ATM蛋白在宫颈癌中的表达及临床意义

　　【摘要】 目的 研究毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白(ATM)在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和正常宫颈组织中的表达情况，探讨其在宫颈癌发生发展中的作用。方法 采用免疫组化SP法检测50例宫颈癌、15例CIN和20例正常宫颈组织中ATM蛋白的表达。结果 ATM在宫颈癌、CIN及正常宫颈组织中的阳性率分别为22%、33.3%和60%，在宫颈癌中的表达水平低于正常宫颈组织，差异有统计学意义(P<0.01)，在正常宫颈组织中的表达水平虽高于CIN但差异无统计学意义(P>0.01)。结论 ATM蛋白在宫颈癌组织中的表达下降，ATM可能在宫颈癌的发生发展中起一定的作用。

　　【关键词】 ATM;宫颈癌;免疫组化

　　The expression and clinical significance of ataxia-telangiectasia mutanted protein in cervical carcinoma

　　WANG Qiu, ZHE Hong. (The Affiliated Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

　　[Abstract] Objective To study the expression of ataxia-telangiectasia mutanted protein (ATM) in cervical carcinoma, cervical intra-epithelial neoplasia (CIN) and normal cervical tissue and to explore its role in tumor progression of cervical carcinoma. Methods Immunohistochemistry was used to detect the expressions of ATM in 50 cases of cervical carcinoma, 15 cases of CIN and 20 cases of normal cervical tissue. Results The positive percentages of ATM in cervical carcinoma, CIN and normal cervical tissue were respectively 22%, 33.3% and 60%; and the expression of ATM in cervical carcinoma was lower than that in normal cervical tissue (P<0.01), although its expression in normal cervical tissue was higher than that in CIN, but the difference has no statistical significance (P>0.01).Conclusion The expression of ATM in cervical carcinoma was decreased, and ATM may take a role in the progression of cervical carcinoma.

　　[Key words] ATM; Cervical carcinoma; Immunohistochemistry

　　宫颈癌是最常见的妇科肿瘤之一，严重威胁着妇女的健康。研究表明癌症的发生是多因素共同作用的结果，其中基因突变占有重要地位。基因组稳定性的维持依赖于细胞内DNA损伤后的修复系统，这一系统的紊乱则可能导致肿瘤的发生。毛细血管扩张性共济失调症突变基因(ataxia-telangiectasia mutated，ATM)是导致毛细血管扩张性共济失调症(AT)发生的致病基因。已有研究证实AT患者易患白血病等多种恶性肿瘤。有关ATM蛋白与宫颈癌的关系研究尚少，本研究将应用免疫组化方法检测ATM蛋白在宫颈癌组织、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及正常宫颈组织中的表达，探讨其在宫颈癌发生发展中的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 临床资料：选取我院病理科2006年9月-2009年3月的宫颈癌患者(均经病理证实为宫颈鳞癌)的宫颈活检组织石蜡包埋标本50例，按FIGO分期分别为Ⅱa 8例、Ⅱb 28例、Ⅲa 8例和Ⅲb 6例,年龄38-71岁，平均52岁。同时随机选取我院2008-2009年确诊的CIN患者15例，年龄41-61岁，平均47岁;正常宫颈组织(均因子宫肌瘤行子宫全切术，术后病理证实宫颈组织为正常组织)20例，年龄40-57岁，平均48岁。

　　1.2 实验方法：鼠抗人ATM(1∶200)多克隆抗体、SP试剂盒、DAB显色剂均购自北京博奥森生物公司。免疫组化采用SP法，石蜡包埋组织4μm切片后进行抗原修复，免疫组化染色按SP试剂盒说明书进行，用已知阳性组织切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 结果判定：ATM免疫组化染色以细胞胞核内出现黄色颗粒者为阳性细胞，采用双盲法对染色结果进行评估，染色结果判定综合染色强度和阳性细胞百分数，染色强度需与背景相对比：无色记0分;淡黄色记1分;棕黄色记2分。每张切片选5个高倍视野取平均值：无阳性细胞为0分;阳性细胞≤10%为1分;11%-50%为2分;51%-75%为3分;≥75%为4分。采用染色强度×染色百分率计分的方法进行综合评分：≤3分为阴性;>3分为阳性。

　　1.4 统计学方法:采用SPSS12.0软件对数据进行χ2检验及Fisher确切概率法，以P<0.05为差异有统计学意义;三组间的两两比较采用χ2分割法检验，以P<0.01为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 宫颈鳞癌组织、CIN及正常宫颈组织中ATM的表达:ATM蛋白主要表达于细胞胞核，部分表达于胞浆。ATM蛋白在50例宫颈鳞癌组织、CIN及正常宫颈组织中的阳性表达率见表1，阳性表达见图1-3。结果显示：ATM蛋白在三组中的表达差异有统计学意义(P<0.05)，宫颈癌与正常宫颈组织中ATM蛋白的表达差异有统计学意义(P<0.01)，CIN与宫颈癌、正常宫颈组织中ATM蛋白的表达差异均无统计学意义(P>0.01)。表1 ATM蛋白在宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中的表达注：与正常宫颈组织比较，*χ2=9.351，P=0.002

