尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量在膀胱移行细胞癌中的临床意义

　　【摘要】 目的 探讨尿液脱落细胞中Survivin蛋白在膀胱移行细胞癌中表达的临床意义。方法 应用ELISA法检测60例膀胱移行细胞癌患者及10例健康志愿者尿液脱落细胞中Survivin蛋白的含量。结果 (1)膀胱移行细胞癌患者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量明显高于健康志愿者(P<0.01);(2)随着膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期的增高，尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量明显升高(P<0.01);(3)复发、≥60岁、多发及肿瘤≥2cm的膀胱移行细胞癌患者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量明显高于原发、<60岁、单发及肿瘤<2cm 组(P<0.05或P<0.01)。结论 尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量与膀胱移行细胞癌的发生、发展及预后密切相关。

　　【关键词】 膀胱肿瘤; Survivin; 膀胱移行细胞癌

　　Detection of Survivin in exfoliated urothelial cells in bladder transitional

　　carcinoma and its clinical significance

　　ZHAO Rui-ning, et al.(The Affiliated Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

　　[Abstract] Objective To investigate the contents and clinical significance of Survivin detection in exfoliated urothelial cells in bladder transitional carcinoma. Methods The contents of Survivin in exfoliated urothelial cells was measured by ELISA detection system in urine sample of 60 BTCC cases and 10 healthy volunteers. Results The contents of Survivin in BTCC was significantly higher than healthy volunteer's (P<0.01); The contents of Survivin increased significantly with increasing pathological grade and clinical stage (P<0.01); The contents of Survivin in the recurrence, above 60 year-old, multiple and tumor size more than 2cm cases were significantly higher than those of the cases with primary, below 60 year-old, solitary and less than 2cm (P<0.01 or P<0.05). Conclusion The contents of Survivin in exfoliated urothelial cells is closely associated with tumorigenesis, progress and prognosis of BTCC.

　　[Key words] Bladder neoplasm; Survivin; Urine

　　本研究应用ELISA法检测60例膀胱移行细胞癌患者和10例健康志愿者尿液脱落细胞中Survivin蛋白的含量，探讨其在膀胱移行细胞癌中的临床意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料:2005年9月-2007年2月宁夏医科大学附属医院泌尿外科住院治疗的膀胱癌患者60例，临床资料完整。男40例，女20例。年龄20-88岁，平均59.5岁。病理诊断均为膀胱移行细胞癌，其中复发性膀胱癌11例。病理分级：Ⅰ级21例，Ⅱ级22例，Ⅲ级17例。TNM分期：Tis-T1期24例，T2-T4期36例。病理学指标均由病理科资深医师确定。对照组为10例健康志愿者。

　　1.2 标本收集：取晨起后06：00-08：00的新鲜尿液标本50 ml， 3000r/min离心,弃上清，用1ml PBS液收集细胞沉渣，加200μl细胞裂解液及200μl PMSF处理15min后，离心取上清，-70℃冻存待检。

　　1.3 试剂:Survivin ELISA检测试剂盒(美国R&D公司)，购自上海优宁维生物科技有限公司;PBS和PMSF均购自江苏碧云天生物技术研究所。

　　1.4 实验方法：解冻标本样品，每孔中加入100μl样品或标准品(标准品的浓度分别为4000、2000、1000、500、250、125、62.5，单位：pg/ml),封闭酶标板,室温下孵育2h;弃去酶标板内液体,洗板3次;每孔加100μl稀释Survivin检测抗体，室温下孵育;每孔加100μl链霉素卵白素标记的HRP稀释液, 室温下孵育;每孔加100μl底物反应溶液,室温下避光孵育20min;每孔加入50μl磷酸终止液,轻微震荡混匀。在30min内，酶标仪以波长450nm读取光密度值, 标准品和样品吸光度均通过阴性对照校正,绘制标准曲线,计算尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量。

