放疗前后宫颈癌中Survivin表达及凋亡研究

　　【摘要】 目的 研究放疗前后宫颈癌组织Survivin表达水平及凋亡，探讨其与放疗效果的相关性。方法 选取38例接受放疗的宫颈癌患者，用免疫组化法分别检测放疗前后Survivin的表达及TUNEL法检测细胞凋亡的情况，并评价放疗效果。结果 Survivin表达阴性和阳性相比，前者的放疗效果优于后者，差异有统计学意义(P<0.05);放疗后获得临床稳定的患者与获得临床部分缓解的患者相比， Survivin上调的比例明显高于后者，差异有统计学意义(P<0.05);放疗后Survivin阴性表达者的细胞凋亡明显增多，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Survivin基因有望成为宫颈癌逆转放疗抵抗的新靶点。

　　【关键词】 宫颈癌;survivin表达;凋亡;放疗;抵抗

　　Study the expression and apoptosis of surviving pre-and post-radiotherapy in cervical carcinoma

　　FAN Yang, et al. (Ningxia People's Hospital, Yinchuan 750021, China)

　　[Abstract] Objective To study the correlation between the expression of survivin or its change after radiotherapy and effect in cervical carcinoma.Methods 38 cases of women with cervical carcinoma were treated with radiotherapy. The expression of Survivin pre-and post-radiotherapy was measured by immunohistochemically; and cell apoptosis were examined by TUNEL method, and the response to the treatment was evaluated.Results The effect of patients with negative survivin of radiotherapy presented better than those with intense Survivin, and difference was significant (P<0.05). Among the patients who were no change, the expression of Survivin was up-regulated more significantly after radiotherapy than those with partial clinical release, and the difference was significant (P<0.05); apoptosis cells with negative Survivin expressed after radiotherapy were increased, and the difference was also significant (P<0.05).Conclusions Survivin gene may be new target to reverse radiotherapy resist.

　　[Key words] Cervical carcinoma; Survivin expression; Apoptosis; Radiotherapy; Resistance

　　Survivin是目前发现最强的凋亡抑制因子，有研究显示Survivin与宫颈癌的形成和发展有着密切的关系[1-3]，本研究通过检测放疗前后宫颈癌组织标本内Survivin的表达水平及凋亡，期望能够了解其与放疗疗效之间的相关性，为放疗增敏提供新的靶点。

　　1 材料和方法

　　1.1 一般资料：收集第四军医大学西京医院2006年12月-2009年1月接受放疗的38例宫颈癌患者做为研究对象，中位年龄50岁(29-65岁)，其中Ib期12例，Ⅱa期8例，Ⅱb期8例，Ⅲa-Ⅲb期10例;鳞癌30例，腺癌8例。

　　1.2 研究方法

　　1.2.1 检查方法：所有患者均经病理证实为宫颈鳞癌或腺癌，在接受放疗前接受临床触诊估测及B超检测，放疗结束后重新检测肿瘤情况。

　　1.2.2 放疗方案：所有患者接受40-50GY的放射剂量，4-5周完成放疗。

　　1.2.3 评价方法：肿瘤放疗后的疗效评估标准按照肿瘤临床诊疗指南标准[4] 。

　　1.2.4 检测方法

　　1.2.4.1 免疫组化法检测Survivin蛋白：所有标本均用10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)法测定，实验步骤严格按照试剂盒说明进行。用已知Survivin乳腺癌组织作阳性对照，阴性对照用PBS代替一抗，鼠抗人Survivin(批号：Pab20060715)购自迈新生物技术有限公司。

　　1.2.4.2 TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡：石蜡切片常规脱蜡至水，蒸馏水振洗, 实验步骤严格按照试剂盒说明进行。以存在明显凋亡细胞的组织作为阳性对照，用不含末端脱氧核苷酸转移酶的试剂2(脱氧核苷酸混合物)代替TUNEL反应混合物作为阴性对照。TUNEL检测试剂盒(批号：A2320070120)购自德国Roche公司。

　　1.2.5 结果判定[5] ：荧光显微镜下观察切片TUNEL染色的荧光显色反应确定凋亡细胞, 计算凋亡细胞所占百分数即为凋亡指数(AI)。免疫组化的结果根据阳性细胞的百分比和染色的强度进行判定，阳性细胞的比例分为5级，≤5%为0分，5%-25%为1分，25%-50%为2分，50%-75%为3分，≥75%为4分。染色强度分为4级，不着色为0分，着色淡为1分，着色中等为2分，着色深为3分。将两个得分相加，0为﹣，1-2分为﹢，3-4分为﹢﹢，5-6分为﹢﹢﹢;>2分为阳性，2-4分为弱阳性，>4分为强阳性，<2分为阴性进行定性判断。

　　1.3 统计学处理：应用SPSS 11.0软件进行统计分析，组间比较采用t检验、χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 放疗疗效：38例患者经过放疗后，临床完全缓解(CR) 9例，占23.7%;临床部分缓解(PR)22例，占57.9%;临床稳定(NC)7例，占18.4%。无1例发生疾病进展(PD)。

　　2.2 Survivin表达与放疗效果的关系:38例放疗前活检标本的Survivin结果与放疗效果的关系见表1， Survivin阴性缓解率高于Survivin阳性，两组比较有统计学意义(P<0.05)，见图1-2(封二)。表1 Survivin不同表达水平与放疗疗效的关系表2 放疗后Survivin表达变化与疗效的关系

　　2.3 Survivin放疗后表达的变化与放疗疗效的关系:见表2。放疗后Survivin表达上调组缓解率低于Survivin表达下调或不变组(P<0.05)。

　　2.4 TUNEL检测结果:Survivin表达阳性20例，AI为(3.82±0.75)%，Survivin表达阴性18例，AI为(22.73±1.37)%，两者比较有统计学意义(t=5.61,P<0.05);Survivin表达强阳性7例，AI为(3.73±0.57)%，Survivin表达弱阳性13例，AI为(9.98±0.62)%，两者比较有统计学意义(t=4.83,P<0.05)，见图3-6(封二)。

　　3 讨论

　　大量研究表明，多数恶性肿瘤，特别是放射抵抗的细胞株均可检测到Survivin的表达上调。Asanuma等[6]用RT-PCR对5种不同放射敏感性的胰腺癌细胞Survivin mRNA表达进行检测证实了Survivin基因与胰腺癌放射敏感性的关系，并发现对X线辐射抵抗最强的PANC-1细胞株中Survivin的mRNA水平最高，说明检测照射前的Survivin mRNA水平可以预测其放射敏感性[7]。

　　本研究发现宫颈癌放疗前Survivin的表达水平与放疗疗效存在相关性，而这种相关性主要体现在Survivin阴性和阳性组之间，即Survivin阴性组与阳性组前者的放疗效果好于后者(P<0.05)。获得临床稳定的患者经过放疗后，Survivin表达上调的患者比例高于下调和没有变化的患者，而获得临床部分缓解和临床完全缓解的患者，Survivin表达下调和不变的患者比例高于表达上调的患者,并且放疗后稳定组Survivin上调的比例要明显高于临床部分缓解和临床完全缓解的患者组(P<0.05)。本研究结果发现，经过放疗后，Survivin表达水平下降或没有变化的宫颈癌与Survivin表达水平上调的宫颈癌相比，放疗的疗效要更好。表达下调可能通过促进肿瘤细胞凋亡进而提高其对放射和化学治疗的敏感性[8-10]。因此，Survivin基因有望成为宫颈癌逆转放疗抵抗的新靶点。

　　【参考文献】

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