银杏内酯Ｂ对谷氨酸诱导视网膜神经细胞凋亡的影响
| 银杏内酯Ｂ对谷氨酸诱导视网膜神经细胞凋亡的影响 |
|
|
|
作者：郭梦翔， 朱晓波， 罗 燕， 高 艺， 唐仕波 【摘要】 【目的】 探讨银杏内酯Ｂ拮抗谷氨酸诱导的体外培养新生大鼠视网膜神经细胞凋亡作用及其可能的机制。 【方法】 ＭＴＴ法检测不同浓度谷氨酸对原代培养ＳＤ大鼠视网膜神经细胞的兴奋性毒性作用。细胞分为正常组、谷氨酸组和不同浓度（１０、５０、１００ μｍｏｌ／Ｌ）银杏内酯Ｂ治疗组（ｎ ＝ ６）。ＭＴＴ法检测不同浓度的银杏内酯Ｂ对谷氨酸诱导凋亡的视网膜神经细胞存活率的影响。流式细胞仪结合Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ ＰＩ检测细胞凋亡率，ＪＣ-１染色检测线粒体膜电位。【结果】 １００ μｍｏｌ／Ｌ谷氨酸作用下，视网膜神经细胞的吸光度值降低至０．５０ ± ０．０７，凋亡率为５２．４％，ＪＣ-１的红／绿比值为１．７７。１０ ～ １００ μｍｏｌ／Ｌ银杏内酯Ｂ作用下神经细胞的吸光度值分别为０．５２ ± ０．０９、０．６４ ± ０．１５和０．７４ ± ０．１１，细胞的凋亡率分别下降至３６．７％，１２．４％和２．１％，ＪＣ-１的红／绿比值则分别上升为１．８９８、２．０８９、２．２７６（Ｐ ＜ ０．０５）。 【结论】 银杏内酯Ｂ可以拮抗谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡，其作用机制可能与提高线粒体膜机能有关。 【关键词】 视网膜神经细胞培养； 谷氨酸； 银杏内酯Ｂ； 凋亡 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ Ｂ ａｇａｉｎｓｔ Ｇｌｕｔａｍａｔｅ-ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｎ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｎｅｕｒｏｎｓ ＧＵＯ Ｍｅｎｇ-ｘｉａｎｇ， ＺＨＵ Ｘｉａｏ-ｂｏ， ＬＵＯ Ｙａｎ， ＧＡＯ Ｙｉ， ＴＡＮＧ Ｓｈｉ-ｂｏ （ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ∥Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃ Ｃｅｎｔｅｒ， ＳＵＮ Ｙａｔ-ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１００６０， Ｃｈｉｎａ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｎｔｉａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ Ｂ ａｇａｉｎｓｔ ｇｌｕｔａｍａｔｅ-ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔ ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ． 【Ｍｅｔｈｏｄ】 Ｔｈｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗａｓ ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＭＴＴ． Ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ６ ｇｒｏｕｐｓ： Ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ， Ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｇｒｏｕｐ， １０ μｍｏｌ／Ｌ ＧＢ-ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ， ５０ μｍｏｌ／Ｌ ＧＢ-ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ， ａｎｄ １００ μｍｏｌ／Ｌ ＧＢ-ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ （ｎ ＝ ６）． Ｎｅｕｒｏｎａｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｗａｓ ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＭＴＴ， ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ ＰＩ ａｎｄ ＪＣ-１ ａｓｓａｙ ｗｉｔｈ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ． 【Ｒｅｓｕｌｔ】 Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ １００ μｍｏｌ／Ｌ ｇｌｕｔａｍａｔｅ， ｔｈｅ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｏ ０．５０ ± ０．０７， ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｗａｓ ５２．４％ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｄ／ｇｒｅｅｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＪＣ-１ ｗａｓ １．