紫外分光光度法测定益寿地仙颗粒中总黄酮含量的分析

　　【摘要】 目的 建立紫外分光光度法测定益寿地仙颗粒总黄酮含量的方法。方法 采用紫外分光光度法测定益寿地仙颗粒总黄酮的含量。结果 总黄酮在0.0052 -0.0416 mg/ml与吸光度线性关系良好,回归方程为y=12.15x+0.0035 ， r2=0.995，总黄酮含量为5.86%;样品在测定的100min内稳定、重现性良好; RSD为1.24%，回收率平均为95.51%，准确性相对偏差为0.9396%。结论 方法简便可行，重现性好，为益寿地仙颗粒的质量控制提供了方法。

　　【关键词】 总黄酮;紫外分光光度法; 益寿地仙颗粒

　　Determination of Total flavonoids in Yishoudixian Granule

　　LI Zhi-fang, WANG Li, ZHANG Dong-ping, et al. (Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

　　[Abstract] Objective To establish a method for the determination of total flavonoids in Yishoudixian Granule by ultraviolet spectrophotometry. Methods Determination of flavonoids was adopted by ultraviolet spectrophotometry in Yishoudixian Granule of content. Results It was apparent total flavonoids in the 0.0052 mg/ml-0.0416 mg/ml and a good linear relationship between the absorbance. For the regression equation y = 12.15x +0.0035 r2 = 0.995, flavonoids in total was 5.86 %. The sample was stable and reproducible within 100 min, and RSD was 1.24 %, and the average recovery rate was 95.51 %. Accuracy of the relative deviation was 0.09396%. Conclusion This method is simple, reliable a method for determination of Yishoudixian granule particles.

　　[Key words] Ultraviolet spectrophotometry; Yishoudixian Granule; Total flavonoids

　　益寿地仙颗粒来自宋朝·《太平圣惠方》经典益寿地仙处方方剂，原名为“草还丹”，《丹溪心法》亦录有此方。具有补肾壮阳之功效、疗补并重的特色，由肉苁蓉、巴戟天、枸杞子等药物组成，原方为蜜丸，运用现代科技手段对益寿地仙丸剂进行二次开发研究，制成便于服用、显效快、质量可控的颗粒剂。为了控制该制剂质量, 本文采用紫外分光光度法测定益寿地仙颗粒总黄酮含量，现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验材料：仪器用UV-2550紫外分光光度计(日本岛津)、210电子分析天平(日本岛津)、KQ-500B超声波清洗仪(昆明市超声仪器有限公司)、HH.SYII-NiZ-C电热恒温水浴锅(北京长源实验设备厂)、SHB-III循环式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)等。试药使用芦丁为中国药品检研所提供(批号：070523)、亚硝酸钠(分析纯，西安化学试剂厂)、氢氧化钠(分析纯天津市华东试剂厂)、硝酸铝(分析纯北京化工厂)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 对照品溶液的制备：精密称取在120℃干燥恒重的芦丁对照品13.0mg，置100ml容量瓶中加60%乙醇适量，置超声10min(50℃)使其完全溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，摇匀，制成浓度为0.13 mg/ml的对照品溶液。

　　1.2.2 供试品溶液的制备：精密称取益寿地仙颗粒0.1024g于50ml容量瓶中，加60%乙醇溶液适量，置超声10min(50℃)使其完全溶解，待冷却后用60%乙醇溶液稀释至刻度。

　　1.2.3 标准曲线的制备：精密量取芦丁对照品溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，分别置于25ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1.0ml，放置6min后，加10%硝酸铝溶液1.0ml，放置6min。加1mol/ml的氢氧化钠溶液10ml，放置15min，用60%乙醇定容至刻度。以相应试剂60%乙醇为空白，照紫外可见分光光度法(2005版药典附录Ⅵ)进行全波长扫描，测定绘制标准曲线。

　　1.2.4 精密度试验：量取对照品溶液8ml按“样品含量测定”项下方法操作重复测定5次。

　　1.2.5 重复性试验:取本品颗粒5份各1 g，精密称定，按“标准曲线制备”项下方法从“置于25ml容量瓶中”开始操作，测定黄酮含量，重复测定5次

　　1.2.6 回收率测定 [1] :在已知含量的供试品3ml中，精密加入3ml的芦丁对照品，按“样品含量测定”项下方法操作测定结果。

　　1.2.7 稳定性实验:取供试品溶液4.0ml，按照标准曲线方法分别于10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150min测定吸光度。

　　1.2.8 样品含量测定:分别精密量取供试品溶液4.0ml，照“标准曲线制备”项下从“置于25ml容量瓶中”开始操作，测定，按回归方程y=12.15x+0.0035，r2=0.995，求出供试液中总黄酮的含量。

　　2 结果

　　2.1 标准曲线的制备:以相应试剂60%乙醇为空白，按照紫外可见分光光度法(2005版药典附录Ⅵ)进行全波长扫描，在500nm有最大吸收。以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，以测定结果计算得回归方程：y=12.15x+0.0035，r2=0.995。

　　2.2 精密度试验：结果见表1。表1 精密度数据

　　2.3 重复性试验：测定黄酮含量，重复测定5次, 含量为1.85%,RSD%为0.1869，结果见表2。表2 重现性数据

　　2.4 回收率测定[1] ：按“样品含量测定”项下方法操作测定，结果见表3。表3 回收率数据

　　2.5 稳定性实验：按照标准曲线方法分别于10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150min测定吸光度，RSD%为0.19%。

　　2.6 样品含量测定：按下式计算黄酮的含量为5.86%。黄酮含量(%)=F×(X×V)/m×100%(X:样品液中的黄酮浓度;V：样品液的体积;m：测定所取颗粒质量;F：校正系数)。

　　3 讨论

　　UV法是目前被广泛应用于测定中药中的总黄酮。黄酮类化合物多具有3,4,5羟基,可与许多金属试剂反应生成有色络合物,根据此特点可以利用UV来测定总黄酮的含量[2]。以芦丁作为对照品，采用亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等作为显色剂[3]，对芦丁对照品UV扫描发现其最大吸收在510nm处，但与500nm处吸收值相差很小，参考2005版《中国药典》槐花测定项总黄酮也是于500nm处测定[4]。因此，选择500nm为测定波长。精密度、重复性、稳定性试验表明该含量测定方法准确可靠，可以通过其处方中总黄酮含量的检测来控制本制剂的内在质量。

　　【参考文献】

　　[1] 蒋俊毅，曹 凯，吴德康，等.紫外分光光度法测定杏香兔耳风制剂中总黄酮含量[J].时珍国医国药，2005,16(3):178-179.

　　[2] 丁利君，吴振辉，蔡创海，等.菊花中黄酮类物质提取方法的研究[J].食品工业科技，2002，21(2)：20-22.

　　[3] 孙 萍,兰 卫,李艳徽，等.微波提取肉苁蓉中总黄酮和多糖的含量测定[J].中草药，2003,34(6): 14-15.

　　[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2005.246-247.