柿叶总黄酮对糖尿病小鼠降血糖降血脂作用及其机制研究作

作者：高永峰，高允生，辛晓明 作者单位：泰山医学院药学院，山东 泰安 271000

　　【摘要】 目的 研究柿叶总黄酮对四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的降糖降脂作用及其机制。方法 采用四氧嘧啶诱导制作糖尿病小鼠模型。给予柿叶总黄酮50、100、200 mg/kg灌胃治疗，连续2周，取血清，测定空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、SOD、MDA含量。灌胃期间，第7、14天分别称其体重。结果 与模型组相比，中、高剂量的柿叶总黄酮能够显著降低糖尿病小鼠血糖，提高血清中SOD 活性，降低TG、TC、MDA的含量。结论 柿叶总黄酮对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠具有降血糖和血脂的作用及提高机体抗氧化能力。

　　【关键词】 柿叶总黄酮; 糖尿病; 血糖; 血脂 ;氧化应激

　　Hypoglycemic and hypocholesterolaemia effect of Total flavonoids

　　from persimmon leaf in alloxaninduced diabetic mice and its mechanismGAO Yongfeng，GAO Yunsheng，XIN Xiaoming

　　( School of Pharmacy, Taishan Medical College, Taian 271016, China)

　　Abstract:Objective: To investigate the hypoglycemic and hypocholesterolaemia effect of total flavonoids from persimmon leaf (PTF) on alloxan-induced diabetic mice and its mechanism. Methods: The diabetic mice were established by injection of alloxan. Diabetic rats were given PTF (50,100, 200 mg /kg respectively) intragastric administration, for 14 days, and the daily diet of mice, water quantity and weight were observed each group in 7th day and 14th day in experiment. In 14th day, mice glucose value and blood serum TG, TC, SOD, MDA content were detected. Results: Compared with the diabete model group, the middle PTF dose and the high PTF dose lowered diabete mice's glucose level obviously, enhanced blood the SOD activeness and reduced TG, TC and the MDA content. Conclusion: The profection of total flavonoids from persimmon leaf possesses significant hypoglycemic antivities.

　　Key words:total flavonoids from persimmon leaf (PTF); diabet; blood glucose; blood lipid; oxidative-stress

　　糖尿病是一种多病因的代谢疾病，特点是慢性高血糖伴随因胰岛素分泌及作用缺陷引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。其长期的高血糖、高血脂是造成机体脏器损伤的重要原因[1]。近年来大量研究证明，许多黄酮类化合物在治疗糖尿病及其并发症方面疗效显著[2]。柿叶为柿树属植物柿的新鲜或干燥叶。其味苦、性寒，具有抗菌消炎，生津止渴、活血止血等功效，主治咳喘、消渴及各种内出血。现代研究表明，柿叶的主要有效成分之一是黄酮类化合物，具有良好的软化血管，降脂降压、抗氧化、止血等药理作用[3]。本研究探讨柿叶总黄酮(PTF)对四氧嘧啶糖尿病小鼠血清中血糖、血脂、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 柿叶总黄酮制备 柿叶采自泰山山麓，经过烘干粉碎、提取纯化、冷冻干燥得总黄酮提取物。以芦丁为标准测定黄酮含量为33.37%。四氧嘧啶(Alloxan,ALX)：Fluka 公司;血糖(Glucose,GLU)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total TClesterol,TC)试剂盒：中生北控生物科技股份有限公司;消渴丸(XKP)：广州中一药业有限公司。

　　1.1.2 动物 昆明种小鼠由泰山医学院实验动物中心提供，体重21.3±2.2(g)。普通饮食，自由饮水。

　　1.1.3 仪器 BT815A型半自动生化分析仪(上海三科仪器有限公司)，UV2550型紫外可见光分光光度计(上海棱光技术有限公司)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 小鼠糖尿病模型的制备[4] 100只小鼠适应实验环境1周后，随机抽取15只小鼠作为正常对照组(Normol Control,NC)，其余小鼠禁食12 h，自由饮水。

　　每只小鼠按60 mg/kg，尾静脉一次性注射ALX制作糖尿病小鼠模型。注射后72小时，测空腹血糖，空腹血糖大于11 mmol/L者纳入糖尿病模型。

　　1.2.2 动物分组及处理 将糖尿病模型小鼠随机分为模型组(Model Control,MC组)，消渴丸组(Xiao Ke Pill,XKP组)，柿叶总黄酮低(Low dose,LD组)、中(Middel dose,MD组)、高(High Dose,HD组)剂量组，每组15只。给药组每天灌胃给药一次，模型组和正常组每天灌胃生理盐水一次，连续2周。灌胃期间,于第7和14天称重。末次给药30分钟后，摘眼球取血，常规分离血清。按试剂盒说明书测定。

