HPLC法测定注射用左卡尼汀的含量

　　【摘要】 目的：建立HPLC法测定注射用左卡尼汀的含量。方法：色谱柱为C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为磷酸盐缓冲液(取磷酸11.5ml，加1mol/L氢氧化钠溶液100ml，加水稀释至2000ml，用饱和氢氧化钠溶液调节pH值至2.4)-甲醇-庚烷磺酸钠(980ml：20ml：0.555g)，检测波长为225nm，流速为1.0ml/min，理论板数应不低于1200。结果：左卡尼汀在0.28mg/ml～2.26mg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999);平均回收率为99.9%。RSD为0.92%。结论：此方法快捷、准确，可作为注射用左卡尼汀质量控制的方法。

　　【关键词】 左卡尼汀;HPLC;含量

　　Determination of the Content of Levocarnitine for Injection by HPLC

　　Fu Biao，et al

　　Daqing People's Hospital(Daqing 163316)

　　Abstract：Objective：To establish a HPLC method for determination of Levocarnitine for Injection.Methods：The analytical column was C18 column(150mm × 4.6mm，5μm);mobile phase：consisted of phosphate buffer solution(Taking phosphate 11.5ml，plus 1mol / L sodium hydroxide solution 100ml，diluted with water to 2000ml，with saturated sodium hydroxide solution to adjust pH value of 2.4)- Methanol - n-heptane sulfonate(980 ml：20 ml：0.555g).The detection wavelength was 225nm，The flow rate was 1.0ml/min.Number of theoretical plates should not be less than 1200.Results：0.28mg/ml ～ 2.26mg/ml Levocarnitine in the concentration range of a good linear relationship with the peak area(r=0.9999).The average recovery was 99.8%.RSD was 0.92%.Conclusion：：This method is fast，accurate and can be used as quality control of Levocarnitine for Injection method.

　　Key words：Levocarnitine;HPLC;Content

　　左卡尼汀(L-eamitine，k)，又称左旋肉碱，1905年由俄国科学家从肌肉提取物中发现的一种具有左旋性生物活性的物质，它是哺乳动物能量代谢中必需的体内物质，是体内广泛存在于机体内的特殊氨基酸，是人体长链脂肪酸代谢产生能量所必需的一种物质。其主要功能是促进脂类代谢。它既能将长链脂肪酸带进线粒体基质，并促进其氧化分解，为细胞提供能量，又能将线粒体内产生的短链脂酰基输出。本品的补充可缓解其因体内缺乏引起的脂肪代谢紊乱、骨骼肌和心肌等组织的功能障碍。

　　左卡尼汀的原料与注射液均采用滴定法测定含量，但其精密度、重复性较差。本实验建立了高效液相色谱(HPLC)法测定注射用左卡尼汀的含量。并进行了方法学考察，现报道如下。

　　1 材料

　　LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津公司);SPD-10A VP紫外检测器;N2000色谱工作站;注射用左卡尼汀(吉林敖东药业集团延吉股份有限公司提供，批号20060601、20060602、20060603);左卡尼汀对照品(吉林省药品检定所，含量99.8，批号20040362);甲醇为色谱纯;其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件 色谱柱：C18柱(150mmX4.6mm，5μm);流动相：磷酸盐缓冲液(取磷酸11.5ml，加1mol/L氢氧化钠溶液100ml，加水稀释至2000ml，用饱和氢氧化钠溶液调节pH值至2.4)-甲醇-庚烷磺酸钠(980ml：20 ml：0.555g);检测波长为225nm;流速为1.0ml/min;进样量：20μl。

　　2.2 对照品溶液的制备 精密称取左卡尼汀对照品，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含左卡尼汀1mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.3 供试品溶液的制备 取本品，精密称取适量(约相当于左卡尼汀50mg)置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

　　2.4 干扰性试验 取处方量辅料，按上述供试品溶液制备方法及色谱条件进行测定，结果辅料在左卡尼汀保留时间处无色谱峰出现，表明本品辅料对测定无干扰，见图1。图1 HPLC色谱图A.空白对照;B 对照品;C.供试品

　　2.5 线性关系考察 精密称取左卡尼汀对照品113.1mg，置20mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml，分别置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，分别吸取各浓度溶液20uL注入液相色谱仪中，记录色谱图。以进样浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积为纵坐标，将峰面积(A)对应左卡尼汀浓度(C)进行回归，得方程：A=797467C+4558.4，r=0.9999。结果表明：左卡尼汀在0.28mg/ml～2.26mg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。

　　2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液20μL，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积结果RSD为0.95%，说明精密度良好。

　　2.7 重复性试验 精密称取同一样品共6份，分别置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按上述色谱条件测定含量。结果RSD为0.85%，表明本法重复性良好。

　　2.8 溶液稳定性试验 取供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8小时进样，测定含量。结果：样品中左卡尼汀含量的RSD为0.67%，表明样品在8h内稳定性良好。

　　2.9 回收率试验 精密称取左卡尼汀对照品40mg、50mg、60mg各3份，按处方比例分别加入其它辅料，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定含量。结果RSD为0.92%，表明本法准确度良好。表1 回收率测定结果

　　3 样品测定

　　取3批样品，按上述供试品溶液制备方法及色谱条件进行测定，以外标法计算含量，结果见下表：表1 回收率测定结果

　　4 讨论

　　本品为左卡尼汀注射液改剂型产品，参照左卡尼汀原料及注射液标准建立HPLC法测定本品的含量，取样品及空白辅料在200～400nm波长之间进行扫描，辅料在225nm处无吸收，表明辅料不干扰左卡尼汀冻干粉针的测定。由方法学考察结果可知，本方法具有准确、方便、灵敏度高等优点，提高了注射用左卡尼汀的质量控制方法，有利于本品在生产中的质量控制，提高产品的质量稳定性。

　　【参考文献】

　　[1] 国家药品监督管理局.左卡尼汀标准[S].新药转正标准64册.

　　[2] 国家药品监督管理局.左卡尼汀注射液标准[S].新药转正标准61册.