HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中的作用

　　【摘要】 目的 了解HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中的作用。方法 对同时行HPV-DNA分型检测、HPV L1检测以及宫颈细胞学筛查的520例志愿者的结果进行分析和总结。结果 在HPV-DNA低危亚型阳性患者中，HPV L1均为阳性;HPV-DNA高危亚型阳性者中有62.10%HPV L1为阴性;阴道镜及病理诊断结果发现，HPV-DNA高危亚型阳性且HPV L1检测结果阴性的患者宫颈活检病变处于CINⅠ者占57.35%，CINⅡ及以上者占26.47%。 结论 HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中有明确的指导价值，结合HPV-DNA分型检测意义更大;对高危阳性而HPV L1为阴性患者应警惕宫颈病变的发生。

　　【关键词】 人乳头状瘤病毒L1;分型检测;免疫应答; 宫颈癌

　　The effect of HPV L1 assays in the prognosis of cervical human papillomavirus infection

　　JIA Yong-cun, FAN Yang, NA Wen-xia. (Ningxia People's Hospital, Yinchuan 750021, China)

　　[Abstract] Objective To understand the effects of HPV L1 assays in the prognosis of cervical human papillomavirus infection.Methods The 520 patients was analyzed at the same time-line detection of HPV-DNA genotyping, HPV L1 detection and cervical cytology screening from July 2007 to October 2009 in the people's Hospital of Ningxia.Results In the low-risk subtypes of HPV-DNA positive patients, HPV L1 were positive; HPV-DNA positive in high-risk subtypes are 62. 10% HPV L1 negative. Colposcopy and pathological diagnosis was found, HPV-DNA positive and high-risk subtypes of HPV L1-negative test results in patients with lesions in the CINⅠaccounted for 57.35%, CINⅡ and above accounted for 26.47%.Conclusions HPV L1 detection are significant in the prognosis of cervical human papilloma virus infection, and it should be combined with detection of HPV-DNA typing required for high-risk patients with vaginoscope examination.

　　[Key words] Human papillomavirus L1; Genotyping; Immunity response; Cervical cancer

　　宫颈癌是女性最常见的癌症之一，病毒学家证实了HPV为宫颈癌的主要致癌因素，其中人乳头瘤病毒(HPV)L1壳蛋白为免疫杀伤HPV病毒的主要靶位。为了了解HPV L1检测在宫颈人乳头状瘤病毒感染预后判定中的作用，我们对同时行HPV-DNA分型检测、HPV L1检测以及宫颈细胞学筛查的520例患者的临床资料进行分析总结。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料:病例资料来源于2007年7月-2009年10月在宁夏自治区人民医院同时行HPV-DNA分型检测、HPV L1检测以及宫颈细胞学筛查的520例患者，年龄19-64岁，平均(36.92±9.37)岁。

　　1.2 试剂与仪器：美国Advanced Medical Science公司的CytoReact细胞/组织人乳头瘤病毒(HPV L1)染色试剂盒、QIAGEN公司的QIAMini DNA提取盒、美国MBI公司的PE9600 PCR扩增仪及HPVHybriMax医用核酸分子快速杂交仪(香港凯普公司)。

　　1.3 方法：HPV-DNA分型检测采用HybriMax 技术检测21种HPV亚型。实验步骤：样本HPV-DNA提取，PCR扩增，核酸分子快速导流杂交，结果判读，按芯片上HPV亚型分布的相应着色位点判断。21种HPV分为高危型和低危型两类，高危型(high-risk types, HR-HPV)15种，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，低危型(low-risk types, LR-HPV)6种，包括HPV6、11、42、43、44和CP8304。HPV L1检测具体操作步骤严格按照说明书进行。在宫颈细胞涂片或组织切片上仅有一个被红染的细胞核即可诊断为HPV L1 呈阳性。

　　1.4 统计学方法：使用SPSS10.0软件，组间率的比较采用χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 HPV-DNA分型检测结果：520例患者的HPV-DNA分型检测结果为HPV-DNA阴性者162例(31.15%)，低危亚型阳性者139例(26.73%)，高危亚型阳性者219例(42.12%)。

　　2.2 HPV L1检测结果：对520例患者的宫颈细胞涂片进行HPV L1检测，结果为HPV L1阴性者298例(57.31%)，HPV L1阳性者222例(42.69%)。其中HPV-DNA阴性者其HPV L1均为阴性;HPV-DNA低危阳性者其HPV L1均为阳性;HPV-DNA高危阳性者中有136例(136/219，62.10%)HPV L1为阴性，83例(83/219，37.90%)HPV L1为阳性。

