ASEGCMS分析莪术的挥发性成分

　　【摘要】 　　目的 建立一种莪术挥发性成分的提取和分析的方法。方法 加速溶剂萃取法(ASE)提取莪术挥发性成分，气质联用(GCMS)进行定量分析。结果 最佳的提取工艺条件：萃取溶剂乙酸乙酯，萃取温度80℃，静态时间6 min，循环2次。气质联用条件：进样1 μl，初始温度60℃，终止温度290℃;质谱扫描范围50～500 m/z，扫描间隔0.5 s，采用NIST和Wiley谱库对检测物进行在线检索。结论 采用优化后的ASE可快速提取莪术挥发性成分，结合GCMS检测。该方法显著优于传统提取和分析方法，具有高效、无污染、工艺简单和高实用等优点。

　　【关键词】 加速溶剂萃取;莪术;挥发性成分;气质联用

　　Analysis of elements of volatile oil from Rhizoma curcumaesediment by ASE and GCMS

　　LIU Xiaohu，LU Zhao，CUI Jiucheng，GONG Jingliang，HE Rei

　　(Shanxi University of Chinese Medicine，Shanxi，Xianyang，712046;Jilin Medical College：Department of Chemistry，Department of Oral Imaging 06 undergraduate class,Jilin City,Jilin Province,132013,China)

　　Abstract:Objective To set up a method of extraction and analysis of volatile oil from Rhizoma curcumaesediment. Methods Accelerated solvent extraction(ASE100)method was used to extract volatile oil from Rhizoma curcumae and the main compounds of volatile oil were identified by GCMS. Results The best condition of extraction:Extractive solvent acetic ester was extracted at the temperature of 80℃,with a static period of 6 mins,two cycles.Condition of GCMS:sample 1 μl was introduced at the initial temperature 60℃ and final temperature 290℃;MS scan range 50～500 m/z,scanning interval 0.5 s,NIST and Wiley registry of mass spectral data was used to search online. Conclusion With the methods of optimized ASE combined with GCMS,the volatile oil from Rhizoma curcumae was extracted and identified rapidly.The method was obviously better than other traditional extraction methods and it was quite effective,pollutionfree,simpleprocessed and highly pragmatic.

　　Key words:accelerated solvent extraction;Rhizoma curcumae;volatile oil;GCMS

　　据《本草纲目》记载：莪术辛、苦、温，归肝、脾经，具有行气破血、消积止痛之功效，被称为血中之气药。莪术根茎中含挥发油约1%～2.5%，为多种倍半萜类，研究发现,其中莪术醇、榄香烯、莪术酮和莪术二酮具有抗肿瘤、抗病毒的疗效[1]。随着近年来癌症发病率和死亡率的提高,有关中药莪术抗肿瘤的药学研究备受瞩目。但报道大多是药材总提取物的药理活性及临床应用[23],而对其基础物质——化学成分[45]的研究却少有报道。本实验以莪术为原料，采用加速溶剂萃取法(ASE)提取挥发性成分，通过紫外分光光度法监测其含量变化，用气质联用法(GCMS)分析最优工艺条件下提取得到的挥发性成分。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料与仪器

　　块状莪术(吉林市同仁堂药店购买，经吉林市丰满区药检所鉴定为干燥莪术根茎);石油醚、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醇(分析纯，天津市北方天医化学试剂厂).

　　ASE100 快速溶剂萃取仪，美国Dionex 公司 (配34 ml样品池及清洗池,收集瓶);UV754N型紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司;GCMS (Clarus500 气相色谱仪， Clarus四极杆质谱仪， 美国PE 公司);FW100型高速万能粉碎机，北京中型伟业仪器有限公司;AL104型电子分析天平，梅特勒托利多仪器(上海)有限公司。

　　1.2 加速溶剂萃取

　　莪术粉碎后过80目筛，置于60℃烘箱内烘干。称取5.0 g的莪术粉于34 ml的样品池中。ASE的操作条件：冲洗的体积(每次循环新加入到样品中的新萃取液的比例)60%，时间60 s。考察所用的萃取溶剂种类、萃取温度、静态时间以及循环次数对萃取率的影响,分别用石油醚、丙酮、乙酸乙酯和无水乙醇萃取,萃取温度分别为60℃、70℃、80℃、90℃、100℃，静态时间为3、4、5、6、7、8 min，循环次数为1、2、3。

　　1.3 色谱质谱条件

　　色谱柱：PE5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);进样口温度300℃;传输线温度280℃;程序升温：柱初温60℃保持1 min，以10℃/min 升至250℃，保持2 min，以5℃/min升至290℃，保持10 min; 载气：氦气(纯度为99.999%);流速：1.0 ml/min;进样量： 1 μl(ASE);不改变压力,恒流方式，无分流。

