K-ras和C-myc在肺癌中表达的意义

　　【摘要】 目的：探讨原发性肺癌中K-ras 和c-myc 的表达与肺癌发生发展之间的关系。方法：应用免疫组化法测定53例肺癌标本及19 例正常人的肺组织中K-ras 和c-myc的表达。结果：肺癌细胞中K-ras 和c-myc 的阳性表达率明显高于正常人肺组P<0.01);K-ras和c-myc在不同病理类型(确切p=1) ，和不同大小的肺癌组(P>0.05)之间的差异无显著性;在三组不同分化程度的肺癌组间的阳性表达率差异有显著性(P<0.05);K-ras和c-myc在淋巴结有转移组的阳性表达率明显高于无转移组，差别有显著意义(P<0.05)。结论：K-ras和c-myc蛋白的过度表达参与了人肺细胞癌的发生发展过程。

　　【关键词】 K-ras基因; c-myc基因

　　Significance of expression of K-ras and c-myc in lung carcinoma

　　XU Shuang，WANG Kaifeng,JIA Juwen

　　(Dpartment of Thoracic Surgery ，the First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003,China)

　　Abstract：Objective：To investigate the relationship between the expression of K-ras, c-myc and their role in the occurrence and development of lung carcinoma. Methods：The expression of K-ras and c-myc was detected by immunohistochemistry in 53 patients with pulmonary carcinoma and 19 cases of normal lung tissue (NLT ).Results：There was an extensive expression of K-ras and c-myc in tumor cells (TC);Difference was not found in groups of pathological types(P<0.01) and tumor size(P>0.05).The expression of K-ras and c-myc in TC was both correlated with differentiated degree of lung cancer(P<0.05);In lung carcinoma with lymph node metastasis,there was a significant difference(P<0.05).Conclusion：K-ras and c-myc participate in the occurrence and development of lung carcinoma.

　　Key words: K-ras; c-myc gene; lung carcinoma; immunohistochemistry

　　肺癌为当前最常见的恶性肿瘤之一，虽然在基因研究,药物发现以及肺癌扫描检查方面广泛努力,肺癌的病因和发病机制仍未明确，5年生存率仅为10%～14%[1],没有明显改善,近年来肺癌的发病率和死亡率更是迅速上升,跃居肿瘤第一位[2]，严重影响着人们的生活,威胁着人们的身体健康，并且大多数肺癌患者死于无法控制的远处转移，预防并控制远处转移是肺癌治疗中急待解决的问题

　　从分子生物学角度看，细胞癌变是多因素、多阶段、多基因变异的结果。癌基因异常激活和表达在原发性肺癌发生发展中的作用越来越受到人们的重视。ras基因是肺肿瘤的易感基因之一,受环境致癌物质的作用被激活参与肿瘤的形成,导致DNA损伤、基因突变及肿瘤形成等一系列过程。自从第一个关于肺腺癌ras基因突变与病人不良预后有关的报道后[3],又有许多支持和反对的研究报道[3,4],总之,到目前为止对ras基因的研究依然是热点,结果也存有争议。c-myc是一种原癌基因,定位于人类染色体8q24位置,是一种螺旋-环-螺旋亮氨酸的拉链蛋白,相似于US-FEY E2F蛋白质家族，表达产物为核内特异性DNA结合蛋白。该基因是决定细胞从G0/G1期进入S期的开关,除了调控细胞周期、刺激细胞增生外,还具有刺激细胞凋亡的作用。一方面激活那些介导细胞增殖的基因,同时也激活介导细胞凋亡的基因,使细胞处于两种状态之中:增殖或凋亡。当c-myc低水平表达时,细胞的生长受到抑制;当表达水平增高,且在血浆生长因子存在的前提下,细胞进入增殖状态;当缺乏生长因子时,c-myc的高表达反而导致细胞凋亡[5]。本研究通过检测阅K-ras和c-myc蛋白在原发性肺癌及正常人肺组织中的表达，旨在探讨K-ras 和c-myc癌基因与肺癌发生发展的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料来源

　　本研究的标本随机取佳木斯大学附属第一医院病理科2004～2008年间经肺部手术切除存档蜡块72例。其中原发性肺癌53例，正常人对照肺组织19例，所有研究材料均经10.00%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，脱蜡水化后，修复抗原，DBA显色，蒸馏水冲洗，苏木精一伊红染色后，复核病理诊断，并按WHO标准分型、分级。其中鳞癌27例，腺癌21例，小细胞癌5例;高分化、中分化、低分化分别为11、15和22例;按肿瘤大小分为0≤3cm,3cm<0<5cm和0≥5cm 3组，分别为14，17和22例。其中男32例，女21例;年龄最小者2岁，最大者69岁，按年龄分为≤50岁，50 ～60岁，≥60岁3组，分别为16,19和18例，平均46.5岁;所有病例均有淋巴结情况记录，其中转移者26例。所用研究材料术前均未接受放疗、化疗。

　　1.2 研究方法

　　1.2.1 兔抗人K-ras(基因)抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，人K-ras ELISA kit购自上海晶天生物科技有限公司;抗c-myc标签鼠单克隆抗体购自北京康为世纪生物科技有限公司，人c-myc ELISA Kit 均购自北京北方伟业发展有限公司;双花扁豆凝集素(DBA)ELISA试剂盒购自北京北方伟业发展有限公司。

