乳腺浸润性导管癌中ΔNp73的表达与预后的关系

作者：樊丹丹，邢鲁奇，杨晓鹤，陈登庭，王颖芳    作者单位：1.河南科技大学第一附属医院，河南洛阳 4710032.美国俄克拉荷马大学医学中心　3.河南科技大学医学院，河南洛阳 471003

【摘要】  目的 探讨乳腺浸润性导管癌组织中ΔNp73的表达与5年生存率、病理学分级和淋巴结转移等的关系。方法 选取临床病理资料完整并随访5年以上的83例乳腺浸润性导管癌病例, 采用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织中ΔNp73蛋白表达情况，用SPSS16.0软件统计分析ΔNp73表达对预后的影响。结果 ΔNp73蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率为67.5%，在生存期≤5年的患者中ΔNp73阳性表达率82.1%，在生存期＞5年的患者中阳性表达率60.0%；在淋巴结转移组中ΔNp73阳性表达率77.8%，在淋巴结无转移组中ΔNp73阳性表达率37.5%。结论 ΔNp73可能在乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移中起一定的促进作用，ΔNp73蛋白可作为预测乳腺浸润性导管癌预后的参考指标。

【关键词】  乳腺浸润性导管癌；ΔNp73；免疫组织化学；预后

Relationship Between Expression of ΔNp73 and Prognosis of Invasive Breast Duct Carcinoma

　　FAN Dandan,XING Luqi,YANG Xiaohe,et al

　　First Affiliated Hospital,Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003, China

    Abstract:Objective  This study is aimed at investigating the relationship between expression of ΔNp73 and prognosis of invasive breast duct carcinoma.   Methods  The ΔNp73 expressions of invasive breast duct cancer were determined by immunohistochemistry in 83 cases with complete clinical data and over five years of followup, so as to analyse the effect of the ΔNp73 expression on prognosis.   Results  The positive expression rates of ΔNp73 protein were 67.5% in breast cancer tissues. The positive expression rates of ΔNp73 were 89.1% in breast cancer patients with fiveyear or less survival time，and 27.6% in breast cancer patients with more than fiveyear survival time, respectively. The positive expression rates of ΔNp73 were 77.8% in patients with metastasis of lymph nodes, and were 37.5% in paitients without metastasis of lymph nodes, respectively.  Conclusion  The ΔNp73 could play a promotive role in invasive breast duct carcinoma with metastasis of lymph nodes.The expressions of ΔNp73 can be used as the predictor of prognosis in invasive breast duct cancer.

    Key words:invasive breast duct cancer；ΔNp73；immunohistochemistry；prognosis

　　p73基因是近年发现的新的肿瘤相关基因，因其基因、蛋白结构及功能与p53基因具有相似性，被认为是p53基因家族抑癌基因的新成员[1]。此基因定位于1p36.33，这个区域在乳腺癌、神经母细胞瘤时经常缺失。ΔNp73是p73基因最常见的表达产物之一，ΔNp73和乳腺浸润性导管癌5年生存率有无关联性，能否作为预测患者5年生存率的一项新指标，目前报道很少。

　　1  材料与方法

　　1.1  临床资料

　　随访河南科技大学第一附属医院1999～2003年收治的83例乳腺浸润性导管癌患者术后5年生存情况，其中生存期＞5年55例，生存期≤5年28例。由2名病理医师按WHO标准重新复核分级，其中高级别12例，中级别44例，低级别27例；均为女性，年龄28～83岁；其中有淋巴结转移27例，占37.5%。

　　1.2  主要试剂

　　ΔNp73美国CALBIOCHEM公司产品，由杨晓鹤教授惠赠。SP试剂盒为中国福州迈新公司产品。

　　1.3  方法

　　采用免疫组织化学SP法，切片常规脱蜡，梯度乙醇水化，抗原修复，双氧水去除非特异染色10 min，加入一抗，4℃冰箱过夜。滴加生物素标记二抗，室温孵育15 min。DAB显色。苏木素复染、脱色、封片、照相。阴性对照用PBS代替一抗。甲醛固定的石蜡组织块，连续4 μm 切片后行HE染色。

　　1.4  结果判定

　　阳性判断标准参照文献报道[2]，ΔNp73阳性细胞颗粒位于细胞浆，在显微镜下随机选5个高倍视野( 200×)，每个高倍视野随机选100个细胞计数阳性细胞，取其平均值。阳性细胞率≤10%记为阴性，阳性细胞率10%～25%记为弱阳性（+），25%～50%记为阳性（++），＞50%记为强阳性（+++）。

　　1.5  统计学分析

　　运用SPSS16.0统计软件进行2 检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

　　2  结果

　　2.1  ΔNp73的表达与病理指标及与5年生存率的关系

　　ΔNp73在乳腺浸润性导管癌中的表达率为67.5%。生存时间≤5 年的患者共28例，其中阳性23例，阳性表达率82.1%；生存时间＞5年患者共55例，其中阳性33例，阳性表达率60.0%，两者差异有统计学意义，2 =4.145，P=0.042。乳腺浸润性导管癌高级别组共12例，其中ΔNp73阳性10例，阳性表达率为83.2%；中级别组共44例，其中ΔNp73阳性27例，阳性表达率61.3%；在低级别组共27例，其中ΔNp73阳性19例，阳性表达率为70.4%，三者差异无统计学意义，2 =2.227，P=0.328。

