RP-HPLC测定蓝芩口服液中黄芩苷的含量

　　【摘要】 目的 建立蓝芩口服液中黄芩苷含量测定的RP-HPLC法。方法 色谱柱EclipseXDB-C18柱(150mm×4.6mm,5μm)流动相：流动相为甲醇-水-磷酸(45：55：0.2)，流速1.0ml/min，检测波长278nm。结果 黄芩苷在8.13～81.30μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9999。平均回收率为99.98%，RSD为0.54%(n=6)。结论 本方法简便、准确，其他组分不干扰测定,可用于蓝芩口服液中黄芩苷的定量分析。

　　【关键词】 RP-HPLC;蓝芩口服液;黄芩苷

　　Determination of Baicalin in Lanqin oral solution by RP-HPLC

　　HONG Li-ping，ZHANG Jin，LI Jing-mei，et al. Yangtze River Pharmacitical Group, Taizhou 225321,China

　　【Abstract】 Objective To establish a new method for determination of Baicalin in Lanqin oral solution by RP-HPLC. Methods Separation was carried out on an Eclipse XDB-C18 column using methanol-water-H3PO4(45：55：0.2) at detection wavelength 278 nm, and the flow was 1.0ml/min.Results The linear range of Baicalin concentration was from 8.13～81.30μg/ml and correlation coefficient was 0.9999,the average recovery of sample was 99.98% and RSD was 0.54%(n=6).Conclusion This method is convenient, accurate without interference and is suitable for quantitative determination of baicalin in Lanqin oral solution.

　　【Key words】 RP-HPLC;Lanqin oral solution; Baicalin

　　蓝芩口服液主要由栀子、黄芩、黄柏、板蓝根、胖大海等多味中药和适当的辅料制成的复方制剂，具有清热解毒，利咽消肿的功效。临床主要用于急性咽炎、肺胃实热所致的咽痛、咽干、咽部灼热等症，其应用前景十分广阔。其主药黄芩的有效成分黄芩苷含量测定的方法主要有高效液相色谱法。本文参照原质量标准[1]和药典方法[2]对RP-HPLC法测定本品中黄芩苷含量的方法进行了验证，结果表明RP-HPLC法简便，准确，其他组分不干扰测定，可以用于本品的质量控制。

　　1 仪器与试药

　　瑞士Mettler Toledo XS205 电子天平， 昆山市超声仪器有限公司KQ-500B型超声波清洗器，美国安捷伦公司高效液相色谱仪Agilent1100 Series(配置四元泵，自动进样器，DAD检测器，柱温箱，在线真空脱气泵，色谱工作站等)等。

　　黄芩苷对照品(批号为：110715-200815，含量为95.2%)购于中国药品生物制品检定所，蓝芩口服液(批号分别为：09120401，09121501，09122501)为扬子江药业集团有限公司生产，配制流动相用甲醇和乙腈均为色谱纯，水为超纯水，其余化试均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件和系统适应性试验 色谱柱：Agilent XDB C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相：甲醇-水-磷酸(45:55:0.2);检测波长278nm;柱温30℃;流速1.0ml/min。

　　在此色谱条件下，黄芩苷色谱峰与样品中的其他组分色谱峰达到了基线分离，理论板数以黄芩苷峰计大于4000;阴性对照溶液色谱图中黄芩苷相应位置上无色谱峰出现，可见其他成分对此检测方法无干扰，此色谱条件可行。见图1。A 对照品溶液;B 样品溶液;C 阴性对照溶液;1.黄芩苷(对照品峰名)。图1 高效液相色谱图

　　2.2 对照品溶液的配制 精密称取黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含0.1632mg的对照品贮备液。

　　2.3 线性关系试验 分别精密吸取上述对照品贮备液1、2、4、6、8、10ml置20ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件分别进样5μl，以黄芩苷浓度为横坐标，其峰面积积分值为纵坐标，得回归方程为： Y= 13.157X-6.1378，相关系数r=0.9999。结果表明黄芩苷在8.130～81.300μg/ml范围内，对照品浓度和其峰面积积分值具有良好的线性关系。

　　2.4 精密度试验 精密量取浓度为0.03264mg/ml的黄芩苷对照品溶液5μl，按样品测定项下方法操作，重复进样6次，结果黄芩苷峰面积均值为859.012， RSD为0.28%，表明精密度良好。

　　2.5 稳定性试验 精密吸取新制备的供试品溶液5μl,按样品测定项下方法在25℃下每隔1h测定1次，共测定12次，记录峰面积，黄芩苷峰面积均值为635.6601，RSD为0.47%，表明供试品溶液在12h内稳定。

　　2.6 重复性试验 取批号为09120401的样品，按照“2.8”项下方法制备8份供试液，结果黄芩苷含量均值为0.596mg/ml，RSD为0.84%。

　　2.7 加样回收率试验 取已知黄芩苷含量的样品(09122501)适量，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(0.12776mg/ml)5ml，按照“2.8”项下方法制备6份供试液，分别进样5μl，按上述色谱条件测定，计算得平均回收率为99.98%，RSD为0.54%，结果见表1。表1 加样回收率试验结果

　　2.8 样品含量测定 取本品5ml，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理(功率500W，频率40kHz)30min，放冷，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中黄芩苷含量。

　　2.9 阴性对照品溶液的制备 阴性对照品溶液即缺黄芩空白溶液，其制备按处方比例准确称取除黄芩以外的其他各味药材，模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制成缺黄芩空白溶液。

　　3 讨论

　　3.1 色谱条件的选择 分别选取不同配比的甲醇-水-磷酸为流动相，不同厂家不同规格的色谱柱进行分析，结果选择甲醇-水-磷酸(45：55：0.2)为流动相，Agilent XDB C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱，在柱温30℃，1.0ml/min流速，278nm波长条件下检测时，黄芩苷与样品中的其他组分分离度良好，阴性对照无干扰。

　　3.2 提取方法的选择 分别选取甲醇、75%甲醇、50%甲醇分别超声处理(功率500W，频率40kHz)20、30、40min进行试验，含量测定结果差异无显著性(P>0.05)。因此，供试品溶液制备时选择低浓度的50%甲醇超声处理(功率500W，频率40kHz)30min。

　　【参考文献】

　　1 中华人民共和国卫生部药品标准.WS3-214(Z-033)-2002(Z).

　　2 国家药典委员会、中国药典(一部).北京：化学工业出版社，2005：211-212.