微米冬凌草甲素对小鼠H22肿瘤细胞凋亡的实验研究

　　【摘要】 目的：研究不同浓度的微米冬凌草甲素对小鼠H22肿瘤细胞凋亡的影响。方法：以腹水瘤(H22)小鼠为对象，观察对照组和高、中、低三个浓度的微米冬凌草甲素对小鼠H22肿瘤细胞凋亡的关系。结果：小鼠H22肿瘤细胞对微米冬凌草甲素较敏感，不仅能明显延长小鼠生存期(P<0.01),与丝裂霉素结果相近(P>0.05);而且实验后小鼠体重没有明显下降，肿瘤细胞的凋亡率随浓度升高而增大。结论：不同浓度的微米冬凌草甲素能够诱导肿瘤细胞的caspase3基因表达，引起细胞的凋亡，并呈剂量依赖性。

　　【关键词】 微米冬凌草甲素;细胞调亡

　　Comparison of nitrogenous neuron and nerve fibers of rat left and right ventricular myocardium

　　SONG Hanjun,HU Qingyun，WANG Peijun，HAN Xi，CHEN Naifeng

　　(College of Basic Medicine of Jiamusi University, Jiamusi 154007,China)

　　Abstract：Objective：To observe the morphology and distribution of the nitrogenous neurons and nerve fibers in the rat left and right ventricular myocardium in an effort to explore the effect of the nitrogenous neuron distribution in the left and right ventricular myocardium on the development of related diseases.Methods：The NADPH immunohistochemical assay was used to show the morphology and distribution of nitrogenous neurons and nerve fibers in the rat left and right ventricular myocardium.Results：A great number of nitrogenous neurons and nerve fibers were distributed in the rat left ventricular myocardium,with the neurons showing fusiform or triangle shape,while less N-neurons and nerve fibers were distributed in the rat right ventricular myocardium,with the neurons showing round,tadpole or oval shape.The nitrogenous nerve fibers showed bead-like,cord-like,thin shape and variable shape and their directions were mostly parallel with the longer axis of the myocardial fiber.The volume density and numerical density of the nitrogenous neurons and fibers were higher in the left ventricle than those of the right ventricle,with a significant difference(P<0.01).Conclusion： The distribution of nitrogenous neurons and nerve fibers in the rat left and right ventricular myocardium suggests that nitrogenous neurons may be involved in the regulation of physiological function and pathologic process.

　　Key words:nitrogenous neuron; rat; ventricle

　　肝癌是我国较常见的恶性肿瘤。在各种恶性肿瘤引起的国民死亡率中位居第二。目前对于肝癌的发生和发展过程与细胞凋亡的关系尚认识不足。因此，深入了解肝癌细胞生长增殖的规律，研究诱导肝癌细胞凋亡的途径和机制，有助于探索肝癌治疗的新方法，为肿瘤的预防、控制和治疗提供重要的理论依据。冬凌草甲素是冬凌草的主要成分之一，为贝壳杉烷二萜类化合物，对培养中的多种肿瘤细胞具有杀伤效应，而对正常细胞生长无影响。向小鼠体内肿瘤注射冬凌草甲素可抑制肿瘤生长。但由于冬凌草甲素本身为晶体状结构，不溶于水，因而不利于体内的吸收，极大地降低了药效。把药物的单元尺寸减小至微米甚至亚微米级，则药物的活性和生物利用度可能得到大幅度提高。本实验通过不同浓度的微米冬凌草甲素作用于H22小鼠肿瘤，观察其对肿瘤细胞中Caspase3基因表达的影响，引起肿瘤细胞的凋亡从而延长小鼠的生存期，提高其生存率。

　　1 材料和方法

　　1.1 分组和动物模型的建立

　　由佳木斯大学实验动物中心提供昆明种小鼠100只，雄性，体重18～22g。艾氏腹水瘤(H22)大鼠(Aishi Sorcoid Tumor Rat)，雄性，购于哈尔滨肿瘤研究所。无菌条件下用注射器抽取腹水以灭菌生理盐水稀释调整细胞量为1×107个/mL，接种到100只小鼠腋下，每只0、2mL，1×107个/mL)中，制作实体瘤模型。并分别随机分成5组，每组20只。A组，低剂量组;B组，中剂量组;C组，高剂量;阳性对照组和阴性对照组。24h后每天分别灌胃不同浓度的微米冬凌草甲素，阳性对照组灌胃丝裂霉素，阴性对照组灌胃生理盐水。连续灌胃10d。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集

　　第11天后处死小鼠，取肿瘤组织，称重计算抑瘤率，然后保存于10%中性福尔马林中。用于常规病理切片HE染色和细胞凋亡检测。

　　1.2.2 Caspase3的免疫组化检测

　　SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司。具体操作参见试剂盒说明。

　　1.3 统计学处理

　　结果用均数±标准差(x±s)表示，组间均数的比较用方差分析。

　　2 结果

　　2.1 对照组小鼠于第2天开始出现肿块，而给药组则于第6天出现肿块，说明微米冬凌草甲素对小鼠H22作用明显。抑瘤率与对照组比较差异明显且随剂量的增加抑瘤效果增强;该瘤对丝裂霉素也较敏感。瘤重也明显低于生理盐水组(P<0.01)，见表1。表1 微米冬凌草甲素 对H22小鼠抑制作用(略)

　　2.2 免疫组织化学检测肿瘤细胞凋亡明显，细胞凋亡率呈明显的剂量依赖型。

　　3 讨论

　　微米冬凌草甲素对H22实体瘤表现出明显的抑瘤作用可使荷瘤小鼠的瘤重明显减轻。与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)，且随剂量的增加抑瘤效果增强，抑瘤作用与阳性对照组比无显著性差异(P<0.05)。微米冬凌草甲素能透过肿瘤细胞膜进入细胞内，通过激活Caspase级联反应，诱导肿瘤细胞的凋亡。

　　【参考文献】

　　[1]张典瑞，任天池.冬凌草甲素的药学研究进展[J].中国药学杂志,2003,38(11):817

　　[2]张春玲,吴立军.冬凌草甲素通过激活caspase诱导HeLa细胞凋亡[J].中国药理学通报,2003,15(5):52525

　　[3]张典瑞，任天池，娄红祥，等.冬凌草甲素硬脂酸固态类脂纳米粒的实验研究[J].中国药学杂志,2004,39(2):123

　　[4]张典瑞，任天池.冬凌草甲素固态类脂纳米粒在小鼠体内的组织分布及兔体内的药代动力学[J].药学杂志,2005,40(6):573576