７７． Ｃｏｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ Ｂ ｉｎ １０ μｍｏｌ／Ｌ ～ １００ μｍｏｌ／Ｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏｎａｌ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｒａｔｅ ｔｏ ０．５２ ± ０．０９， ０．６４ ± ０．１５， ａｎｄ ０．７４ ± ０．１１， ｗｈｉｌｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ ｔｏ ３６．７％，１２．４％， ａｎｄ ２．１％ ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｈｅ ｒｅｄ／ｇｒｅｅｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＪＣ-１ ａｓｓａｙ ｔｏ １．８９８， ２．０８９， ａｎｄ ２．２７６ （Ｐ ＜ ０．０５）． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】 Ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｃａｎ ｂｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ Ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ Ｂ． Ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｒｅｔｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｇｌｕｔａｍａｔｅ； ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ Ｂ； ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ［Ｊ ＳＵＮ Ｙａｔ-ｓｅｎ Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ Ｓｃｉ），２００８，２９（６）：６９０－６９４］ 视网膜神经细胞，特别是光感受器细胞凋亡是视网膜变性性疾病的共同病理通路［１－２］。Ｃｌａｒｋｅ等认为在视网膜变性疾病中感光细胞变性可能与谷氨酸等兴奋性氨基酸在局部积聚有关［３］。银杏内酯Ｂ（ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ Ｂ， ＧＢ）是银杏叶提取物中的主要药效成分，是目前已知最强的天然特异性血小板活化因子（Ｐｌａｔｅｌｅｔ-ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）拮抗剂，体外实验证实，银杏内酯Ｂ可以拮抗谷氨酸诱导的培养脑皮质神经细胞凋亡［４－５］。在本研究中，我们建立谷氨酸诱导的原代培养的大鼠视网膜神经细胞凋亡模型，观察银杏内酯Ｂ对视网膜神经细胞的保护作用，并进一步探讨可能的作用机制，以期为视网膜变性疾病的治疗提供新的途径。 １ 材料与方法 １．１ 实验动物 出生后７ ～ ８ ｄ的ＳＤ乳鼠，雌雄不拘，由中山大学实验动物中心提供，粤监证字２００６Ａ０６４。 １．２ 主要试剂和仪器 兔抗神经原特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）多克隆抗体、兔抗胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）多克隆抗体、ＳＡＢＣ-ＦＩＴＣ和ＳＡＢＣ-ＣＹ３免疫组织化学试剂盒均购自武汉博士德公司；小鼠抗视紫红质单克隆抗体（Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ，美国ＮｅｏＭａｒｋｅｒｓ）； ＡｎｎｅｘｉｎⅤ／ＰＩ检测试剂盒（深圳晶美），ＪＣ-１荧光探针（美国 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ），银杏内酯Ｂ（含量≥９８％）（南京海陵中药制品公司）。流式细胞仪（美国Ｂｅｃｋｍａｎ-Ｃｏｕｌｔｅｒ），酶标仪（美国ｓｉｇｍａ）。 １．３ 方 法 １．３．１ 视网膜神经细胞的培养和鉴定 按文献［６］报道方法培养新生ＳＤ大鼠视网膜神经细胞。细胞培养７ ｄ后，以ＮＳＥ、Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ 和ＧＦＡＰ为一抗，相应的荧光抗体为二抗，免疫荧光双染对培养细胞进行鉴定。阴性对照采用ＰＢＳ代替一抗。 １．３．２ 噻甲唑兰（ＭＴＴ）法检测不同浓度谷氨酸对视网膜神经细胞存活率的影响 调整视网膜神经细胞的浓度为１×１０５／ｍＬ，每孔２００ μＬ接种于多聚赖氨酸提前包被的９６孔板内，在３７℃、５％ＣＯ２的培养箱内培养，至第７天随机分为３大组：正常对照组、１００ μｍｏｌ／Ｌ谷氨酸组和１ ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酸组，其中后两组分别按照谷氨酸干预后３０ ｍｉｎ、１ ｈ、２ ｈ、８ ｈ和１２ ｈ分为５小组，每组设５个复孔，同时设定空白对照孔。在不同时间点终止干预，按ＭＴＴ法常规操作，测定并记录各孔在４９０ ｎｍ的吸光度值（Ａ）。细胞存活率（％） ＝ 各组测定的吸光度值／正常对照组吸光度值 × １００％。 １．３．３ ＭＴＴ法测定ＧＢ对视网膜神经细胞存活率的影响 实验共分为５组。