　　1.2.3 统计学处理 数据用±s表示，所有数据用SPSS13.0统计软件处理，P<0.05有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 柿叶总黄酮对糖尿病小鼠体重的影响

　　治疗前，与NC组小鼠比，造模成功的实验小鼠体重明显减轻(P<0.05)。治疗后第7、14天末，与NC组小鼠比，MC组小鼠体重未有明显恢复(P<0.05)。与MC组比较，消渴丸组和柿叶总黄酮各剂量组体重虽有增加，但无统计学意义。

　　2.2 柿叶总黄酮对糖尿病小鼠血糖、血脂的影响

　　与模型组相比：消渴丸组、PTF2.5 g·kg-1组、5.0 g·kg-1组小鼠血糖降低明显(P<0.05)。表明PTF对糖尿病小鼠有较好的降糖效果。柿叶总黄酮的中、高两个剂量组对血清中TG、TC有明显影响。与模型组相比，高剂量组的TG、 TC降低显著(P<0.05)，中剂量组的血清TG浓度有明显下降(P<0.05)，对TC有一定影响，但无统计学意义(见表1)。2.3 柿叶总黄酮对糖尿病小鼠血清SOD、MDA的影响表1 PTF对糖尿病小鼠血糖、血脂的影响与MC组比较,﹡P<0.05。

　　结果表明:与正常组相比，MC组小鼠血清中SOD降低，MDA升高(P<0.05)，表明高血糖模型小鼠的抗氧化能力明显低于正常小鼠。给药物后，XKP组和MD、HD组的PTF可明显提高小鼠血清中的SOD含量，降低MDA含量,差异有显著性(P<0.05)。表明柿叶总黄酮能有效促进糖尿病小鼠抗氧化能力的恢复(见表2)。表2 PTF对糖尿病小鼠血清中SOD、MDA的影响 与MC组比较,﹡P<0.05。

　　3 讨 论

　　体重减轻是糖尿病的一个临床观察诊断指标。本实验中，糖尿病模型小鼠的体重显著低于正常组。以消渴丸和柿叶总黄酮各剂量组治疗后体重虽有恢复，但与模型组小鼠相比，体重未出现明显增加。说明柿叶总黄酮不能完全纠正糖尿病小鼠的物质代谢紊乱。

　　四氧嘧啶在体内能选择性地被胰腺β细胞迅速吸收，其产生的超氧阴离子等自由基可直接破坏β细胞的膜结构，损伤β细胞的DNA。大量的β细胞损伤与坏死导致胰岛素原合成障碍，引起糖尿病[5]。本实验结果表明，柿叶总黄酮对四氧嘧啶糖尿病小鼠具有明显的降糖作用，与模型对照组相比差异具有明显的防治作用。说明柿叶总黄酮可能减弱四氧嘧啶对胰岛β细胞的损伤或改善受损伤的细胞的功能，有益于缓解糖尿病小鼠的症状。

　　心血管疾病并发症是糖尿病患者的主要死因，近80%的糖尿病患者死于心血管疾病。糖尿病患者在疾病的亚临床期就常存在血脂异常，机体血脂水平异常改变可诱发机体产生高脂血症，血脂异常直接损害动脉内皮功能及促进动脉粥样硬化斑块的形成和发展，所以血脂异常的控制是减少大血管疾病并发症至关重要的因素[6]。本实验中，柿叶总黄酮可显著降低糖尿病模型小鼠血清中TG、TC的水平。表明柿叶总黄酮能促进机体血脂水平趋于正常，防止糖尿病导致的脂类代谢紊乱，对糖尿病的并发症有防治作用。

　　糖尿病及其并发症的发病机制至今尚未完全阐明。近年来，许多研究发现糖尿病及其并发症的发生与机体的氧化应激水平有关[7,8]。氧化应激可以产生如下结果：1)阻断胰岛素作用通路，导致胰岛素抵抗;2)降低胰岛素基因表达水平;3)抑制胰岛素分泌;4)促进β细胞凋亡等[9]。在四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠模型中，大鼠血清SOD降低，外周组织脂膜蛋白代谢末端产物——TBARs升高，MDA/SOD比值增加，表明糖尿病大鼠抗氧化防御体系受抑制，自由基产生率超过清除率，氧化应激增加[10]。本研究表明，柿叶总黄酮可降低糖尿病小鼠脂质过氧化物(MDA)的生成，提高其抗氧化酶系统(SOD)的活力，有助于糖尿病小鼠抗氧化能力的提高，提示这可能是其降糖作用的机制之一。

　　【参考文献】

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