急性脊髓损伤时NSE和ET的表达及临床意义

　　【摘要】 目的:探讨急性脊髓损伤(SpinalCordInjurySCI)患者血清神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specificenolaseNSE)和内皮素(EdinthlinET)含量的动态变化及临床意义。方法：临床确定的SCI患者10例，采集损伤后24h、72h、7d、14d的静脉血，采用酶联免疫法测定血浆NSE和ET水平，与10例健康成人对照，观察其动态变化。结果：SCI患者早期血浆NSE和ET含量较对照组明显升高(P<0.01)，且随时间延长，二者含量均逐渐降低，NSE和ET水平72h时达高峰，14d时明显下降，但仍高于正常对照组。结论：NSE、ET可以作为监测脊髓损伤严重程度的客观指标。

　　【关键词】 脊髓损伤;神经元特异性烯醇化酶;内皮素

　　Expression of neuron-specific enolase and endothelin

　　in acute spinal cord injury and its clinical significance

　　QIN Kai，ZHOU Chengfu，LI Yafeng

　　(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China)

　　Abstract：Objective：To investigate the dynamic changes in the serum neuron-specific enolase (NSE) and endothelin (ET) in acute spinal cord injury (SCI) and their clinical significance.Methods：We collected the venous blood from clinically identified 10 patients with SCI at 24h, 72h, 7d and 14d after injury and determined the plasma levels of NSE and ET by using enzyme-linked immunosorbent assay and observed the dynamic changes of NSE and ET compared with 10 healthy adults as control.Results：The NSE and ET plasma levels of SCI patients were significantly increased compared with the control group(P<0.01),and with time increasing,the NSE and ET levels gradually reduced, reached a peak at 72h and obviously decreased at 14d,and even so, the NSE and ET levels of SCI patients still higher than those of the normal control group.Conclusion：NSE and ET can be used as the objective indicators to monitor the severity of spinal cord injury..

　　Key words:spinal cord injury; neuron-specific enolase; endothelin

　　脊髓损伤(SpinalCordInjurySCI)是指由于外界直接因素或间接因素导致的脊髓损伤，在损伤的相应节段出现神经支配区的各种运动、感觉和括约肌障碍，肌张力异常及病理反射等相应改变。常有脊柱骨折、脱位或火气伤引起。多见于车祸、跌倒、坠落、运动创伤、挤压伤和枪伤等。且目前以中青年SCI最多见。神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolaseNSE)和内皮素(endothelinET)是近年来研究较多的生物活性物质，在人脑损伤诊断中已有明确应用，与SCI的发生发展相关情况鲜有报道。本文采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定10例SCI患者血浆NSE和ET含量，并与对照组进行比较，对NSE和ET在SCI发病过程中的病理作用及临床意义进行探讨。

　　1. 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　SCI患者组：10例(男8，女2)均为本院2009-03～2009-07住院患者，诊断明确。颈椎6例，胸椎4例，年龄27～64岁，平均(43.3±11.5)岁。病因：高空坠落伤6例，车祸4例。全部病例均可除外脑损伤。

　　对照组：共10例(男5，女5)，年龄36～70岁，平均(51±11.4)岁，均为健康者且经体检除外心、脑、肾疾病。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集

　　SCI组患者分别于损伤后第24h、72h、7d、14d各采取晨起空腹静脉血2mL，置于含10%EDTA-Na230μL和抑肽酶20μL的试管中混匀，于低温高速离心机中4℃、4000r/min离心10min，分离血浆置于-20℃保存，待测。对照组亦分别抽取晨起空腹静脉血2mL以同样的方法离心，保存，待测。

　　1.2.2 NSE和ET的测定

　　采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)。测定前将样本进行二次分离提取。采用ADL试剂盒，严格按照说明书进行操作，结果由MoH99-15酶标仪进行读取，经微机数据处理得出各测定样本NSE和ET的值。

　　1.2.3 统计学处理

　　各组检测样本用表示，各样本均数采用SPSS13.0系统进行方差分析。

　　2 结果

　　结果表明，SCI后患者血浆NSE、ET含量均明显升高，与对照组比较有显著差异(P<0.01);在SCI发病的不同阶段，血浆NSE、ET水平不同，伤后24h，NSE和ET的水平即明显开始升高,72h达到高峰，7d时有所下降，14d呈明显下降，但仍高于正常，见表1。表1 SCI患者血浆NSE、ET、水平动态变化(略)注：与对照组比较P<0.01。