　　质谱条件：离子源为电子轰击(EI)，电子能量70 eV，扫描范围50～500 amu ;四级杆温度150℃，溶剂延迟时间3 min。谱图检索为WILEY谱库和NIST谱库。

　　2 结果与讨论

　　2.1 ASE萃取条件的选择

　　2.1.1 提取溶剂的选择

　　准确称取原料莪术粉5.0 g，分别用100%石油醚、100%丙酮、100%乙酸乙酯、无水乙醇作为溶剂，设定其他条件为：温度80℃，静态萃取时间5 min，冲洗体积60%，循环1次进行提取。测定紫外吸收A值分别为0.457、0.373、0.529、0.498。莪术挥发油是亲酯性物质，所以乙酸乙酯的萃取效果最好，故选择乙酸乙酯作为提取剂。

　　2.1.2 提取温度的选择

　　准确称取原料莪术粉5.0 g，乙酸乙酯作提取剂，设定温度依次为60℃、70℃、80℃、90℃、100℃;冲洗的体积(每次循环新加入到样品中的新萃取液的比例)60%;静置时间5 min;冲洗时间60s;循环1次，进行萃取，测定紫外吸收A值分别为0.477、0.501、0.531、0.512、0.503。结果表明，莪术挥发油的提取率在80℃时最高。

　　2.1.3 提取时间的选择

　　准确称取原料莪术粉5.0 g，乙酸乙酯作提取剂。萃取温度80℃;冲洗体积60%;冲洗时间60 s;循环1次,静置时间依次为3、4、5、6、7、8 min。测定紫外吸收A值分别为0.506、0.519、0.527、0.538、0.540、0.541。结果表明，萃取时间在3～6 min时，对提取率的影响较大;6 min以后，对提取率影响不大。

　　2.1.4 循环次数的选择

　　准确称取原料莪术粉5.0 g，乙酸乙酯作提取剂,萃取温度80℃;冲洗体积60%;冲洗时间60 s;静置时间6 min;改变循环次数为1、2、3次,测定紫外吸收A值分别为：0.493、0.564、 0.561。结果表明，循环次数对ASE的提取率有一定程度的影响。使用1个周期的提取率明显不如2个周期的，原因是2个周期从1个周期的中途退出，再次引进了新鲜溶剂，使存在于样品基体表面与萃取池的溶液之间的浓度梯度加大，质量传递加快，萃取效率提高。而3个周期与2个周期的差别不大，故选定2个周期作为最佳的条件。

　　2.2 GCMS分析

　　对最优提取方案(提取剂为乙酸乙酯;萃取温度80℃;冲洗体积60%;冲洗时间60 s;静置时间6 min;循环2次)下提取的莪术挥发油进行GCMS分析，总离子色谱图见图1。

　　结果表明，在4～25 min内分离出47种化合物，此条件下达到基线分析的峰至少超过40个，与计算机内存NIST 谱图库中化合物标准谱图进行检索,匹配度高于60%,相对含量均大于0.1%(见表1)的有15种挥发油成分。莪术挥发油内含有醚、酮、醇、烯类物质，其中倍半萜化合物居多，主要为新莪术二酮、莪术烯、γ橄香烯等成分。这与文献中的莪术挥发油的成分符合，证明利用ASE提取莪术挥发油是可行的。表1 莪术中代表性挥发油成分分析结果(略)

　　3 结论

　　本实验研究了ASE技术在提取莪术挥发性成分的应用。建立了ASEGCMS分析莪术的挥发性成分的方法，该方法具有高效、无污染、工艺简单和高实用等优点。本实验证明利用ASEGCMS分析莪术的挥发性成分具有良好的应用前景。

　　【参考文献】

　　[1]李国栋,许付,沈爱军.莪术油的研究进展[J].中国药学杂志,2002,37(11):806809.

　　[2]汪伟民,汪波,刘荣玉,等.中药莪术油对小鼠Lewis肺癌抑制作用的实验研究[J].中国中医药科技,2003,10(6):353354.

　　[3]周欣,梁光义,沈万雁,等.不同产地莪术挥发油的研究[J].华西药学杂志,2008,15(3):201203.

　　[4]黄可新,陶正明,张安将,等.温莪术化学成分的研究[J].中国中药杂志,2000,25(3):163164.

　　[5]王琰，王慕邹.莪术的质量研究[J].药学学报，2001，36(11)：849853.