醛固酮合酶基因-344C/T多态性与心房颤动关系的研究

　　【摘要】 目的：探讨慢性心力衰竭(CHF)患者醛固酮合酶(CYP11B2)基因-344C/T多态性与心房颤动的关系。方法：136例CHF患者被分为心房颤动组(59例)和窦性心律组(77例)。应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RELP)分析技术对136例慢性心力衰竭的CYP11B2基因-344C/T多态性进行分析。结果：与窦性心律的心衰患者比较，CT+CC基因型更多见于合并房颤的心衰患者[(31+7)%∶(51±8)%,x2=6.29，P=0.012]。结论：慢性心力衰竭人群CYP11B2基因-344C/T多态性与心房颤动有关。

　　【关键词】 心房颤动;心力衰竭,充血性;醛固酮合酶;基因

　　Association between aldosterone synthase gene polymorphism and atrial fibrillation in patients with chronic heart failure/HU Xiaojun，PENG Hui, CHEN Juan, YU Hao, YAN Kaili,LI Feng,CHEN Su,TU Yuanchao//Department of Cardiology, Xinhua Hospital of Hubei Province, Wuhan,Hubei,430015,China

　　Abstract：Objective: To investigate the possible association between aldosterone synthase (CYP11B2)-344C/T polymorphism and atrial fibrillation in patients with chronic heat failure from a population of Chinese Han nationality. Methods: The restrict fragment length polymormisms (RFLP) at-344 site of CYP11B2 gene were studied using polymerase chain reaction (PCR) technique in 136 subjects with chronic heart failure. Results: The frequency of TC+CC genotypes were significantly higher in chronic heart failure patients who existed atrial fibrillation compared with those of sinus rhythm group [(51+8)% vs.(31+7)%,x2=6.29，P=0.012].Conclusion: It is considered that there is a significant association between aldosterone synthase gene-344C/T polymorphism and atrial fibrillation in Chinese patients with chronic heart failure.

　　Key words：Atrial fibrillation; Heart failure, congestive; Aldosterone synthase; Gene

　　肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)在慢性心力衰竭(CHF)的发生、发展过程中发挥重要作用。RAAS的激活是心房颤动形成的一个重要因素[1，2]。已有血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂应用于心房颤动(AF)患者的研究报道[3]。醛固酮合酶(CYP11B2)是醛固酮生物合成最后一步生化反应的催化酶，醛固酮分泌的调节主要发生在醛固酮生物合成的最后一步[4]。醛固酮合酶基因定位于第8号染色体(8q22)，全长约7kb，含8个内含子和9个外显子。CYP11B2基因启动子区-344位点可发生胞嘧啶和胸腺嘧啶的互换，即C344T。本研究旨在探讨CHF患者CYP11B2基因-344C/T多态性与AF之间的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　选自2006年8月～2009年12月的住院CHF患者，共136例，男83例，女53例，年龄34～85，平均(62.7±6.7)岁。 纳入标准：CHF的诊断标准参照“中国慢性心力衰竭诊断和治疗指南(2007)”建议: (1) 左心室增大、左心室收缩末期容量增加及左室射血分数(LVEF) ≤40%;(2) 有基础心脏病的病史、症状及体征;(3) 有或无呼吸困难、乏力和水肿等症状。排除：(1)严重肝、肾功能不全;(2)各种感染;(3)内分泌疾病。CHF的病因：缺血性心脏病79例，非缺血性心脏病(包括扩张型心肌病、瓣膜性心脏病)57例。经过充分抗心衰治疗后，患者的心功能分级如下：Ⅱ级94例，Ⅲ级37例，Ⅳ级5例。所有患者均服用了血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)或醛固酮拮抗剂以及利尿剂。根据患者基础心脏节律是心房颤动抑或窦性心律，分为房颤组(59例)和窦律组(77例)。

　　1.2 试验方法

　　1.2.1 DNA血标本的收集： 清晨采集空腹静脉血10ml，其中5 ml加入2%乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，以备提取基因组DNA。

　　1.2.2 生化指标的检测：所有入选者均抽取清晨卧位空腹静脉血，测定血清总胆固醇、甘油三酯、血糖以及血清钾、钠浓度。以上测定均在Olympus AU-1000型全自动生化分析仪上操作。

　　1.2.3 基因组DNA的提取：采用商用提取人外周血白细胞DNA试剂盒。

　　1.2.4 聚合酶链式反应(PCR)扩增及其产物的检测：参照Kupari等[5]使用的引物，上游序列5′-CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC-3′，下游序列5′-CCT CCA CCC TGT TCA GCCC-3′。PCR反应体系：10×PCR缓冲液(Mg2+plus)2.5μl,引物各1μl,10mmol/L三磷酸脱氧核苷(dNTP)1μl,1U Taq酶,DNA模板1μl，加灭菌去离子水至总体积25μl。PCR扩增条件：94℃预变性5 min，继35个循环进行扩增(94℃变性1 min，68℃退火1 min，72℃延伸1 min)，最后72℃延伸5 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。

　　1.2.5 DNA多态性分析： 限制性酶切反应体系： PCR产物10μl，HaeⅢ内切酶10U，10×M缓冲液2μl，加灭菌去离子水至20μl。酶切条件37℃ 2～3h，酶切产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察电泳带并照相。

　　1.3 统计学分析

　　应用SPSS13.0统计软件包分析。所有计量资料均采用均数±标准差(±s)表示。基因型和等位基因频率用基因计数法，检验基因型频率与Hardy-Weinberg平衡定律符合程度，用x2检验。组间一般资料及生化指标的比较采用t检验或x2检验。P<0.05为差异有显著性。