　　1.5 统计学方法:应用SPSS11.5统计软件包对所有数据进行处理。各组计量资料，以均值±标准差(±s)表示，多组间进行单因素方差分析，采用方差齐性检验，两组间进行独立样本t检验，以P<0.05为有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 健康志愿者与膀胱癌患者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量的比较：膀胱癌患者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量为2.34±0.80 ng/ml，明显高于健康志愿者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量(0.56±0.10 ng/ml)，且两者的差异有统计学意义(P<0.01)。

　　2.2 膀胱移行细胞癌临床特征与尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量的关系：尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量随病理分级的升高而增高，Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ级比较，差异有统计学意义(P<0.01);随临床分期增高，尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量有升高趋势，Tis-T1期与T2-T4期比较差异有统计学意义(P<0.01);复发、≥60岁、多发及肿瘤≥2cm的膀胱移行细胞癌患者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量明显高于原发、<60岁、单发及肿瘤<2cm 组(P<0.05或P<0.01);尿液脱落细胞中Survivin含量与膀胱癌患者性别无关(P>0.05)，见表1、2。表1 尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量表2 尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量与膀胱移行细胞癌临床特征的关系

　　3 讨论

　　Survivin是1997年耶鲁大学的Altieri等发现的凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员,是迄今为止发现最强的凋亡抑制因子。Survivin能特异地与caspase-3和caspase-7结合，抑制二者的酶原转变为有活性的酶，从而抑制caspase引起的细胞凋亡[1]。Survivin在正常组织中不表达,而在几乎所有被研究的恶性肿瘤组织中呈阳性表达,能保护特定的细胞抵抗一系列刺激原的诱导,抑制细胞凋亡,并与多种肿瘤的恶性程度和预后相关。有研究发现survivin可特异性抑制凋亡而与膀胱移行细胞癌的侵袭转移密切相关[2]。我们前期研究工作中应用免疫组化法检测膀胱肿瘤组织中Survivin蛋白的表达情况，结果也证实了其阳性表达与膀胱移行细胞癌的发生、发展及预后密切相关[3]。Survivin蛋白存在于肿瘤细胞内，肿瘤细胞可脱落进入尿液,使得通过尿液中检测survivin蛋白来诊断、监测膀胱移行细胞癌成为可能。Hou JQ等研究证实，survivin在膀胱肿瘤患者尿脱落细胞中的表达敏感性达100%，特异性77.8%[4]。本研究应用ELISA法检测尿液脱落细胞中Survivin蛋白的含量，结果显示膀胱移行细胞癌患者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量明显高于对照组，且随着膀胱移行细胞癌病理分级和临床分期的升高，其含量明显增加。结果同时显示，复发、≥60岁、多发及肿瘤≥2cm的膀胱移行细胞癌患者尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量明显高于其对照组,表明尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量可提示膀胱癌的预后及更多临床特征。

　　检测尿液脱落细胞中Survivin蛋白含量很可能是一种敏感性高、特异性强、无创、简便的膀胱癌群体筛查和随访检查的方法。但是，上尿路上皮性肿瘤的尿液中也有可能出现survivin的阳性检测结果。因此, survivin检测对膀胱癌的评价，需要更大样本量的验证，更进一步的努力工作探索。

　　【参考文献】

　　[1] Mckay T R，Bell S，Tenev T ,et al. Procaspase 3 expression in ovarian carcinoma cells increases survivin transcription which can be countered with a dominant-negative mutant，survivin T34A;a combination gene therapy strategy [J]. Oncogene,2003,22(23):3539-3547.

　　[2] Duggan B,Williamson K. Molecular markers for predicting recurrence, progression and outcomes of bladder cancer[J].Curr Opin Urol,2004,14(5):277-286.

　　[3] 赵瑞宁,陈福宝,等. Survivin和PCNA蛋白在膀胱癌中的表达及意义[J].宁夏医学杂志,2008,30(2):108-110.

　　[4] Hou JQ,He J,Wen DG,et al.Survivin mRNA expression in urine as a biomarker for patients with transitional cell carcinoma of bladder[J].Chin Med J,2006,119(13):1118-1120.