　　2.3 HPV-DNA分型、HPV L1检测结果与阴道镜及病理诊断结果比较：对520例患者行阴道镜检查，并对其中292例(56.15%)阴道镜检查有异常发现者行病理检查(行宫颈多点活检或做宫颈管的诊断性搔刮术)。病理检查结果：炎症167例(32.12%);CINⅠ88例(16.92%),CINⅡ22例(4.23%),CINⅢ12例(2.31%);宫颈浸润癌3例(0.58%)。HPV-DNA分型与HPV L1检测均阴性者大多数为正常人群，其中4.32%为炎症，尚未发现CINⅠ及以上患者。在HPV-DNA分型检测低危阳性、HPV L1亦阳性的患者中53.74%为炎症，4.32%为CINⅠ，尚未发现CINⅡ及以上患者。在HPV-DNA分型检测高危阳性，HPV L1亦阳性的患者中86.75%为炎症，4.82%为CINⅠ，可发现1.21%CINⅡ患者，尚未发现CINⅢ及以上患者。在HPV-DNA分型检测高危阳性而HPV L1为阴性的患者中可发现57.35%为CINⅠ，15.44%为CINⅡ，11.03%为CINⅢ及以上者。HPV-DNA分型检测阴性、低危阳性且HPV L1检测阳性、高危阳性且HPV L1检测阴性与阴道镜及病理诊断结果间比较差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。表1 HPV-DNA分型检测、HPV L1检测结果与阴道镜及病理诊断结果比较* 注：*与其它三组比较，P<0.05(χ2值分别为5.94、4.31、5.19、4.83、4.71、4.37、6.14)。

　　3 讨论

　　2006年美国阴道镜及宫颈病理协会(ASCCP)颁布的宫颈病变循证医学共识指南中强调了HPV高危亚型，尤其16、18亚型感染在宫颈癌发生发展中的重要性[1-2]。Clifford 等[3]对已发表的涉及欧洲、北美、美国、亚洲、非洲的有关HSIL患者的HPV感染资料进行再分析后发现HPV16，18和45感染的高度鳞状上皮内病变(HSIL)患者更易进展为宫颈癌。在本研究也发现HPV-DNA高危亚型阳性者中CINⅡ及以上者明显高于HPV-DNA阴性及低危阳性者，如这些患者的HPV感染不能得到有效的阻断和长期的随访，则加大了进展为宫颈浸润癌的风险。

　　HPV感染宿主细胞以后，不仅利用其复制机制复制自身的DNA、转录机制转录自身的 RNA，还利用其翻译机制合成自身的蛋白，以确保自身在宿主细胞中能够持续存活[4-5]。人体能否抵御HPV局部感染主要取决于人体是否能在局部感染部位形成快速、强大的细胞免疫反应。与HPV疫苗的原理相同，细胞免疫杀伤HPV病毒的攻击位点为HPV病毒的主要壳蛋白(HPVL1)[6-7]。HPV L1壳蛋白是HPV病毒的主要结构蛋白，L1壳蛋白单体会与T细胞(CD4/CD8)及MHC I/II(主要组织相容性复合体)形成免疫复合物，仅一个单一的免疫复合物即会激活免疫连锁反应并在局部形成高浓度的免疫抗体[8]。HPV L1在机体中的表达往往说明机体受到HPV感染且病毒处于复制阶段，正常情况下，L1的表达有利于激发人体细胞免疫，清除感染的细胞。但是当HPV病毒DNA整合到宿主基因后，HPV L1壳蛋白表达缺失，机体无法识别清除病变细胞，引发宫颈病变或病变的进展[9-10]。因此，HPV L1壳蛋白的存在意味着非进展性的病变，而其缺失则是HPV相关恶性转化的分子基础。本研究中我们也发现HPV L1检测结果阳性者，病变大都处于炎症及CINⅠ阶段，而HPV-DNA高危亚型阳性而HPV L1检测结果阴性的患者病变处于CINⅠ者占57.35%，CINⅡ及以上者占26.47%。当然，HPV-DNA分型检测阴性且HPV L1为阴性者为正常人群。

　　总之，用常规细胞学涂片进行免疫化学检测HPV L1壳蛋白可以作为HPV感染阳性病人的风险评估和预后判定的特异性临床生物标志物。建议对于HPV-DNA分型检测高危阳性的患者需同时进行HPV L1的检测，其中对于HPV L1检测结果阴性的患者需行阴道镜检查。

　　【参考文献】

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　　[2] Future ⅡStudy Group. Quadrivalent vaccine against human papillomavirus to prevent high grade cervical lesions[J]. N Engl J Med, 2007,356:1915-1927.

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　　[10] 范江涛，陈心秋，张 卉. 表达HPV16L1、L2和E7蛋白的非复制重组痘苗病毒诱发的抗肿瘤免疫反应[J]. 中国免疫学杂志，2009, 25:317-320.