　　2.3 ATM蛋白的表达与宫颈鳞癌临床病理参数的关系:ATM的表达与宫颈鳞癌患者的年龄(以中位年龄54岁为界)、分化程度和临床分期(将Ⅱa期、Ⅱb期合并，Ⅲa期和Ⅲb期合并)均无相关性(P>0.05)，见表2。表2 ATM蛋白与50例宫颈癌患者临床病理参数的关系

　　3 讨论

　　ATM基因是磷酸肌醇激酶-3(PI3K)基因家族成员，位于人类染色体11q22-23，为肿瘤抑制基因，对维持机体细胞内染色体的稳定性起到重要作用，其编码产物ATM蛋白是含有3056个氨基酸的大分子核蛋白[1]，广泛表达于人体各组织细胞中。AT患者正是由于致病基因ATM突变造成编码的ATM蛋白功能缺失而导致罹患癌症风险显著增高[2]。在DNA损伤的细胞信号传导通路中主要参与：1)激活细胞周期检测点。ATM被DNA损伤激活后，磷酸化和去磷酸化一系列蛋白底物如P53等[3]，将DNA损伤信号传递给效应分子，激活各个细胞周期检测点机制，引起G1/S、S、G2/M期阻滞，从而在S期DNA复制或染色体有丝分裂前修复受损的DNA。2)调控DNA损伤的修复。ATM蛋白的核心作用是对电离辐射或紫外线造成的DNA双链断裂损伤起反应，通过激活与DNA修复相关的BRCA1和RAD51从而调控DNA损伤的修复。当ATM基因发生突变、失活和功能受损后，细胞缺乏功能正常的ATM蛋白，不能正常修复受损的DNA，受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞，最终易导致细胞癌变。汤屹等研究发现在髓性白血病中大部分存在ATM mRNA表达水平下降和缺失的现象[4]。何园等研究发现ATM基因失活可能是促使口腔黏膜鳞癌恶性演进的基因改变之一[5]。李高峰等研究发现大部分肝癌患者中ATM的mRNA表达水平存在不同程度的升高，说明ATM在肝癌的发病机制中起相关作用[6]。目前国内外很多研究已经证实ATM基因异常与多种肿瘤的发生相关，但其是否在宫颈癌的发生发展中发挥作用目前国内外相关研究甚少。

　　我们采用免疫组织化学方法检测了ATM蛋白在宫颈鳞癌组织、CIN及正常宫颈组织中的表达，旨在了解其表达是否与宫颈癌的发生发展有关。结果显示:1)ATM蛋白在宫颈癌细胞中主要表达于胞核，这种分布可能与ATM能够识别并修复DNA损伤，参与细胞核内一系列磷酸化反应的功能有关。2)ATM蛋白在宫颈癌组织中的表达水平明显低于正常宫颈组织，提示ATM蛋白的表达下降可能与宫颈癌的发生有关，表明宫颈癌患者中可能存在ATM基因突变导致基因组的不稳定性从而致使肿瘤发生，这与先前国外的报道有一致之处，Hirai等的研究发现ATM的基因复制下降或缺失与宫颈透明细胞癌的发生有关[7];Skomedal等在宫颈癌患者中检测出11q23区域的染色体等位基因的不平衡，提示ATM基因可能与宫颈癌变过程有关。此外，ATM蛋白的表达在CIN组织中的阳性率明显低于正常宫颈组织中的阳性率，提示ATM的表达下降可能在正常宫颈组织发展到CIN的过程中发挥作用，但其差异无统计学意义，尚需扩大样本量进一步研究。在ATM的表达与宫颈癌患者的临床病理参数均无关，使其有可能成为评价宫颈癌患者临床生物学特征的独立指标。

　　【参考文献】

　　[1] Shiloh Y, et al.ATM and related protein kinases：safeguarding genome integrity[J].Nat Rev Cancer,2003,3(3)：155.

　　[2] 关方霞,黄惠芳,杨波,等.共济失调-毛细血管扩张症致病基因RNA干扰对胶质瘤细胞放射敏感性的影响[J].郑州大学学报,2006,41(3):523.

　　[3] Olsen JH, Hahnemann JM, Borresendlae AL, et al.Cancer in patients with ataxia-telangiectasia and in their relatives in the nordic countries[J].J Natl Cancer Inst,2001,93(2):121-127.

　　[4] 汤屹，刘文励，周剑锋,等.髓系白血病原代细胞和肿瘤细胞株ATM转录水平的研究[J].中华血液学杂志，2004，25：379-380.

　　[5] 何园,陈谦明,李秉琦.ATM与口腔黏膜癌变[J].上海口腔医学,2004,10(13):107.

　　[6] 李高峰，王宏梅，陈龙华.原发性肝癌患者ATM表达水平及其临床意义[J].广东医学,2008,29(10)：1652-1653.

　　[7] HiraiFY,KawamataTY,TakeshimaFN.ConventionalYandTarray-basedGcompara-tive genomic hybridization analyses of novel cell lines harboring HPV18 from glassy cell carcinoma of the uterine cervix[J].Int J Oncol,2004,24(4):977-86.