蓬子菜多糖分离纯化及其性质的研究

　　【摘要】 目的：从蓬子菜中提取分离水溶性多糖，并分析其理化性质，为板蓝根质量控制与进一步开发利用提供参考。方法：主要采用Sephadex G-100 凝胶色谱柱分离纯化,测定各部位中性糖和酸性糖的含量。结果：从蓬子菜水溶性多糖中分离纯化得到2 种不同的均一多糖组分TP-1、 TP-2,总糖含量均达到90%以上。结论：2种均一多糖首次从蓬子菜中分离得到。

　　【关键词】 蓬子菜;多糖;分离纯化;性质

　　Isolation and Purification of Polysaccharides from Galium verum L.

　　and Their Properties

　　Nan Minlun,et al

　　1. Jilin tianyao Technology Co., Ltd(Changchun 130012, China)

　　Abstract：Objective：To study the physicochem ical properties of extracted hydrophilic polysaccharides in Galium verum L.and give some suggestions for the quality control and further development of Galium verum L.Methods：Polysacchar ides in Galium verum L. were fractionated by Sephadex G 100 was isolation and purification,ware established to calculate the contentsof neutral sugar and uronic acid.Results：Two different homogeneous hydrophilic constituents, TP-1and TP-2, were extracted and isolated from Galium verum L. All of them were 85%.Conclusion：It is the first time to get the TWO homogeneous polysacchar ides from Galium verum L.

　　Key words：Galium verum L.;polysaccharides;isolation and purification;property

　　蓬子菜Galium verum L.为茜草科拉拉藤属药用植物蓬子菜的干燥全草。主要分布于中国(东北、河北、内蒙古、宁夏等地)、朝鲜、日本、蒙古、高加索等地，多生于山坡、丘陵坡地及路旁砂质草地，为其临床应用提供了来源保证。但由于其国内外研究相对较少，目前还未进入中华人民共和国药典，只是列入了黑龙江省药品标准，迄今为止多用于民间验方。主要化学成分为黄酮类、蒽醌类、环烯醚萜类、有机酸等。还没有人对其多糖类成分进行研究。绝大多数植物多糖不仅对正常细胞无毒副作用 , 而且能够提高机体的免疫功能,具有抗病毒、 抗辐射、 抗癌、 降血糖、 减肥和清除氧化自由基的作用[1-3]。因此 , 多糖的研究引起人们的高度重视。我们对其多糖的提取、分离纯化方法进行研究。为研究多糖的生物活性奠定了理论依据。

　　1 实验材料与仪器

　　1.1 实验材料

　　葡萄糖标准品、半乳糖糖醛酸标准品、Sephadex G-100均为Sigma公司产品，纯度为99%。其余试剂均为国产分析纯。

　　1.2 仪器

　　TL-5.0台式离心机(上海市离心机械研究所)，752型紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，Mettler-Toledo天平AB204-N(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，德国Christ Alphal-2型冷冻干燥机，透析袋(孔径为12000)，BSZ-100A自动部分收集器，HL-1恒流泵(上海精科实业有限公司产品)。

　　2 实验方法与结果

　　2.1 蓬子菜总多糖TP的提取分离蓬子菜药材，用90%乙醇提取一次，过滤，滤渣用水煎煮3次，每次2小时，过滤，滤液浓缩，加乙醇至醇浓度为80%，搅拌，静止过夜，离心，沉淀用水溶解，离心，取上清液冻干，得总多糖TP。

　　2.2 Sephadex G-100离子交换柱分离纯化

　　2.2.1 色谱条件以Sephadex G-100作柱填充料装柱。柱子规格为Ф2.6 cm×130 cm，流速为0.3 mL/min，10 mL/管，流动相分别为蒸馏水、0.2 mol/L NaCl溶液。

　　2.2.2 操作过程将0.3 g TP 溶于10 mL蒸馏水中，上Sephadex G-100柱，按上述色谱条件用0.2 mol/L NaCl溶液洗脱，洗脱液用部分收集器收集。每管取洗脱液在A490nm处对糖进行监测。以管数为横坐标，吸收值为纵坐标绘制洗脱图(见图1)。将0.2 mol/L NaCl洗脱液的浓缩液装入透析袋中对蒸馏水透析三天除盐，取透析内液浓缩、冻干得TP-1、TP-2[4、5]。

