平衡消肿灌洗液对关节软骨影响的研究与分析

【摘要】  　　方针 不雅观察廉价平衡消肿灌洗液对兔活体膝关头关头灌注贯注后关头关头软骨的影响，为关头关头镜手术供给更理想的灌洗液。体例 选用健康兔24只（48膝），随机将其分为平衡消肿灌洗液组，透明质酸钠组，林格氏液组。并于灌注贯注后、第1、2、5周末进行关头关头软骨形态学不雅观察及机关学搜检。 功效 灌注贯注后5周，平衡消肿灌洗液灌注贯注组关头关头软骨的形态学、机关学完全正常，软骨卵白多糖含量高于2个斗劲组。 结论 平衡消肿灌洗液可维持甚至前进软骨的卵白多糖含量，对关头关头软骨有更为较着的呵护、营养浸染，促进软骨恢复，对关头关头的影响小，是关头关头镜手术较为理想的灌洗液。

【关头词】  关头关头软骨 灌洗 机关学

　　【Abstract】  Objective  To study the effects of balance antioncoti lavage fluids on rabbit articular cartilage, and offer better lavage fluids for arthroscopy operations. Methods  The knee joints of 24 rabbits(48 knee joints) were chosen and randomly divided into balance antioncoti lavage fluids group, sodium hyaluronate group, and Ringger's solution group and blank group. Morphological and histological change of articular cartilage at after perfusion,1,2 and 5weeks were observed. Results  Morphological and histological change of articular cartilage of balance antioncoti lavage fluids group was normal at 5 weeks after perfusion. The content of proteoglycan was better than other two control groups morphologically. Conclusions  Balance antioncoti lavage fluids can keep or increase the content of proteoglycan,it can protect and nutrite articular cartilage better than other lavage fluids,facilitate articular cartilage recovery to normal,decrease the influence of articular cartilage. Balance antioncoti lavage fluids are better than other lavage fluids for arthroscopy operations.

　　【key words】  Articular cartilage  Lavage  Histology   
　　跟着关头关头镜手艺的发展与成熟，关头关头内灌洗液的应用日趋增多，现在临床上应用的关头关头灌洗液种类颇多，如林格氏液、心理盐水、5%甘露醇等，可是，这些灌洗液会导致关头关头软骨的破损，如软骨形态转变、卵白多糖的丢失踪等，关头关头软骨一旦发生损伤，常难以遏止且渐渐恶化，最终导致骨关头关头炎，作者自2007年4至10月廉价平衡消肿灌洗液，经由过程实施对兔活体膝关头关头灌注贯注，研究其对关头关头软骨的影响，以期获得理想功效，应用于临床，前进关头关头镜手术疗效。

　　1  质料与体例

　　1.1  执行动物及分组

　　选用4个月月龄健康兔24只，雄、雌各12只，体重平均2.3kg摆布(浙江中医药年夜学执行动物中心供给)。随机分为3组，实施组(A组)：平衡消肿灌洗液灌注贯注组，斗劲组1(B组)：透明质酸钠稀释液灌注贯注组，斗劲组2(C组)：林格氏液灌注贯注组。

　　1.2  实施药物

　　(1)将临床疗效较着的补肝益肾、活血通络、利水消肿的廉价中药验方，白芍20g、牛膝30g、羌活20g、茯苓20g、薏苡仁30g、五加皮10g、牡蛎30g，用酒精萃取提纯，将其按1：6：5：0.2：0.1的比例与林格氏液、20％甘露醇、50％硫酸镁、透明质酸钠搅浑，测定pH值并调至7.20，灭菌备用。(2)将透明质酸钠放置于心理盐水中稀释为2%。(3)通俗林格氏液。

　　1.3  动物造模

　　操纵静脉复合麻醉法对兔施行全身麻醉。麻醉后，将兔平稳于手术台上，双膝伸直位。通例剃毛、消毒、铺巾。操纵9号静脉穿刺针，于髌骨两侧进针，外侧为输入通道，内侧为流出通道。按分组后用分歧药物灌注贯注，灌注贯注时刻根据关头关头镜手术平均时刻，灌注贯注2h，平均每膝灌注贯注约为500ml。灌注贯注完毕，每只实施兔肌注20万U青霉素，提防感染。灌注贯注2h，并于灌注贯注后第1、2、5周末分4次取材。

