蜂胶黄酮对D半乳糖致衰老小鼠脑蛋白质、核酸代谢的影响

作者：张悦 袁丽杰 赵蕾    作者单位：哈尔滨医科大学大庆校区，黑龙江 大庆 163319

【摘要】  目的 探讨蜂胶黄酮对衰老模型小鼠学习记忆行为的影响及其作用机制。方法 采用同位素标记物体内掺入法观察蜂胶黄酮各组小鼠脑蛋白质及核酸代谢的变化。结果 蜂胶黄酮增加小鼠脑组织蛋白质、DNA和RNA含量。结论 蜂胶黄酮能明显增强小鼠学习记忆功能，其作用机制与其促进的蛋白质、核酸等生物大分子形成密切相关。

【关键词】  蜂胶黄酮 学习记忆能力 蛋白质 核酸代谢

      近年来研究发现蜂胶具有明显的抗癌、调节血糖、增强机体免疫功能、抗菌、抑制病毒等效应〔1〕，并可提高小鼠肝脏过氧化氢酶与超氧化物歧化酶的活性〔2〕。为进一步探讨蜂胶黄酮抗衰老作用机制,本研究通过同位素标记物掺入法观察蜂胶黄酮对衰老模型小鼠脑蛋白质及核酸代谢的影响，为蜂胶黄酮抗衰老的临床应用提供实验依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  药物及试剂

　　蜂胶黄酮由黑龙江中医药大学生化教研室提纯，并经黑龙江省中药研究所鉴定，稀释成黄酮含量为15 mg/ml使用。D半乳糖购于Sigma公司。3H胸腺嘧啶核苷（3HTdR）、3H尿嘧啶核苷（3HUR）和3H亮氨酸（3HLeu）均购于中国科学院上海原子核研究所。PPO（2、5二苯基恶唑）、POPOP（1，4双〔5苯基恶唑基2〕苯）为上海化学试剂一厂产品，闪烁纯。三氯醋酸、无水乙醇、乙醚、甲酸、二氧六环、萘均为分析纯。

　　1.2  仪器
 
　　液体闪烁计数仪，Beckman公司；D37520型高速冷冻离心机,德国HERAEUS公司；JY98Ⅲ型超声波细胞粉碎机,宁波科生仪器厂；跳台装置为蚌埠医学院无线电二厂。

　　1.3  方法

　　1.3.1  分组

　　昆明种健康小鼠，体重(25±2) g，雌雄各半，小白鼠常规喂养6 d，随机分为空白对照组、D半乳糖衰老模型和蜂胶黄酮组，每组10只，实验小鼠均由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。除空白对照组外, 衰老模型组和蜂胶黄酮组每天用D半乳糖150 mg/kg颈背部皮下注射连续30 d，空白对照组皮下注射等剂量生理盐水,自由进食进水；造模同时蜂胶黄酮组灌胃蜂胶黄酮300 mg/kg，空白对照组及衰老模型组灌服等量生理盐水，每天1次，连续给药30 d。衰老模型组连续给D半乳糖30 d后,小鼠行动迟缓,毛色灰暗,形体瘦弱,呈明显的衰老体征,证明衰老模型成功建立〔3〕。

　　1.3.2  蜂胶黄酮对3HLeu掺入小鼠脑组织蛋白质影响〔4〕

　　按照上述方法连续给药30 d。实验前12 h禁食，各组腹腔注射3HLeu 1.48×105 bq(4 μci)/10 g,4 h后断髓处死小鼠，迅速取出脑组织，用滤纸吸去血液，剪碎，用生理盐水制成50 mg/ml的组织匀浆。取0.5 ml组织匀浆置于10 ml试管中，加入10%三氯醋酸2 ml，沉淀离心，3 500 r/min，10 min，弃去上清液，将沉淀用5%三氯醋酸和1∶1醇醚混合物再各洗1次，弃去上清，向沉淀中加88%甲酸0.5 ml，置于90℃水浴中消化20 min，取0.1 ml消化液加入含4 ml闪烁液（PPO 3.0 g、POPOP 0.5 g、萘60 g，加二氧六环至500 ml，避光保存）的闪烁杯中，次日用液体闪烁计数仪测定样品放射性。

　　1.3.3  蜂胶黄酮对3HTdR、3HUR掺入小鼠脑组织DNA和RNA的影响〔5〕

　　动物分组、造模、给药等条件均与前相同，实验时分别于腹腔注射3HTdR、3HUR 1.45×105 bq(4 μci)/10 g,4 h后处死小鼠,以后步骤同蛋白质的测定。

　　1.4  统计学方法

　　数据以x±s表示，采用SPSS11.0 软件进行方差分析。

　　2  结  果

    空白对照组、蜂胶黄酮组3HLeu、3HTdR、3HUR的掺入量均明显高于衰老模型组（P＜0.01，P＜0.05），蜂胶黄酮组比衰老模型组提高了34.64%、55.34%、166.27%，表明蜂胶乙醇提取物有促进脑组织蛋白质、DNA、RNA生物合成的作用(表1)。表1  蜂胶黄酮对小鼠脑组织3HLeu、3HTdR、3HUR（略）

　　3  讨  论

    核酸是生物遗传的重要物质基础，它能贮存、复制和传递遗传信息，并控制着蛋白质的合成，而蛋白质与一切生命活动密切相关〔4，5〕。已有研究证明，伴随着衰老，体内组织核酸、蛋白质也发生变化，其合成一般随增龄而降低，组织中的含量下降〔1，6〕。因此，测定组织中的蛋白质及核酸的合成能力及其含量有助于从分子水平上判断衰老过程，了解衰老的内在变化情况，也是观察药物对衰老过程影响的重要指标。有关学习记忆的分子神经生物学机制研究证实:脑内蛋白质、RNA等大分子物质是大脑记忆功能的内在基础，记忆的巩固与脑内蛋白质、RNA等密切相关，通过细胞内部RNA和新的蛋白质合成，新获得的经验可长期贮存下去，故学习过程中新形成的蛋白质是记忆贮存的“分子”圈，因而临床上一些药物可通过促进脑组织蛋白质、核酸合成来改善学习记忆。本研究结果表明: 蜂胶黄酮能促进小鼠脑组织蛋白质和核酸的合成代谢，提示蜂胶黄酮促进新的蛋白质、DNA、RNA等生物大分子形成是其改善学习记忆功能的主要机制，也是其用于防治老年病、延缓衰老的内在基础。

【参考文献】
   　1 刘琳琳,周坤福.中医药延缓衰老分子机制研究进展〔J〕.江西中医药,2006；1(1):579.

　　2 齐 彦,郭丽新,于英君,等.蜂胶黄酮对小鼠肝脏CAT活性的影响〔J〕.中医药学报,1999；5:53.

　　3 龚国清，徐黻本.小鼠衰老模型的研究〔J〕.中国药科大学学报，1991；22（2）：1013.

　　4 王洪侠,高微微.抗衰老中药的研究进展〔J〕.中国中医药信息杂志,2005；12(1):1024.

　　5 韩明向,周宣轩,杨文明,等.寿星宝对脑组织核酸及蛋白质代谢的影响〔J〕.中国中医基础杂志,1999；5(1):34