　　1.2.2 结果判定

　　参照maruyama法制定免疫组化判定标准： K-ras和c-myc蛋白阳性反应为细胞浆/细胞核出现棕黄色颗粒，每张切片随机选取10 个高倍视野，每个高倍视野计数，100个癌细胞，计数阳性细胞百分数，阳性细胞数≤5.00%为阴性。

　　1.3 统计学处理

　　数据用均数±标准差(x±s)表示，采用非参数检验Kruskal-Wallis Test和Man-Whitney test进行多组间的比较。采用spearman相关分析，应用SPSS 10.0软件进行卡方检验和Kendal相关分析，P<0.05为差异有显著性。

　　2 结果

　　2.1 K-ras和c-myc蛋白在肺癌组织中的表达

　　K-ras和c-myc在肺癌组织中表达较为广泛，阳性颗粒呈位于细胞浆、细胞核，呈棕黄或棕褐色。肺鳞癌及小细胞癌中，K-ras和c-myc主要表达在细胞核;K-ras和c-myc在腺癌中则主要分布在细胞浆，癌组织中阳性细胞呈弥漫性、小巢状或散在分布;肺支气管豁膜上皮细胞的胞浆中可见少量表达，肺癌细胞的着色明显强于正常肺组织。K-ras 和c-myc蛋白在肺癌组织中的阳性表达率均高于正常人肺组织。(χ2=21.22,10.25; P<0.01),见表1。表1 K-ras和c-myc蛋白在肺癌及肺正常组织中的表达(略)

　　2.2 K-ras和C-myc的表达与病理类型、组织分化程度、肿瘤大小及淋巴结转移的关系

　　病理类型K-ras和C-myc在鳞癌细胞的阳性率分别为71.40%和59.10%，腺癌细胞中为68.10%和59.90%，小细胞癌中为80.00%和60.00%。K-ras和C-myc在肺鳞癌细胞、腺癌细胞、小细胞癌中的表达差别无显著性意义。

　　组织分化程度K-ras和C-myc在高分化肺癌中的阳性表达率分别为27.27%和18.8%，在中等分化者的阳性表达率为73.33%和60.00%，在低分化者的阳性率为86.36%和77.27%。K-ras和C-myc在3组不同分化程度肺癌中的阳性表达率差异有显著性(P<0.05)。

　　肿瘤大小在D<3CM组，肺癌细胞K-ras和C-myc的阳性率分别为71.40%和57.10%;3CM5cm组肺癌细胞的阳性率为72.70%和59.10%。经过统计学分析，在不同大小的3 组肺癌中，K-ras和C-myc的阳性率差别无显著性。

　　淋巴结转移：淋巴结有转移组的肺癌细胞K-ras和C-myc阳性表达率分别为88.40%和76.80%;淋巴结无转移组的肺癌细胞中K-ras和C-myc的阳性率分别为57.20%和40.70%。K-ras和C-myc在有转移组的肺癌细胞中阳性表达率明显高于无转移组，差别有显著意义(P<0.05)。表2 肿瘤细胞中K-ras和c-myc的表达与肿瘤病理类型、

　　组织分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移的关系(略)

　　3 讨论

　　K-ras是肺“启动”癌变的关键基因之一[7]。它属于RAS原癌基因家族,编码p21蛋白,p21蛋白位于细胞质膜内面,与GTP结合有GTP酶活性并参与cAMP水平调节。回顾性研究表明,吸烟是K-ras基因发生突变的危险因素之一[8]。当K-ras基因发生异常时,p21蛋白结构发生改变,与GTP的结合力减弱,GTP酶活性降低, GTP不易分解为GDP,自身调节被阻断,使之失去信息转导作用,从而使细胞无节制的分裂和增殖,导致细胞癌变[9]。约1/3肺腺癌患者存在癌基因k-ras的突变。当将反义k-ras基因转移入有k-ras基因突变的细胞中，阻断k-ras基因的表达，可抑制细胞的增殖和肿瘤形成。此外，已有抗-K-ras核酶腺病毒载体成功抑制异种移植肺癌生长的报道[10,11]。c-myc是一种原癌基因，在调节DNA合成、细胞凋亡、分化及细胞周期的进行中起重要作用。从结构上来看，c-myc属于反式作用因子或称转录因子。c-myc癌基因的异常表达是癌变过程中较早出现的分子改变，与肿瘤的启动及癌性增生密切相关问。研究表明，c-myc蛋白的梭基端含核酸靶序列，氨基酸富含谷氨酞氨和脯氨酸，为肿瘤转化所必需。已有研究表明，在多种肿瘤中c-myc 蛋白和mRNA 水平均过度表达。本研究显示，K-ras和c-myc在肺癌组织中呈高表达，其阳性表达率均高于正常肺组织，提示K-ras和c-myc的过度表达与肺癌的发生、发展有关。研究显示，K-ras和c-myc在肺癌的病理类型、肿瘤大小的阳性表达差异无显著性(P>0.05) ，而与肺癌的组织分化程度、淋巴结转移有关，提示K-ras和c-myc与肺癌的发展有关。

　　【参考文献】

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