　　3 讨论

　　SCI涉及到瞬间的原发性损伤和其后的继发性损伤，两者最终导致脊髓功能的严重损害。SCI后的病理级联反应导致了其组织结构进行性延迟性损害,多种病理生理因素参与了这一复杂过程,如继发性缺血、NO、兴奋性氨基酸及脂质过氧化发挥作用等[1]。NSE是糖酵解过程中的一种关键酶,它特异性地存在于神经细胞的胞质中,其中绝大部分存在于中枢神经系统的灰质内。当缺血性改变时,神经元变性坏死,神经髓鞘崩解,NSE释放,可以透过血-脊髓屏障进入体循环,因而可在外周血中测定。NSE与乳酸脱氢酶、醛缩酶、肌酸激酶不同,它不与细胞内肌动蛋白结合,因而很容易释放出来[2]。本文结果表明急性脊髓损伤后血浆NSE的水平明显升高,72h左右升至高峰,14d左右仍高于正常水平。其动态变化规律提示,在SCI早期(24h),即存在神经元损伤,细胞膜的完整性发生变化,细胞内大量蛋白迅速进入间质,14d后NSE血浆中的浓度明显下降,提示早期检测血浆NSE可作为监测SCI病情严重程度的客观指标[3]。ET是目前发现的体内较强的缩血管活性多肽之一，并且也是一种能够在中枢神经系统中表达的神经递质。在生理条件下,血浆中ET含量很低,但在缺血、缺氧、出血、创伤等病理条件下,ET含量可显著升高并持续较长时间[4]。本实验结果显示,SCI后24h，ET水平即显著升高,72h左右升至高峰，14d时仍高于正常水平。因ET为缩血管物质，可直接使脊髓内微血管收缩，导致脊髓微血管通透性增加、脊髓缺血，神经损伤，从而使ET通过损伤的血-脊髓屏障，进入到血液循环，临床实验研究也发现脊髓损害的严重程度与血浆ET值有显著相关[5]。在动物实验中资料表明,脊髓损伤后血管和神经生化机制是脊髓继发性损伤的两大机制,而血管机制是脊髓损伤后神经功能能否恢复的关键[6]。资料表明[7],脊髓损伤早期给予非选择性ET受体拮抗剂,可明显改善损伤脊髓血流及促进脊髓功能的恢复,这也充分证实ET参与了脊髓继发性损伤。本文通过对脊髓损伤中NSE、ET水平动态变化的观察，认为NSE、ET可以作为监测脊髓损伤严重程度的客观指标。可望揭示继发性脊髓损伤的复杂病理机制,为脊髓损伤的临床研究提供理论依据。

　　【参考文献】

　　[1]Fehlings MG,Sekbon LHS.Celluar,ionic and biomolecular mechanismsof the injury process[J].In:Tator CH,Bensel EC.Contemporary Manage-mentof Spinal CordInjury:From Impactto Rehabilitation.New York:American Association of Neurological Surgeons,2000，3350

　　[2]Cao F,Yang XF,Liu WG,et al.Elevation of neuron-specific enolase and s-100betaprotein level in experimental acute spinal cord injury[J].J Clin Neurosci，2008，15(5):541544

　　[3]陈长青，练克俭，贾连顺，等.猪胸腰段脊髓火器贯通伤后神经元特异性烯醇化酶的早期表达[J].脊柱外科杂志，2006，4(4)：229232

　　[4]Yanagiswa MH,Kurihara Y.Anovel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells[J].Nature,1988,332(6163):411415

　　[5]刘晓光,刘忠军,党耕町.脊髓损害中内皮素的变化[J].中华骨科杂志,1996,16(7):460461

　　[6]Tator CH,Koyanagi I.Vascular mechanism in the pathophysiology of human spinal cord injury[J].J Neurosurg,1997,86:483492

　　[7]鲁凯伍,侯铁胜,傅强.内皮素受体拮抗剂PD142893对大鼠损伤脊髓血流及功能的影响[J].第二军医大学学报,1999,20:519521