静脉注射,第21日重复尾静脉注射阿霉素3 mg/kg,假手术组注射相应量的生理盐水。

　　1.3 分组及给药

　　随机分为4组。假手术组(A组,n=8),每天灌胃1 mL/100 g 0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液;空白组(B组,n=15),每天灌胃1 mL/100 g 0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液;中药组(C组,n=15),每天灌胃1.5 g/kg大黄虫丸与羧甲基纤维素钠混悬液;西药组(D组,n=15),每天灌胃4 mg/kg洛汀新与羧甲基纤维素钠混悬液。

　　1.4 观察指标

　　于实验第4、8、12周,收集大鼠24 h尿液,用磺基水杨酸法测蛋白定量。第12周实验结束时全自动生化检测仪检测血胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血清白蛋白(ALB)含量。第12周末大鼠眼眶取血3 mL,与0.2 mL EDTA-Na2混匀,4 ℃、3 500 r/min离心15 min,分离血浆,测血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量。TXB2、6-Keto-PGF1α放免药盒购自中国人民解放军科技开发中心放免研究所。

　　1.5 统计学方法

　　采用SPSS 11.5统计软件包进行统计学处理,计量资料用

　　x±s表示。采用One-Way ANOVA方差分析,组间两两比较采用LSD法。

　　2 结果

　　(见表1～表3)表1 各组大鼠不同时间尿蛋白的变化(略)注：与A组比较,#P<0.05;与B组比较,※P<0.05;与D组比较,△P<0.05(下同)。表2 各组大鼠血生化指标检测结果(略)表3 各组大鼠血浆放射免疫分析结果(略)

　　3 讨论

　　中医学无高脂血症这一名称,类似的描述散见于“肥人”、“膏”、“痰浊”等病证中。膏脂颇似现代医学的血脂,隶属于津液,源于水谷精微,由脾胃运化敷布,随血而循脉上下,营运全身以濡养五脏百骸。膏脂生化运转失常,过剩为害,则为病理性脂浊,聚而为痰,滞于营中,浸淫血脉,即成血脉痰浊之患,痰浊不化可致瘀血内生。本实验发现,实验结束时肾病组大鼠血浆呈粘稠不透明状,甚至呈乳白色,生化结果示CHO、TG均显著升高,提示大鼠体内“痰浊”的存在。大黄虫丸破瘀逐痰,能促进污浊之血的排泄,减轻蓄积在体内的毒物包括脂质造成的肾损害,延缓了肾脏病变进展,这可能是大黄虫丸发挥肾脏保护作用的机理之一,也是其优于苯那普利的地方。实验还观察到大黄虫丸对TG影响不明显,具体原因有待进一步研究。

　　目前,已证实在肾脏疾病时肾组织内存在明显的高凝状态,不少文献报道,在肾小球硬化时肾小球除有α2-纤维蛋白溶解抑制物沉积外,血小板活化因子(PAF)在肾小球内的产生也明显增加。此外,在受损的肾小球内,产生血栓素A2(TXA2)的能力显著亢进,而前列腺素I2(PGI2)的产生又明显低下。TXA2作为一种强有力的血小板聚集剂和血管收缩物质,促使血小板聚集、血栓形成。研究证实TXA2可显著促进肾小球系膜细胞增殖[1],这种作用可被TXA2受体拮抗剂所拮抗。在临床研究中发现,人类狼疮性肾炎TXA2合成与肾小球滤过率负相关,短期使用TXA2受体拮抗剂可以改善这些患者的肾功能;在动物实验研究中观察到,Heymann肾炎、嘌呤霉素肾病模型动物在使用TXA2抑制剂后肾的形态学损伤及蛋白尿均明显好转[2]。此外,TXA2具有刺激Ⅳ型胶原、纤连蛋白、层粘连蛋白等细胞外基质合成,使肾小球滤过率及肾血流量减少进而损害肾功能[3]。而PGI2的功能与之相反,PGI2主要是在血管壁内皮细胞内合成舒血管活性物,它是强效的扩血管剂和血小板抑制剂,PGI2刺激腺苷酸环化酶,使血小板中环磷酸腺苷(cAMP)增加以抑制血小板聚集。多项实验研究显示：PGI2可以抑制血清及细胞因子IL-1B刺激所致的系膜细胞增殖,有降低Ⅳ型胶原、纤连蛋白、层粘连蛋白A链和B1链基因表达作用[4]。肾小球内的高凝状态可直接损伤毛细血管壁,使肾小球基底膜暴露,受损的血管内皮又促进血小板的凝集,使血小板释放多种血管活性物质及阳离子蛋白。一方面增加肾小球毛细血管通透性,引起血管平滑肌增殖,另一方面损害肾小球基底膜的电荷屏障。TXA2/PGI2的平衡失调易造成血小板聚集,血管痉挛收缩、血栓形成。由于TXA2和PGI2的不稳定性,目前难以直接测定,故国内外均以测定TXB2和6-Keto-PGF1α作为判断其浓度的指标。在阿霉素肾病大鼠模型中,存在TXB2增高、6-Ket-PGF1α降低的趋势,缩血管因素明显占优,血在脉中丧失了“如水之流”的循环状态,由于血管持续性收缩,会使肾脏微循环血流减少,血液瘀积。我们研究发现,大黄虫丸可以有效降低大鼠模型的TXB2,升高6-Keto-PGF1α,调整了TXA2/PGI2的比例,纠正了机体凝血功能的紊乱,从而达到减轻肾脏病理损害的目的。

　　【参考文献】

　　[1] 吴升华,林致华,练棣华.系膜增殖肾炎中花生四烯酸对系膜细胞产物增殖的作用[J].中国病理生理杂志,1995,13(11)：263.

　　[2] Weise WJ, Naton Y. Fish Oil has proective and therapeutic effects on proteinuria in passive Heymann nephritis[J].Kidney Int,1993, 43：359.

　　[3] 吴升华,Hucke B.花生四烯酸氧化产物对肾毒性肾炎肾脏血液动力学的影响[J].中国病理生理杂志,1995,13(11)：66.

　　[4] Bruggeman L, pellicoro JA. Thromboxance and prostacylin differentially regulate murine extracellular matrix gene expression[J].Kidney Int,1993,43：1219.