大黄等四种中草药体外抑菌活性比较

　　【摘要】 目的：研究大黄、金银花、黄连和鱼腥草四种中药材的体外抑菌活性。方法：采用琼脂扩散法和菌落计数法测定其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的体外抑菌情况。结果：中药材对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有不同程度的抑菌作用，其中大黄抑菌效果最好，其次为黄连和金银花等。结论：大黄等中药材可作为抑菌剂来开发，更好地应用于医疗与食品工业等方面。

　　【关键词】 大黄;金银花;黄连;鱼腥草;抑菌圈;菌落数

　　Experimental animal model establishment of reversible pulpitis

　　HAN Jie，YANG Qingling，MA Fengqing

　　(Jiamusi University Hospital,Jiamusi 154007,China;Stomatology Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154002,China)

　　Abstract：Objective：To explore the experimental method for the establishment of experimental animal model of reusable pulpitis.Methods：Twenty male Wistar rats were used as experimental group.The maxillary first molar of each rat in the experimental group was treated by drilling the enamel without water cooling and then the dentine was corroded with acid.The rats of the normal group without treatment were killed at 0 day.The rats of the experimental group were killed at 1,3,5 and 7 days after treatment.The maxillary and teeth were fixed,decalcified and embedded in paraffin, and after that 5μm thick serial section was prepared.The sections were stained with hematoxylin-eosin and examined under a light microscope.Results：The typical reusable inflammatory changes were observed in the pulp tissue of the experimental group.Conclusion：The method for the establishment of experimental animal model of reusable pulpitis by drilling the enamel without water cooling and then the dentine was corroded with acid is simple and feasible.

　　Key words:rat; reusable pulpitis; animal model

　　目前,常用的各类抗生素在对抗细菌方面往往容易使病原菌产生耐药性，使用在食品卫生等工业方面还易产生残留。随着公众健康意识的提高，寻求抗生素替代药品的需求愈渐迫切。中草药作为天然的抑菌药物，在生长过程中不断的与细菌抗争，因此不会产生耐药性，而且几乎无毒副作用，不会产生残留。从今后的长远发展来看，中药材作为抑菌剂的开发，将是一个前景诱人的发展方向。

　　1 材料

　　中药材：大黄、金银花、黄连和鱼腥草均来自开封市药材公司，经鉴定，分别是来自蓼科蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L.)、忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)、茛科植物黄连(CoptischinensisFranch.)、三白草科多年生草本植物蕺菜(Houttuynia cordata)。

　　1.2 菌种及其来源

　　金黄色葡萄球菌(G+)(Staphy lococcus aureus)(河南医药技师学院微生物实验室);　　大肠杆菌(G-)(Escherichia coli)(河南医药技师学院微生物实验室)。

　　1.3 培养基及其成分

　　牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(培养细菌用) 牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂2%，蒸馏水1000mL，调pH7.4～7.6，1.03×105 Pa灭菌25min。

　　2 实验方法

　　2.1 琼脂扩散法[1]

　　菌悬液的制备，用无菌生理盐水依次稀释到10-3待用(试管中加玻璃珠，为使菌悬液均匀，充分振荡20～30min)。将培养基融化，倒平板，在无菌条件下，用消毒棉签蘸取供试菌液分别均匀涂布于培养基表面，用灭菌的打孔器(直径为6mm)在每个平皿培养基上打上等距5孔，用微量移液枪将药液滴满孔，每种药做3个样，作好标记，静置30min后平稳转入37℃培养24h，取出测量抑菌直径，取平均值，对少数结果差异较大的药，重复试验。表1 抑菌圈直径比较(略)

　　2.2 药液制备

　　分别取单味中药10g首次加5倍水浸泡2h后，用烧杯盛装煮沸按不同药类型，保持沸腾10～30min;第2次加2倍水，煮沸7～20min;第3次加1倍水，煮沸5～10min。混合三次药液文火浓缩至10mL(1g/mL)，灭菌低温保存。

　　2.3 菌落计数法菌悬液的制备

　　取菌苔两环，加入10mL无菌生理盐水中(内有玻璃珠)。充分摇动，使之均匀，依次稀释至10-6待用，选择在平板上合适的计数浓度作为备用。

　　2.4 菌落计数法[2]

　　不同浓度中药液的制备，取1mL中药液加入1mL无菌生理盐水稀释。将2mL不同种类不同浓度的中药液与菌悬液以1:1的比倒混合。10min后加入 2%吐温80作为中和剂中止反应。分别吸取混合液0.lmL加入灭菌培养皿中，再加入冷至约40～50℃的培养基，涂布均匀，另做对照， 37℃下培养24h后计数，各处理3次重复。实验中所用培养皿、移液管、刮刀、牛津杯等均经160℃2h干热灭菌[3]。表2 菌落计数结果(略)

　　3 实验结果

　　3.1 琼脂扩散法实验结果

　　3.2 菌落变化结果

　　3.3 中药材对微生物杀伤能力表3 加药后菌落减少百分数

　　4 讨论

　　根据实验结果，可看出，大黄、金银花、黄连和鱼腥草等4种中药材对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用。金银花号药材对大肠杆菌比较敏感，而鱼腥草号药材对金黄色葡萄球菌比较敏感。大黄对金黄色葡萄球菌由较强的抑菌效果;黄连、鱼腥草次之，且二者抑菌作用力相当;金银花的抑菌效果不明显。可以看出大黄对金黄色葡萄球菌抑菌作用最强。大黄、黄连对大肠杆菌显示出最强的抑菌作用，且黄连稍胜于大黄;金银花对大肠杆菌表现出较强的抑菌作用;鱼腥草对大肠杆菌作用不明显。根据中药制剂浓度的不同可得出，各个浓度皆具有一定的杀菌能力。由于中药种类不同，对微生物作用的大小不同，药效也不同。浓度高时可以杀菌，浓度低时，有时只能抑菌，这和一般规律相同。同一种浓度下的不同中药制剂对菌种亦然存在不同的效果。

　　根据实验结果显示，在所选用的大黄、金银花、黄连和鱼腥草等中药材对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑制作用。其中大黄对金黄色葡萄球菌抑菌作用最强，而黄连对大肠杆菌的抑菌效果最强。所选4种中药在抑菌、杀菌、治疗疾病方面都具有一定的应用价值，可作为抑菌剂来开发应用。

　　【参考文献】

　　[1][美]布洛克TD编著.微生物生物学[M].北京：人民教育出版社，1981，343344

　　[2]李仲昆，林彬，李海蜀，等.双黄连粉针与4种抗生素伍用的体外最小抑菌浓度研究[J].中成药，1999，21(3)：137139