　　2 结 果

　　2.1 研究对象的一般临床资料和生化指标

　　两组患者一般临床资料中，除静脉血糖在房颤组较窦律组有显著增高(P<0.05)外，其余指标在两组间无显著性差异。见表1。表1 两组一般资料及生化指标的比较注：与窦律组比较△P<0.05。

　　CYP11B2基因各基因型在AF组和窦律组中的分布：本实验PCR产物长537bp。CYP11B2基因-344位点可发生胸腺嘧啶(T)与胞嘧啶(C)的互换,即T-344C有-344T，-344C两种等位基因，经Hae Ⅲ酶切后有三种基因类型，即TT型(酶切片段为273bp),CC型(202bp)，CT型(酶切后产生273bp和202bp片段)，各基因型均含有多个小片段。

　　计算出汉族CHF人群中CYP11B2基因-344C/T等位基因的频率，经Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验，表明各基因频率已达到遗传平衡，具有群体代表性(x2=0.004，P>0.05)。

　　通过比较AF和窦律组的基因型的分布情况，发现CYP11B2基因-344C/T基因型两组中的分布有显著性差异(P均<0.05)。见表2。表2 两种CYP11B2基因各基因型频率以及等位基因频率的比较注：等位基因数之和是病例数之和的一倍。

　　3 讨 论

　　醛固酮合酶是体内生物合成醛固酮的重要催化酶，它是一种线粒体细胞色素P450氧化酶。该基因有两种常见的变异，CYP11B2基因的第2个内含子中大部分碱基可被CYP11B1基因的相应部分取代，是为一种变异;另一种变异位于启动子区域-344处，该处是1型类固醇生成因子(steroidogenic factor-1，SF-1)转录因子的结合位点，该位点可发生胞嘧啶(C)与胸腺嘧啶(T)的转换。

　　在我们既往的研究中发现[6-8]，汉族人群的CYP11B2基因-344C/T多态性与原发性高血压无相关性，但却与血浆醛固酮浓度和左心室结构及功能有关。本研究发现：CYP11B2基因各基因型在AF组和窦律组中的分布存在显著性差异，房颤组中携带CT+CC基因型较窦性心律组明显增高。

　　心房颤动是临床上最常见的持续性心律失常，可增加心力衰竭和脑卒中的发病率及全因死亡率。心房颤动的发病率呈现逐年增加的趋势，并随着年龄的增加而明显增高，而且在CHF患者中的发生率更高[9]。RAAS系统作为重要的神经内分泌调节机制在调节心血管系统的活动中起重要作用。

　　AF的发生与心脏机械重构和电重构有关，炎症和交感活性可能在此过程中发挥重要作用。因此，RASS可能是通过加强炎症和交感活性的作用来促使房颤的发生和发展。实际上，在我们以往的研究中已发现[8]：CT+CC基因型与较高的血浆醛固酮浓度相关。Takai等[10]在对原发性扩张型心肌病患者中的研究也发现，CC基因型与较大的左室容积和较高的血浆醛固酮浓度有关。

　　本研究的不足之处包括以下两方面。首先，受多种条件的限制，本研究的病例数较少;其次，本研究并未检测所有对象的血浆醛固酮浓度。

　　【参考文献】

　　[1]Boos CJ, Anderson RA, Lip G.Is atrial fibrillation an inflammatory disorder?[J]. European Heart Journal, 2006,27: 136-149.

　　[2]Dixen U, Ravn L, Soeby-Rasmussen C, et al. Raised plasma aldosterone and netriuretic peptides in atrial fibrillation[J].Cardiology,2007,108: 35-39.

　　[3]Maggioni AP, Latini RS, Carson PE, et al.ValHeFT investigators valsartan reduces the incidence of atrial fibrillation in patients with heart failure:results from the valsartan heart failure trial(Val-HeFT)[J].Am Heart J, 2005,149:548-557.

　　[4]Stocco DM, Clark BJ.The role of the steroidogenic acute regulatory protein in steroidogenesis[J].Steroids,1997,62:29-36.

　　[5]Kupari M, Hautanen A, Lankinen L, et al. Association between human aldosterone synthase (CYP11B2) gene polymorphisms and left ventricular size, mass, and function[J].Circulation,1998,97:569-575.

　　[6]胡晓军，王 芳，王晋明, 等.武汉地区汉族人群醛固酮合酶基因多态性与原发性高血压的关系[J].临床心血管病杂志,2003,19(8)：456-458.

　　[7]胡晓军，涂远超，陈 苏，等.原发性高血压患者醛固酮合酶基因-344C/T 多态性与左室结构及功能的关系[J].中国组织工程研究与临床康复，2007,11(4): 664-668.

　　[8]胡晓军，涂远超，陈 苏，等.原发性高血压患者醛固酮合酶基因-344C/T 多态性与血浆醛固酮浓度的关系.中国分子心脏病学杂志,2006,6(5): 303-306.

　　[9]Chugh SS,Blackshear JL, Shen WK, et al. Epidemiology and natural history of atrial fibrillation: clinical implications[J].J Am Coll Cardiol, 2001,37(2):371-378.

　　[10]Takai E, Akita H, Kanazawa K, et al. Association between aldosterone synthase (CYP11B2) polymorphism and left ventricular volume in patients with dilated cardiomyopathy[J].Heart 2002,88:649-650.