　　1.4  不雅观察指标

　　标本取材后，一部门平稳于10％中性福尔马林溶液中，经10％甲酸脱钙、脱水、浸蜡包埋、做5μ厚蜡片，做HE及甲苯胺蓝染色。置光镜下不雅观察软骨的机关形态学转变。另一部门专心理盐水快速冲净，滤纸吸干水分、剪碎，分袂装于小瓶中。按每100mg软骨、1ml 4M盐酸胍的比例，提取卵白多糖［1］。将提取液置于4℃冰箱中，进行搅拌提取72h，然后离心10min，取上清液用考马氏亮蓝卵白定量检测法行卵白多糖定量剖析。

　　1.5  机关形态学评分

　　参照O’Driscoll，Keeley and Salter机关形态学评分标准［１］，对A组和斗劲组软骨机关形态学进行半定量评分。

　　1.6  统计学体例

　　操纵SPSS 11.5统计软件进行数据统计处置。各组数据接纳(x±s)浮现,较着性磨练接纳单身分方差剖析进行统计,并进行组间两两斗劲。Ｐ<0.05为较着性差别。

　　2  功效

　　2.1  关头关头软骨的概略不雅观察

　　全数兔膝关头关头均无感染、无积液。关头关头软骨呈乳白色或淡蓝色，概况未见很是转变，关头关头液清亮。

　　2.2  ＨＥ染色

　　A组：第2周,本组切片示关头关头软骨概况较平展,但软骨层较正常为薄，软骨细胞接近正常成熟细胞，数目多。第5周本组的关头关头软骨各层软骨细胞排列与基质的漫衍有必定例律，表层细胞呈梭形，简陋水中排列，中心细胞卵形，散在漫衍，深层软骨细胞柱状排列（图1）。B组：软骨细胞接近正常成熟细胞，数目多，但排列稍杂乱，个体软骨细胞坏弃世（图2）。C组：软骨细胞数目少，软骨细胞排列杂乱，部门软骨细胞坏弃世（图3）。
                       
　　2.3  电镜搜检  　　　　　　　　　　　　

　　A组：高倍电镜浮现本组的软骨细胞细胞核增年夜,核内常染色体增多。细胞质内可见粗面内质网排列齐截、慎密,膜概况附有年夜量的核糖体颗粒。胞质内细胞器数目增添(图4)。软骨细胞四周的外基质中可见胶原纤维成束状慎密排列,可见到周期性横纹(图5)。与正常软骨接近,出现出平均的异染性着色,软骨深层染色浓,细胞形态年夜。B组：高倍镜下软骨细胞细胞质内粗面内质网排列不齐,软骨细胞四周的外基质中可见胶原纤维成束状排列，但较奇异慎密。C组：高倍镜下软骨细胞胞质内粗面内质网数目少,排列较奇异,高尔基体数目也淘汰。细胞核较斗劲组较着小。细胞四周胶原纤维排列杂乱,奇异。
                                                    
　　2.4  卵白多糖测定

　　以正常兔膝关头关头软骨中卵白多糖定量测定功效为标准，A组、B组、C组灌洗后与之对比。灌注贯注后马上，A组接近标准，B组、C组较着低于标准，C组最低。灌注贯注后第1周末，A组测定功效略高于标准，B组、C组恢复不较着。灌注贯注后第2周末，A组测定功效较着高于标准，B组低于标准，C组仍较着低于标准。灌注贯注后第5周末，A组维持较高水平，B组恢复正常，C组接近标准。

　　2.5  软骨的机关形态学评分及统计剖析

　　本不雅观察依据参照O’Driscoll，Keeley and Salter机关形态学评分标准［２］。对A组和斗劲组软骨机关形态学进行半定量评分，见表１。表1  灌注贯注后软骨机关形态学分值(略)注：灌注贯注后分歧时代软骨机关形态学评分，A组与B组、C组斗劲，Ｐ<0.05，A组优于B组、C组