神经细胞接种后７ ｄ分组：Ａ组（正常对照组）及Ｂ组（谷氨酸模型组）分别给予正常培养液及１００ μｍｏｌ／Ｌ谷氨酸干预１２ ｈ，ＰＢＳ洗两次后换用新鲜培养液继续培养１２ ｈ；Ｃ ～ Ｅ组（ＧＢ治疗组）：培养第６天分别加入浓度为１０、５０和１００ μｍｏｌ／Ｌ的ＧＢ培养２４ ｈ，再加入１００ μｍｏｌ／Ｌ 谷氨酸干预１２ ｈ后终止干预，ＰＢＳ洗两次后换用新鲜培养液继续培养１２ ｈ。ＭＴＴ法测定各组吸光度值，计算细胞存活率。 １．３．４ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ细胞凋亡检测 按方法１．３．３项下分组干预细胞，终止干预后，ＰＢＳ洗细胞两次，加入稀释的结合缓冲液２００ μＬ重悬细胞；加入３ μＬ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＦＩＴＣ混匀，室温避光１０ ｍｉｎ；继续加入２ μＬ ＰＩ，混匀，室温避光５ ｍｉｎ；补充结合缓冲液３００ μＬ混匀，流式细胞仪检测。 １．３．５ 流式细胞仪检测线粒体膜电位变化 按方法１．３．３项下分组干预细胞，终止干预后，ＰＢＳ 洗细胞两次。以无酚红ＤＭＥＭ 培养液配置浓度为０．２ μＬ／ｍＬ 的ＪＣ-１ 染液，每管细胞沉淀加入５００ μＬ吹打混匀，３７ ℃ 避光孵育３０ ｍｉｎ。３００ × ｇ离心５ ｍｉｎ，弃上清，５００ μＬ ＰＢＳ 重悬细胞，流式细胞仪检测。 １．３．６ 统计方法 采用ＳＰＳＳ１２．０软件包中的单因素方差分析法（ＡＮＯＶＡ）对数据进行分析，结果以平均数 ± 标准差（ｘ ± ｓ）表示。以Ｐ ＜ ０．０５表示差别具有显著性意义。 ２ 结 果 ２．１ 细胞形态及免疫荧光双染细胞鉴定 接种２４ ｈ，绝大多数细胞贴壁，或三五聚集成团，或散在生长。部分活性较好的细胞伸出短小突起（图１Ａ）。随着时间延长，细胞突起延长，接种后７ ｈ神经细胞突起之间相互交织成网状，部分细胞胞体伸展成不规则形、梭形，胞体饱满，立体感强，边界清楚（图１Ｂ）。此后神经胶质细胞逐渐爬出，位于神经细胞的下方，色泽较灰暗，呈不规则片状，培养后２０ ｄ绝大多数细胞为神经胶质细胞。免疫荧光双染显示培养后第７天，绝大多数细胞ＮＳＥ阳性（图１Ｃ）。Ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ阳性的细胞约占半数（图１Ｄ）。 ２．２ 谷氨酸对体外培养视网膜神经细胞的兴奋性毒性 正常对照组的Ａ值为０．９７ ± ０．２３；１２ ｈ高浓度谷氨酸组的Ａ值为０．４８ ± ０．１３，低浓度组为０．５３ ± ０．２１。其余各时间点的Ａ值详见表１；经统计分析，从给予谷氨酸后２ ｈ开始，两个谷氨酸组的Ａ值与正常对照组相比差异都有显著意义。 ２．３ ＭＴＴ法测定ＧＢ对视网膜神经细胞存活率的影响 正常对照组Ａ值为０．８５ ± ０．０３，１００ μｍｏｌ／Ｌ谷氨酸（Ｂ组）作用１２ ｈ后Ａ值明显下降到０．５０ ± ０．０７（Ｐ≤０．０５），与Ａ组（正常对照组）相比神经细胞存活率降低到５７．４％。预先给予不同浓度的ＧＢ（Ｃ－Ｅ组）后视网膜神经细胞的Ａ值分别为０．５２ ± ０．０９、０．６４ ± ０．１５和０．７４ ± ０．１１。各组的Ａ值变化趋势见图２。 ２．４ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ＰＩ 细胞凋亡检测 正常对照组神经细胞凋亡率为５．５％；谷氨酸组凋亡率达到５２．４％；１０、５０和１００ μｍｏｌ／Ｌ 的ＧＢ组的凋亡率分别为３６．７％，１２．４％和２．１％（图３）。 ２．５ 流式细胞仪检测线粒体膜电位变化 各组细胞经ＪＣ-１染色后，通过流式细胞仪检测红色荧光和绿色荧光平均荧光强度的变化（红／绿），从而间接反映线粒体膜电位的变化。谷氨酸诱导后，神经细胞红／绿比值为１．７７，显著低于正常对照组；预先给予１０ ～ １００ μｍｏｌ／Ｌ ＧＢ后红／绿比值逐渐增加，见图４。 ３ 讨 论 研究表明谷氨酸兴奋性毒性作用与青光眼和糖尿病性视网膜病变等的发病机制息息相关［７－９］。Ｃｌａｒｋｅ等认为在视网膜变性疾病中感光细胞变性可能是与谷氨酸等兴奋性氨基酸在局部积聚有关［３］。这一假说也在视网膜变性模型ｒｄ１小鼠中得到证明，应用谷氨酸受体拮抗剂ＣＮＱＸ可以抑制ｒｄ１小鼠视杆细胞的凋亡［１０］。由此可见，谷氨酸兴奋性毒性作用与视网膜变性的发病密切相关。 关于谷氨酸诱导凋亡的浓度，目前没有统一的标准。我们采用ＭＴＴ法观察文献常用的两种浓度１００ μｍｏｌ／Ｌ和１ ｍｍｏｌ／Ｌ在不同作用时间下对体外培养的大鼠视网膜神经细胞的影响，以建立合适的视网膜神经细胞凋亡模型。结果发现，１００ μｍｏｌ／Ｌ和１ ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酸作用下，随时间延长培养的视网膜神经细胞存活率逐渐降低，但是前者的下降趋势与１ ｍｍｏｌ／Ｌ组相比更加缓和，到１２ ｈ还有约５４％的细胞存活。由于我们的实验目的是观察银杏内酯Ｂ对谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡的保护作用，药物有一定的起效时间，所以我们认为选择更加缓和的致凋亡作用比较合适。 到目前为止，导致光感受器细胞凋亡的机制尚不十分明确。大量的研究表明，线粒体在调控细胞凋亡中起关键作用［１１－１２］：线粒体膜通透性的改变是多种促细胞凋亡级联转导信号的枢纽，线粒体跨膜电位Δψｍ的破坏，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、ＤＮＡ 断裂）出现之前，一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。 