高效液相色谱法测定清热解毒合剂中黄芩苷的含量

　　【摘要】 目的：建立清热解毒合剂的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：Thermo ODS-2HYPERSIL C18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液(45：55，V/V)，流速：1.0ml·min-1，检测波长：312nm，柱温：30℃。结果：黄芩苷在0.40～2.00μg范围内线性关系良好(r =0.9993);平均加样回收率为99.96%(n=5)，RSD为0.93%。结论：该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于清热解毒合剂的质量控制。

　　【关键词】 高效液相色谱法 清热解毒合剂 黄芩苷 含量测定

　　Determination of Baicalin in Qingrejiedu Mixture by HPLC

　　LU zhen-jiang1 SUN dong-mei2

　　(1Jilin city Delin medicine company with limited liability, Jilin, Jilin 132001, China;

　　2Jilin Institute for Food and Drug Control, Jilin, Jilin 132001, China)

　　【Abstact objective】To set up a method for quality control of Qingrejiedu Mixture. METHOD HPLC method was developed to quantitative determination. COLUMN C18-Thermo ODS-2HYPERSIN(4.6mm×250mm,5μm).The mobilic phase was methanol-0.4%phosphoric acid solution (45:55V/V).The column temperature was 30℃,the wavelength for detection was 312nm,flow rate was 1.0ml·min-1. RESULTS The TLC spots were quite clear. The Baicalin showed a good linear relationship within a range of 0.40～2.00μg (r =0.9993), the average recovery was 99.96%(n=5), RSD=0.93% .CONCLUSION The method is simple, accurate and suitable for its assaying.

　　【Key words】 HPLC; Qingrejiedu Mixture; Baicalin; determination

　　清热解毒合剂是由黄芩、金银花、大青叶、玄参等药物组成。该方是在大量临床实践的基础上，以中医辨证为主，结合现代医学及现代药理研制出的治疗流感、病毒感染、上呼吸道感染的有效药物。为更好地控制其质量，保证该制剂的临床疗效，本文采用HPLC法对制剂中的主要有效成分黄芩苷进行了含量测定，现报道如下。

　　1 实验材料

　　LC-2010A 高效液相色谱仪，CLASS-VP 色谱工作站;黄芩苷对照品(批号：110715-200212)，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用;牛黄清火丸为市售样品清热解毒合剂(吉林市船营区中医院制剂室提供，批号：060616，060617，060618)。甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱：DiamosilTM(钻石)C18(5μ 250×4.6mm，);流动相：甲醇-水-冰醋酸 (50：50：1);检测波长：274nm;流速：1.0ml/min;柱温：室温(25℃);进样量：对照品溶液5μl，样品溶液10μl;理论塔板数按黄芩苷峰计应不低于1500。

　　2.2 溶液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取在60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品10ml，置50ml容量瓶中，加60%甲醇适量，超声(功率250W)处理20分钟，放置至室温，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

　　2.2.3 阴性对照溶液的制备 取除黄芩以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成口服液，再按供试品制备方法，制成阴性对照溶液。

　　2.3 干扰试验 分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液10μl，对照品溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。从图中可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间(11.850min)的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。

　　2.4 线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml约含0.1mg的溶液，分别精密量取对照品溶液4、8、12、16、20μl，进样测定。以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，得回归方程为 Y=1151340.8+100157.4 X，r =0.9993，线性范围0.40～2.00μg。

　　2.5 精密度和稳定性试验 取样品(批号：060616)按“2.2.2 供试品溶液的制备”方法制备样品溶液，重复进样5次，进样量10μl，其峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.9%，表明精密度较好。取同一样品溶液，在0、2、4、10、24h分别进样测定，结果5次测得值(黄芩苷，mg/ml)的RSD为1.3%，可见黄芩苷在24h内稳定。

　　2.6 重现性试验 取供试品(批号： 060616)，共5份，分别按“2.2.2 供试品溶液的制备”方法制备样品溶液，进行测定，其黄芩苷含量的RSD为0.6%，表明重现性较好。

　　2.7 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品(批号： 060616，含量为0.513mg/ml)适量，共5份，分别定量加入黄芩苷对照品适量，按“2.2.2 供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。

　　2.8 供试品的测定及限度制定 取多批供试品，照正文所述方法测定黄芩苷的含量，结果各批样品中黄芩苷的含量均高于0.45mg/ml，暂定为本品每1ml含黄芩以黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于0.35mg。表1 加样回收率试验结果表2 3批样品含量测定结果

　　3 讨论

　　3.1 检测波长的确定 在选择检测波长时，笔者取样品在200～350nm波长范围内进行扫描，结果在274nm处有最大吸收，故选择274nm为检测波长。

　　3.2 流动相的选择 笔者比较了甲醇-水-磷酸(50: 50:0.3)和甲醇-水-冰醋酸(50: 50:1)等流动相，结果以甲醇-水-冰醋酸(50: 50:1)分离效果最好。