　　3  谈判
    　　
　　本实施以正常兔膝关头关头软骨机关形态学、机关化学为标准，接纳3种分歧关头关头灌洗液对兔活体膝关头关头灌注贯注，并于灌注贯注后分歧时刻取材，动态不雅观察灌洗液对关头关头软骨的影响。剖析分歧阶段实施功效，作者发现3种关头关头灌洗液灌注贯注后马上会对兔活体膝关头关头发生分歧水平的损伤，出现软骨层变薄，软骨细胞排列杂乱、坏弃世，但跟着时刻推移，各组所见软骨结构又呈渐渐恢复趋向，各组间斗劲发现平衡消肿灌洗液组损伤水平最小，恢复速度最快，恢复时刻最短，恢复功效最理想。所以，经由过程实施证实关头关头灌洗对软骨的影响是一过性和可逆转，软骨亦有自我修复本事，不会发生骨性关头关头炎，从微不美观上证了然关头关头镜手术的可行性，也给作者临床在关头关头镜术后分歧的时刻有针对性的提防、分歧体例的康复练习和治疗供给了理论指导。同时可见，平衡消肿灌洗液平安、有用，对软骨的形态影响小，最年夜水平地维持了软骨的正常形态，有利于关头关头功效的恢复，可淘汰关头关头镜手术后的合并症，缩短术后恢复时刻。
  
　　平衡消肿灌洗液可以有用维持卵白多糖含量，提防其丢失踪，且从第1周起头含量跨越正常量，这种情形作者考虑在特有中药刺激及代偿性合成浸染下，与软骨细胞渗出增添有关。别的，因软骨卵白多糖的含量高，故平衡消肿灌洗液组软骨机关形态学转变小、恢复快。
    　　
　　对平衡消肿灌洗液疗效，作者剖析觉得，廉价的复方制剂中白芍、牛膝、羌活、茯苓、薏苡仁能前进机体免疫功效，激活巨噬细胞对细菌的吞噬浸染，扩张血管，改良轮回，促进炎性病变吸收，从而起到抗炎、镇痛、消肿的方针；五加皮具有扫除氧自由基、改良微轮回的浸染；牡蛎中所含的钙离子能降低毛细血管通透性，使血液凝固性增强，起到缓解滑膜炎性出血浸染，其含可溶性硅元素是软骨基质的主要身分粘多糖的必需元素，可促进关头关头软骨修复；林格氏液可调剂关头关头液的酸碱度及渗透压，改良关头关头秘闻况，减轻炎性反映；20%甘露醇可淘汰对卵白多糖的外溢，提防卵白多糖丢失踪；硫酸镁具有消肿利水浸染；透明质酸钠是关头关头液中以及软骨基质内的严重身分。瞿钢等觉得［5］透明质酸钠对缓解关头关头痛苦悲痛和关头关头功效的早期恢复具有较着疗效，因其可扫除自由基，调剂白细胞趋化性和巨噬浸染，禁止炎症反映，禁止血管和机关的增生，对流变学情形、流体情形、化学情形均有严重浸染，可营养、呵护软骨，固化细胞膜，禁止感受器的敏感性，减轻痛苦悲痛，缓解症状。
 

【参考文献】
  　　1 Hui A,Kulkami GV,Hunter WL,et al.Paclitaxel selectively induces mitotic arrest and apoptosis in prolife rating bovine synoviocytes.Arthritis Rheum,1997,40:1073～1084.

　　2 O’Driscoll SW.Thechondrogenic potential of treeautogemous periosteal graftsfor biological resurfacing in gofmajorfull thickness defects in jiont surfaces under the influence of continous passive motion.Anex perimental in vestigation in the rabbit.J Bone Joiont Surg Am，1986，68(7):1017.

　　3 邱平，于长隆.关节灌洗液对关节软骨影响的实验研究.中国运动医学杂志，1998，3（17）：234～237.

　　4 朱蕾.白芍总苷对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞的作用及机制.药学学报，2006，41（2）：166～170.

　　5 瞿钢，石仕元. 透明质酸钠在关节镜下半月板成形术后的应用.浙江临床医学，2002，4（8）：611～612.