软肝抗癌止痛颗粒中延胡索乙素含量测定方法研究

　　【摘要】 目的：制定软肝抗癌止痛颗粒中延胡索乙素含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Agilent C18(150×4.6nm;5μm)，流动相为甲醇-水-磷酸(70：30：1.2);检测波长280nm。结果：加样回收率为96.75%;RSD为1.59%;相关系数r=0.9999;五批软肝抗癌止痛颗粒中延胡索乙素范围为0.0995～0.109mg·g-1。结论：该方法准确、可靠、重复性好，可作为软肝抗癌止痛颗粒质量控制方法。

　　【关键词】 HPLC：延胡索乙素：含量测定

　　Determination of the Content of Tetrahydropalmatine

　　in Ruangankangaizhitong Granules by HPLC

　　Li Changling，et al

　　Heihe Institute for Drug Control Heilongjiang(Heihe 164300 China)

　　Abstract：Objective：To establish a HPLC method to determine the content of Tetrahydropalmatine in Ruangankangaizhitong Granules.Methods：Select Agilent C18(150×4.6nm;5μm);The mobile phase was consisted of methanol-water-phosphoric acid(70：30：1.2);The detection wavelength was at 280nm;Results：The average recovery was 96.75%;RSD=1.59%;r=0.9999;The content of Tetrahydropalmatine ranged from 0.0995 to 0.109mg·g-1.Conclusion：This method is accurate，reliable and with good reproducibility，It can be used for the quality control of Ruangankangaizhitong Granules.

　　Key words：HPLC;Tetrahydropalmatine;Content determination

　　软肝抗癌止痛颗粒为我市中医院的自制制剂，由藤梨根、延胡索(醋制)、水蛭、土鳖虫、鼠妇、蜣螂、制南星、蟾酥、重楼制成，具有凉血解毒、舒肝破血、散结止痛的功效。临床用于中晚期肝癌，癌痛，肝区痞块的治疗。处方中延胡索为臣药，具有活血散瘀、理气止痛功效[1]。为确保产品质量，对软肝抗癌止痛颗粒中延胡索中有效成分延胡索乙素用HPLC法进行含量测定。

　　1 仪器与试药

　　日本岛津2010A高效液相色谱仪甲醇为色谱纯，延胡索乙素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号：110726-200711)五批软肝抗癌止痛颗粒分别由我市中医院提供批号为：090326、090416、090429、090522、 090629。软肝抗癌止痛颗粒延胡索阴性由我市中医院提供(除延胡索不加，处方其他药按工艺生产)。

　　2 方法与结果

　　2.0 波长选择：取延胡索乙素对照品溶液，在紫外区200nm～400nm进行扫描，确定最大吸收波长为279.7nm。

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱为：Agilent(150×4.6nm);流动相为甲醇-水-磷酸(70：30：1.2);流速0.8ml·min-1;柱温25℃;检测波长280nm。延胡索乙素对照品溶液色谱图 供试品溶液色谱图 延胡索阴性溶液色谱图

　　2.2 供试品溶液制备：分别取五批软肝抗癌止痛颗粒研细，混匀，取10g，精密称定，加入甲醇30ml，超声3次，每次20min，滤过，合并滤液蒸干，残渣加25ml水充分溶解后，加浓氨调pH至10，用乙醚萃取4次，每次25ml，分取乙醚液，合并，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解定容至10ml，作为供试品溶液。

　　2.3 延胡索乙素对照品溶液制备：精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含90μg的溶液，即得[2]。

　　2.4 延胡索阴性溶液制备：同供试品溶液制备法。

　　2.5 线性关系考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液1μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl在上述色谱条件下重复进样2次，测定峰面积值，以峰面积平均值和浓度进行回归处理，得回归方程为：Y=586376X+4697.2，r=0.9999。线性范围在0.09μg～2.25μg呈良好的线性关系。

　　2.6 精密度试验精密吸取延胡索乙素对照品溶液10μl，重复进样5次，测定结果RSD为1.29%。

　　2.7 稳定性试验取批号为090326供试品溶液，每隔4个小时进样10μl，测定延胡索乙素峰面积值，共测定6次，测定结果RSD为1.77%。

　　2.8 重复性试验取批号为090326供试品溶液进行6次平行试验，测定延胡索乙素的含量，每次进样量10μl，测定结果RSD为1.18%。

　　2.9 准确度试验采用加样回收法，精密量取6ml延胡索乙素对照品溶液加入锥形瓶中，蒸干，精密称取进行重复性试验的软肝抗癌止痛颗粒批号为090326粉末5g加入锥形瓶中，按延胡索乙素含量测定方法进行测定，计算加样回收率。结果见表1。表1 加样回收测定结果

　　2.10 样品含量测定取各供试品溶液，按上述色谱分离条件，进样10μl，测定延胡索乙素峰面积，计算含量，结果见表2。表2 样品测定结果

　　3 小结与讨论

　　软肝抗癌止痛颗粒中延胡索为臣药，具有活血散瘀、理气止痛功效，醋制后可增强止痛功效，主要是活性成分为延胡索乙素溶出率增高[3]，而对方中醋制延胡索中延胡索乙素进行了含量测定，可以更好的控制软肝抗癌止痛颗粒的质量。

　　本实验采用高效液相色谱法测定有效成分延胡索乙素的含量，本法能达到有效分离各组分的目的，具有灵敏度高、操作简单、分离效果好、阴性无干扰等优点，试验证明五个批号软肝抗癌止痛颗粒中延胡索乙素含量均值为0.104mg·g-1，所以按平均值的80%规定软肝抗癌止痛颗粒中延胡索乙素含量应不低于0.083mg·g-1。

　　【参考文献】

　　[1] 肖培根主编.新编中药志[M].第一卷：444-445.

　　[2] 陈旭，陆兔林，等.HPLC测定延胡索不同炮制品中延胡索乙素含量[J].中成药，2003，25(09)：726-727.

　　[3] 叶定江主编.中药炮制学[M].第十章：163：164.