　　2.2  ΔNp73的表达与淋巴结转移之间的关系

　　淋巴结转移组患者共27例，其中ΔNp73阳性21例，表达率77.8%；无淋巴结转移组患者共56例，其中ΔNp73阳性21例，阳性表达率为37.5%，两者差异有统计学意义，2 =11.823，P=0.001。

　　3  讨论

    1997年Kaghad[1]等利用对应于胰岛素信号中介体( IRS-1)结合区的简并寡聚核酸探针筛选Cos细胞cDNA文库时,偶然发现了一个假阳性克隆,其编码序列与p53基因的结构具有同源性,所以命名为p73，定位于人染色体1p36.33。p73基因有14个外显子及13个内含子，p73的表达产物可因羧基端或氨基端的选择性剪切而产生不同的亚型，现在已经确认的有9种(α、β、γ、δ、ε、ζ、η、η1、θ)均由于羧基端的选择性剪切造成，统称TA-p73，其中全长形式表达的只有α,近年来又发现了4种氨基端截短的异构体ΔNp73、ΔN’p73、p73Δexon2 和p73Δexon2 /3，统称ΔN-p73，也称ΔTAp73[3]。p73基因有两个启动子结构p1和p2，p1位于第1外显子的起始区，p2位于第3内含子的起始区, 产生N端截短（△N）的异构体（△NP-73变异体），缺乏TA区域，ΔNp73具有抑制p53和TA-p73的功能，从而抑制凋亡，与肿瘤的发生发展有关。ΔNp73在多数肿瘤组织中呈现出高表达，如乳腺癌、神经母细胞瘤、卵巢癌和肺癌等，表现出癌基因的作用，但在少数肿瘤组织中，如鼻腔鼻窦恶性肿瘤，与癌旁、非癌组织中的表达无统计学意义，可认为ΔNp73在此肿瘤的发生过程中可能不发挥作用[4，6，8]。

    本研究结果表明，ΔNP73在生存期＞5年的乳腺浸润性导管癌中阳性表达为60.0%，在生存期≤5年的阳性表达率为82.1%，两者之间存在显著性差异（P＜0.05），提示ΔNp73基因的阳性表达是一个影响患者预后的因子。ΔNP73在淋巴结转移的患者中阳性率为77.8%，在无淋巴结转移的患者中阳性率为37.5%，两者之间存在差异（P＜0.05〉，表明ΔNp73的过表达与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移相关，可以认为它在乳腺浸润性导管癌患者的淋巴结转移过程中起某种作用。但是通过哪些途径对淋巴结转移起作用，有待进一步研究。ΔNp73分级在低级别的乳腺浸润性导管癌中ΔNp73的阳性率为70.4%，在中、高级别的ΔNp73的阳性率分别为61.3%和83.2%，三者之间无统计学差异（P＞0.05），结果表明ΔNp73的表达与乳腺癌病理分级无关，可能不参与乳腺癌早期发生事件。ΔNp73可能在乳腺癌晚期事件中起着重要的作用，它的作用类似于癌基因，这一点与许多报道相符[2,3,5,7 ]。何勇[7]等发现ΔNp73 基因的高表达与肺癌患者术后的不良预后有关,提示ΔNp73 基因的表达水平可能是一个影响患者预后的独立因子,即它可能与非小细胞肺癌（NSCLC）的发生有关,或以某种形式参与了对NSCLC 进展和预后的调节。本研究结果提示ΔNp73在乳腺浸润性导管癌中所起的作用可能和非小细胞肺癌中所起的作用相似。

    ΔNp73作为癌基因的功能已经得到大量的实验证明。本实验表明ΔNp73在乳腺浸润性导管癌中阳性表达的患者预后较阴性表达的患者预后差，且ΔNp73的表达与淋巴结的转移之间密切相关。ΔNp73阳性表达的患者淋巴结多数有转移，淋巴结转移是公认的预后指标，推论ΔNp73可能在乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移过程中起一定作用，从而影响到病人的预后，但其作用机理还需进一步研究。   

【参考文献】
  　 [1] Kaghad M,Bonnet H,Yang A, et al. Mono allelically expressed generelated to p53 at 1p36, a region frequently deleted in neuroblastoma and other human cancers[J].Cell,1997,90(4):809-819.

　　[2] Uramoto H,Sugio K,Oyama T,et al.Expression of delta Np73 predicts poor prognosis in lung cancer[J].Clin Cancer Res, 2004,10(20):6905-6911.

　　[3] Domínguez G，Garcia JM，PenaC，et al.ΔTAp73 upregulation correlates with poor prognosis in human tumors: putative in vivo network involving p73 isoforms, p53, and E2F-1[J].J Clini Oncol,2006,2(24):805-815.

　　[4] 张云杰,李保庆,单保恩.ΔNp73与人类肿瘤[J].河北医科大学学报,2009,30(1):101-104.

　　[5] Bozzetti C，Nizzoli R，Musolino A，et al.p73 and p53 pathway in human breast cancers [J]. J Clin Oncol ,2006,25(11):1451-1453.

　　[6] 黄金智,李英勇.p73 在妇科肿瘤中的研究进展[J].医学综述,2007,7(13):1068-1070.

　　[7] 何勇,范士志,蒋耀光,等.ΔNp73基因在人非小细胞肺癌中的转录表达及其临床意义[J].中国肺癌杂志,2006,6(9):263-266.

　　[8] 张涛,贾海英,王继群,等.p53 、p63 、p73 在鼻腔鼻窦恶性肿瘤中表达的临床意义[J].临床耳鼻咽喉头颈外科杂志2008,10(22):919-921.