反相高效液相色谱法测定朝鲜大黄中大黄酸的含量

　作者：吕惠子，朴光春，郑光浩    作者单位：延边大学药学院 生药学教研部，吉林 延吉 133000

　【摘要】  ［目的］测定朝鲜大黄中大黄酸的含量.［方法］采用反相高效液相色谱法，色谱柱为VPODS色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以1mL/L甲醇磷酸（85∶15）为流动相，流动速度为1.0mL/min，检测波长为254nm.［结果］大黄酸进样量在0.08～0.80μg范围内，其峰面积积分值与质量浓度之间呈良好的线性关系（r =0 .9998），平均回收率为99.58% (n=6)，RSD为 2.85%.药用大黄及朝鲜大黄中大黄酸含量分别为2.5628, 12.0888mg/g.［结论］反相高效液相色谱法测定朝鲜大黄中大黄酸含量的方法简便、准确，可用于朝鲜大黄中大黄酸含量的测定；朝鲜大黄中大黄酸含量高于药用大黄.

　【关键词】  色谱法,高压液相;大黄属;大黄酸

　Determination of rhein in Rheum coreanum Nakai by RPHPLC

    L Huizi, PIAO Guangchun， ZHENG Guanghao

    (Department of Pharmacognosy, Yanbian University College of Pharmacy, Yanji 133000, Jilin, China)

    ABSTRACT:OBJECTIVETo appraise the quality of Rheum coreanum Nakai.METHODSRPHPLC was carried out on VPODS column (4.6mm×150mm, 5μm) with methanol  (1mL/L) phosphotic acid （85∶15） as mobile phase. The flow rate was 1.0mL/min and  the UV detection was 254nm.RESULTSThe calibration curve was liner in the range of  0.08～0.80μg (r= 0 .9998). The average recovery was 99.58% (n=6) with the RSD of 2.85%. The content of rhein in Rheum officinale and R. coreananum was 2.5628,  12.0888mg/g.CONCLUSIONThe method appears to be simple, accurate, reproducible and can be used to determine the content of rhein in Rheum coreanum. The rhein content in Rheum coreanum is higher than that in Rh.officinale.

    Key words:chromatography, high pressure liquid;rheum;rhein

    中药大黄为蓼科植物掌叶大黄(Rheum  pdmatum L．)、唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim．Ex Balf. )或药用大黄(Rheum officinle Baill．)的干燥根及根茎[12].大黄为常用中药，具有泻热通肠、凉血解毒及逐瘀功效,大黄酸为其主要有效成分.朝鲜大黄（Rheum coreanum Nakai）主要分布在中国长白山及朝鲜等地,在中国药典里未见登载，亦未见将其作为大黄使用的文献报道，但日本药典将它记载为大黄的原植物，并认为品质优于中国药典中记载的3种大黄[3].本研究为了确定朝鲜大黄的品质,采用反相高效液相色谱法测定了朝鲜大黄中大黄酸的含量.

    1  实验部分

    1.1  仪器与试剂  采用日本岛津LC10AT高效液相色谱仪.朝鲜大黄购自朝鲜，由延边大学药学院刘永镇教授鉴定为朝鲜大黄；中药大黄购自吉林省延吉市中草药药房，为药用大黄的干燥根茎；大黄酸对照品由延边大学药学院药物化学教研部提供,为99mL/L；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯.

    1.2  方法与结果

    1.2.1  色谱条件  色谱柱为VPODS色谱柱(150mm×4 .6mm, 5μm) ，流动相为1mL/L甲醇磷酸（85∶15）；流动速度为1.0mL/min；检测波长为254nm[2].

    1.2.2  样品的制备  精密称取大黄酸对照品2.0mg，加入甲醇溶解定容至25mL，摇匀，即得对照品溶液.精密称取朝鲜大黄及药用大黄研磨(过4号筛)的粉末各0.3g，精密加入甲醇50mL，加热回流1h,滤过，精密量取滤液5mL,置于烧瓶中,挥去溶剂,加入80mL/L盐酸溶液10mL,超声处理2min,加入三氯甲烷10mL，回流提取,减压回收溶剂至干,向残渣加入甲醇使其溶解,定容至10mL,用0.45μL微孔滤膜过滤,滤液即为供试品溶液.

    1.2.3  线性关系考察  精密吸取大黄酸对照品溶液，加入甲醇制备成质量浓度为80mg /L的溶液，精密吸取1,2,4,6,8,10μL，分别进样注入到高效液相色谱仪中，按色谱条件进行测定，记录高峰面积.以大黄酸峰面积值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线(图1)，得回归方程为Y =1107477.68X +144.14, r=0 .9998.结果表明大黄酸进样量在0.08～0.80μg范围内，峰面积积分值与质量浓度之间呈良好的线性关系.

    图1  大黄酸标准曲线

    1.2.4  重现性试验  按照1.2.2项下方法制备朝鲜大黄及药用大黄供试品溶液各5份，按照1.2.1项下条件进行测定.朝鲜大黄中大黄酸质量分数分别为11.24,11.26,11.15,11.14,11.18mg/g，平均为11.19mg/g，RSD为0.46％, 提示本方法的重现性良好.

    1.2.5  稳定性试验  精密吸取供试品溶液，分别于第0,2,4,6,8h测定大黄酸峰面积值，结果示供试品溶液峰面积在8h内基本未见变化，RSD为0.01% (n=5)，提示供试品溶液在8h内稳定.

    1.2.6  精密度实验  取同一对照品溶液，重复进样5次，峰面积的RSD为1.13%,表明仪器精密度良好.

    1.2.7  样品含量测定  精密称取朝鲜大黄及药用大黄样品各0.3g，按照1.2.2项下方法制备溶液.精密吸取供试品溶液，进样10μL，用峰面积外表法测定含量，结果示药用大黄及朝鲜大黄样品中大黄酸平均质量分数分别为2.5628,12.0888mg/g.

    1.2.8  回收率试验  精密称取药用大黄0.15g,加入标准品0.22mg,混匀,共6份,按照1.2.7项下方法测定含量,计算平均回收率，结果见Table1.

    2  讨论

    本实验主要参照药典方法，探讨了朝鲜大黄中大黄酸含量的测定方法，结果表明本方法简便、准确，适用于朝鲜大黄中大黄酸的含量测定.比较测定朝鲜大黄和药用大黄中大黄酸含量，结果表明朝鲜大黄中大黄酸含量明显高于药用大黄.我国药典中大黄质量标准规定,按照干燥品计含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的总量不得低于15mg/g，但本实验仅对朝鲜大黄中大黄酸的含量进行测定，对其他几种成分的含量尚未进行研究.因此，朝鲜大黄的品质是否优于药用大黄，朝鲜大黄能否替代药物大黄等问题尚待进一步研究.

【参考文献】
［1］ 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：化学工业出版社，2005.17.

[2] 熊辉岩，张晓峰，王环，等.大黄属3种大黄植物不同部分蒽醌含量的测定与比较［J］.西北植物学报，2003，23（2）:328.

[3] Yang DY, Fushimi H, Cai SQ, et al..Molecular nanlysis of Rheum species used as Rhei Rhizoma based on the chloroplast matK gene sequence and its application for identification［J］.Biol Pharm Bull,2004,27(3):375.