不同产地黄连的质量评价

　　【摘要】 　　目的：评价不同产地的黄连药材质量。方法：采用HPLC法测定不同产地黄连中盐酸小檗碱的含量。色谱条件：diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 nm，5 μm)，流动相为乙睛-0.1%磷酸溶液(50∶50)，检测波长265 nm。结果：盐酸小檗碱在0.25～4.0 μg范围内线形关系良好(r=0.9999)，平均回收率为98.7%，RSD=0.34%，8个样品黄连中盐酸小檗碱的含量为5.8%～8.6%。结论：不同产地黄连在盐酸小檗碱含量上有一定差异，但均符合现行《中国药典》2005版规定，总体质量良好。

　　【关键词】 黄连 HPLC 盐酸小檗碱

　　Quality Assessment of Rhizoma Coptidis from Different Areas ZENG Xiufang1,2,ZENG Jianting3，ZHANG Hong1 (1College of Pharmacy,Wuhan University,Wuhan,Hubei 430072;2Qingyuan Food and Drug Administration,3Qingyuan Institute for Drug Control,Qingyuan,Guangdong 511517,China)

　　Abstract:Objective To evaluate the qualities of Rhizoma Coptidis from different areas.MethodsThe content of berberine hydrochloride in Rhizoma Coptidis was determined with HPLC.The HPLC was performed on a diamonsil C18 (4.6 mm×250 nm,5 μm)column,the mobile phase was acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(50∶50),and the detection wavelength was 265 nm.Results The berberine hydrochloride showed good linearity over the range of 0.25～4.0 μg(r=0.9999),the average recovery was 98.7%,RSD=0.34%,the contents of berberine hydrochloride were 5.8%～8.6% in 8 samples.Conclusion The contents of berberine hydrochloride in Rhizoma Coptidis have difference from different areas,and all meet the requirements in Chinese Pharmacopoeia.

　　Key words:Rhizoma Coptidis;HPLC;Berberine hydrochloride

　　黄连(Rhizoma Coptidis)为毛茛科植物黄连(Coptis chinensis Franch)的干燥根茎。主产于四川、湖北、贵州、陕西等地，因产地较多，质量不易控制，随国家中药现代化工程的实施，黄连的质量评价显得尤为重要。为有效评价黄连的质量，本实验建立了主要有效成分盐酸小檗碱的含量的HPLC测定法，对不同产地黄连的质量进行评价。

　　1 仪器和试剂

　　Agilent1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，KQ100E型超声波清洗机(上海精密仪器公司)，盐酸小檗碱(Berberine Hydrochloride中国药品生物制品检定所，供含量测定用,105 ℃干燥5 h,按含C20H18ClNO4为98.1%计,批号:110713200609)，乙睛为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为去离子水。黄连样品由广东新特药业有限公司、广东紫云轩药业有限公司、清远市丹阳医药有限公司、清远市福生医药有限公司等4家药品批发企业提供共八个批次，样品原产地依次为：四川大邑、重庆石柱、湖北利川、四川洪雅、四川巫溪、湖北房县、四川峨眉、陕西安康。以上药材经广东省清远市药品检验所黄丽霞副主任药师鉴定均为黄连药材。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 nm，5 μm)，流动相乙睛-0.1%磷酸溶液(50∶50)，流速1.0 mL/min,检测波长265 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。盐酸小檗碱和其它成分完全分离，峰型对称，对照品及样品色谱图见图1,2。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　精密称取盐酸小檗碱对照品10 mg，置200 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

　　图1 对照品液相色谱图

　　图2 样品液相色谱图

　　2.3 供试品溶液的制备

　　取黄连粉末约0.1 g，精密称定，置三角瓶中，加入盐酸-甲醇(1∶100)约95 mL，60 ℃水浴中加热15 min，取出，超声处理30 min，室温放置过夜，转移到100 mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4 线性关系考察

　　精密吸取上述对照品溶液5，10，20，40，60，80 μL分别注入色谱仪，进样测定，记录峰面积。以对照品(C)对峰面积(A)进行线性回归，回归方程为Y=4323.4X+10.876(r=0.9999)，结果表明盐酸小檗碱在0.25～4 μg范围内线形关系良好。

　　2.5 精密度试验

　　精密吸取同一份对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，结果,盐酸小檗碱峰面积的RSD=0.46%,表明本方法精密度良好。

　　2.6 重复性试验

　　按拟定的含量测定方法，取同一批样品(产地:四川大邑)，平行称取5份，照“2.3”项下操作进行含量测定，结果，平均含量为7.7%,RSD=0.29%。表明本方法重复性好。

　　2.7 回收率试验

　　取已知含量的样品(产地:四川大邑)约0.1 g,精密称取5份，再每份精密加入适量对照品，照“2.3”项下操作，并按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。平均回收率为98.7%,RSD为0.34。表1 加样回收率试验

　　2.8 稳定性试验

　　分别于0，2，4，6，8，12，24 h精密吸取同一份供试品(产地:四川大邑)溶液10 μL，进样测定，比较峰面积，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

　　2.9 样品测定

　　取各地黄连样品粉末约0.1 g，精密称定，照“2.3”项下操作进行含量测定，结果盐酸小檗碱含量分别为： 四川大邑7.7%;重庆石柱7.5%;湖北利川8.6%;四川洪雅6.3%;四川巫溪6.5%;湖北房县5.8%;四川峨眉7.0%;陕西安康6.8%。

　　3 讨论

　　3.1 检测波长的选择

　　取盐酸小檗碱对照品溶液,精密量取5 mL放置至50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，在200～400 nm波长范围内扫描,结果盐酸小檗碱在265 nm和346 nm的波长处有吸收峰,其中265 nm的波长与文献[1]报道的相近。实验表明，在265 nm的波长处杂质吸收峰少，干扰少，故定为本实验盐酸小檗碱的检测波长。

　　3.2 流动相选择

　　实验中曾参照冯瑛等[2]，采用不同的流动相,如乙睛-0.05 mol/L磷酸二氢钾水溶液(28∶72)，在此条件下,分离条件不是很理想,改用乙睛-0.1%磷酸溶液(50∶50)为流动相时,盐酸小檗碱峰与其它杂质峰能达到较好基线分离,故定为本实验的流动相。

　　结果表明,产地不同，黄连的盐酸小檗碱含量不同，但均高于《中国药典》2005年版的含量规定[3],黄连商品药材的质量总体上良好。《中国药典》2005年版中黄连药材的含量测定方法是薄层色谱扫描法测定盐酸小檗碱的含量,本文建立了高效液相色谱法测定黄连中盐酸小檗碱含量的方法，经系统的方法学考察，所建立的方法具有专属性强、稳定性好、可重复、操作简单等特点，适合于黄连药材的质量控制。

　　【参考文献】

　　[1]陈维佳,周洪雷.HPLC测定前列舒通片中盐酸小檗碱含量[J].中国现代中药,2008,10(1):25-26.

　　[2]冯 瑛,夏正燕,潘建明.HPLC法测定黄连降糖片中盐酸小檗碱的含量[J].中药新药与临床药理,2009,20(1):70-71.

　　[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京:化学工业出版社,2005:213.