　　2.3 总糖含量测定[6]

　　2.3.1 葡萄糖标准曲线绘制

　　精密称取葡萄糖5.84mg，用蒸馏水溶解至50mL容量瓶中，定容至刻度，得标准品葡萄糖溶液。标准品溶液分别取0、0.1、0.2、0.3、0.4ml加入五个试管中，加水至0.4mL，加入0.5%的苯酚溶液0.5mL，浓硫酸2.5mL。按照文献[2]的方法以标准溶液第一管为对照，在490 nm处测吸收值。以吸收值为纵坐标，葡萄糖含量的μg数为横坐标绘制标准曲线(见图2)，可得回归方程为Y=0.0207X-0.032，相关系数r =0.996，葡萄糖在11.680～46.720μg之间线性良好。

　　2.3.2 半乳糖醛酸标准曲线绘制

　　精密称取半乳糖糖醛酸标准品5.22mg，用蒸馏水溶解至25 mL容量瓶中，定容至刻度，得标准品半乳糖糖醛酸溶液。分别取标准品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL加入到五个试管中，加水至0.4 mL，加入0.26%四硼酸钠硫酸溶液3 mL，沸水浴加热5 min后，取出，至冰水中放置5 min，加0.15%咔唑试液50μL显色1-2 min，以标准溶液的第一管为对照在520 nm处测得吸收值。以吸收值为纵坐标，半乳糖糖醛酸含量的μg数为横坐标，绘制标准曲线(见图3)。可得回归方程为Y=0.001695X-0.0072，相关系数r =0.976，半乳糖醛酸在20.880～83.520μg之间线性良好。

　　2.3.3 供试品中总糖含量测定

　　称取TP多糖 25.35mg、TP-1多糖25.16mg、TP-2多糖25.17mg，分别至100 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解，并定容至刻度，得供试品溶液。分别取供试品溶液各0.1mL加入三个试管，按照葡萄糖标准溶液的制备方法，测定吸收值，计算得样品的中性糖含量;分别取供试品溶液各0.4 mL放入到三个试管中，按照半乳糖醛酸标准溶液的制备方法，测定吸收值，计算得样品的酸性糖含量。实验结果见表1。表1 样品中糖含量测定结果

　　3 讨论

　　综上所述，采用乙醇提取后，再用水煎煮的、醇沉的方法提取得多糖TP，其中性糖和糖醛酸含量分别为：38.8%和50.4%。由结果看出，TP中糖醛酸含量较高，可认为TP主要由酸性糖、中性糖组成。TP-1、TP-2中糖含量明显升高，其中酸性糖含量大于中性糖含量。本实验未对糖组成进行研究，为了明确糖的具体组成，我们将在以后的研究中对糖的组成和结构进行研究。蓬子菜多糖的生物活性正在研究中。用硫酸- 苯酚法测定中性糖的含量, 在整个测定过程中应使用同一空白对照, 同时必须注意玻璃仪器的洁净度及间隔时间的长短, 应尽量做到每一样品均在同样的条件下测定, 否则将引起误差。尤其应注意的是硫酸的添加方式, 应将硫酸直接加入样品中, 而不应沿壁加入, 否则将会造成严重的误差。图1 TP经Sephadex G-100的洗脱图图2 葡萄糖标准曲线图图3 半乳糖醛酸标准曲线图

　　【参考文献】

　　[1] 周永国，杨越冬等.天然活性多糖在生物医药领域中的研究进展[J].高分子通报，2006,9:16-22.

　　[2] 邓小云，丁登峰等.植物多糖药理作用研究进展[J].中医药导报，2006，12(9)：86-88.

　　[3] 肖锡湘，上官新晨.多糖的应用研究[J].中国食物与营养，2006，5：21-22.

　　[4] 孙元琳，申瑞玲，蔡宝玉等.当归多糖的分级制备及组成分析[J].河南工业大学学报(自然科学版)，2005，37(2)：93-96.

　　[5] 王远红,吕志华,姜廷福,等.梅花参中多糖提取工艺及含量测定的研究[J].中国海洋大学学报,2005,35(6):987～990.

　　[6] 姜瑞芝,陈英红,杨勇杰,等.银耳多糖中糖醛酸含量的测定[J].中草药,2004,35(9):991～993.