本实验中ＭＴＴ和Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／ ＰＩ的结果均显示，１００ μｍｏｌ／Ｌ的谷氨酸可以导致视网膜神经细胞存活率降低，凋亡率增加；预先给予不同浓度的银杏内酯Ｂ可以拮抗谷氨酸的致凋亡作用，在１０ ～ １００ μｍｏｌ／Ｌ范围内该作用具有剂量依赖性；ＪＣ-１的结果表明ＧＢ抑制谷氨酸的致凋亡作用可能是通过提高线粒体跨膜电位，从而阻断下游的凋亡级联反应，抑制凋亡相关因子的释放而实现的。 【参考文献】 Ｍａｕｂａｒｅｔ Ｃ， Ｈａｍｅｌ Ｃ． Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ： ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ／ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］． Ｊ Ｆｒ Ｏｐｈｔａｌｍｏｌ， ２００５，２８（１）：７１－９２． Ｃｌａｒｋｅ Ｇ， Ｃｏｌｌｉｎｓ ＲＡ， Ｌｅａｖｉｔｔ ＢＲ， ｅｔ ａｌ． Ａ ｏｎｅ-ｈｉｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ， ２０００，４０６（６７９２）：１９５－１９９． Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒａｎ Ｋ， Ｍｅｈｒａｂｉａｎ Ｚ， Ｓｐｉｎｎｅｗｙｎ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｂｉｌｏｂａｌｉｄｅ， ａ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｉｎｋｇｏ ｂｉｌｏｂａ ｅｘｔｒａｃｔ （ＥＧｂ７６１） ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｇｌｏｂａｌ ｂｒａｉｎ ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｄ ｉｎ ｇｌｕｔａｍａｔｅ-ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ［Ｊ］． Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ （Ｎｏｉｓｙ-ｌｅｇｒａｎｄ）， ２００２，４８（６）：６６３ －６６９． 蔡卫斌， 臧 颖， 余明华． 银杏内酯Ｂ对谷氨酸诱导大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的影响［Ｊ］． 中山大学学报：医学科学版，２００３，２４（３）：２５６－２６０． 孟 晶，唐仕波，林少芬，等． 银杏内酯Ｂ对体外培养的大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响［Ｊ］． 中国病理生理杂志，２００６，２２（２）：７９１－７９５． Ｋｕｅｈｎ ＭＨ， Ｆｉｎｇｅｒｔ ＪＨ， Ｋｗｏｎ ＹＨ． Ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｇｌａｕｃｏｍａ： ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ［Ｊ］． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ， ２００５，１８（３）：３８３－３９５． Ｇｕｏ Ｌ， Ｓａｌｔ ＴＥ， Ｍａａｓｓ Ａ． Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｎ ｇｌａｕｃｏｍａ-ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｖｉｖｏ［Ｊ］． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ， ２００６，４７（２）：６２６－６３３． Ｎｇ ＹＫ， Ｚｅｎｇ ＸＸ， Ｚｉｎｇ ＥＡ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｃａｌｃｉｕｍ-ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｔｉｎａ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ-ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ［Ｊ］． Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ， ２００４，１０１８（１）：６６－７２． Ｍａｒｉｅ Ｎｏｅｌｌｅ Ｄ， Ｖａｌéｒｉｅ Ｆ， Ｎａｔｈａｌｉｅ Ｎ， ｅｔ ａｌ． Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｇｌｕｔａｍａｔｅ-ｍｅｄｉａｔｅｄ ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｄｕｒｉｎｇ ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒｄ１ ｍｏｕｓｅ ｒｅｔｉｎａ［Ｊ］． Ｍｏｌ Ｖｉｓ， ２００５，１１（１）：６８８－６９６． Ｋａｌｌｏｎｉａｔｉｓ Ｍ， Ｔｏｍｉｓｉｃｈ Ｇ． Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｒｅｔｉｎａ［Ｊ］． Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ， １９９９， １８（６）：８１１－８６６． 彭心昭，陈 英，朴英杰． 线粒体通透性与细胞自噬、凋亡的关系［Ｊ］．解剖学研究，１９９９，２１（２）：１２８－１３０，１３８． |