小研黄芩不同用法的合理性比较

　　1 引言
　　中药汤剂，又称汤液，是我国应用最早最广泛的一种药物剂型，自伊尹创制汤剂以来，已有数千年的历史，其发展经历了“父咀”、“煮散”、“饮片”等过程，能适应中医辨证施治需要，随症加减处方，因而可以依据个体特点灵活用药，是中医特色的集中体现。在中国，汤剂的应用仍是中医用药的主要形式，目前中医临床处方约一半为汤剂[1]，而在西方国家，传统中药的临床应用多以粉末冲调服用的形式为主。近年来，中药和天然药物越来越受到西方人欢迎，在国外估计有两万种天然药物，其中有很多是中药[2]，东西方人用药习惯的差异，限制了中药汤剂在西方的应用，其主要原因在于：1、制备方法费时、费力；2、煎煮时产生的浓重气味，导致一些副作用，如恶心、头晕；3、饮片用量大，成本高；4、动物类药等外观无法接受，患者依从性差；5、储存需要大量空间；6 在煎煮过程中有些成分极易损失，而且在丢弃的残渣里有大量的成分没有提出[3][4]。针对这一问题，本实验选用临床常用的中药黄芩为代表，比较不同用法对中药有效成分溶出的影响，并通过正交试验考察粉末用药的影响因素，提出用粉末配方入药的合理使用方法，不仅保证汤剂疗效确切，且适应现代人快节奏的生活方式，达到节约药材、降低成本，使用方便的目的，为中药饮片和汤剂的临床应用方法提供参考。
　　2 仪器、试药与样品
　　2.1 仪器
　　HP-1100 高效液相色谱仪（HP-1100 系列二级泵，二极管阵列检测器，HP Chemstation工作站，美国惠普公司）；BP211D 分析天平(Sartorius 公司)；JJ500 型电子天平 (江苏常熟市双杰测试仪器厂)；AS10200 超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；AK-400A 200g摇摆式中药粉碎机 (温岭市奥力中药机械有限公司)；XFB-400B 500g 小型中药粉碎机 (吉首市中诚制药机械厂)；BFM-6 微粉机(济南倍力粉技术工程有限公司)。
　　2.2 试药与样品
　　甲醇（色谱纯），重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。黄芩苷（批号：110715-200514）标准品由中国药品生物制品鉴定所提供。黄芩饮片1（购于同仁堂药店），黄芩饮片2（厂家：四川新荷花中药饮片有限公司，产地：山西，批号：0801087)
　　3 方法与结果
　　3.1 黄芩苷含量测定方法
　　3.1.1 色谱
　　条件色谱柱：Diamonsil ODS—C18(4.6 mm×150 mm，5.0μm，依利特公司)；流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(42:58)；流速：1 mL／min；柱温：25℃；紫外检测波长：280 nm；理论板数以黄芩苷不低于2500，分别按照以上的色谱条件测定对照品和样品，色谱图见图1[5]。
　　3.1.2 线性关系的考查
　　分别精密称取黄芩苷（3.41mｇ）对照品，置25ml 量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，得对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液1μl、2μl、5μl、8μl、10μl、15μl 注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件测定峰面积。以色谱峰面积为纵坐标（Y），以黄芩苷的量为横坐标（X），进行线性回归。结果表明：黄芩苷在0.1364~2.0460μg 范围内线性关系良好，回归方程是Y=2468.43108x+2.18878，r=0.99993。
　　3.2 黄芩不同制备方法考察
　　黄芩药粉的制备：取黄芩饮片（同仁堂）50g，于60℃烘箱中干燥1 小时，取出，置干燥器中放冷，全部粉碎过四号筛，即得。
　　样品的制备：采用不同制备方法，称取黄芩饮片和粉末（同仁堂），按表1 进行操作，立即精密量取2ml，加甲醇定容至25ml，混匀，滤过，精密吸取10μl 按上述色谱条件注入高效液相色谱仪，测定黄芩苷的含量，计算溶出率，结果见表1。
　　溶出率的计算：参考2005 版《中国药典》黄芩项下含量测定方法测定黄芩饮片中黄芩苷的含量，作为100%溶出量来计算各样品的溶出率。
　　结果表明，黄芩饮片粉碎成粉末后直接加开水冲服黄芩苷含量比传统饮片煎煮低40%，而冷水分散后再加开水冲服没有测出黄芩苷含量。
　　根据西方用药习惯，中药粉末冲调一般是先用少量冷水分散（或水磨），再用沸水冲调后放冷服用，药粉用量约为2-5g，加水量约为200-300ml（类似于速溶咖啡的冲调）[4-5]，由于中药或天然药物成分复杂，用冷水分散及受热时间过短，可能影响药物成分的溶出，故将药粉用量及加水量调整为习惯用量，进行短时间煎煮，比较成分溶出的效果。
　　样品的制备：称取黄芩粉末（同仁堂），按表2 进行操作，样品制备方法同上，结果见。
　　3.3 正交实验优化提取工艺
　　3.3.1 正交实验设计
　　依据上述实验，考虑影响黄芩有效成分溶出的主要影响因素是煎煮时间、粉碎粒度和加水量，故选择L9（34）正交表进行正交实验，以黄芩苷的含量为评价指标，正交设计因素水平。
　　3.3.2 正交实验结果
　　取不同粒径的黄芩粉末（新荷花公司）5g，加少量冷水13ml 分散，后加相应体积的沸水搅拌，搅拌均匀后，加热煮沸，沸腾后计时，分别按相应时间煎煮。放置15min 后，加水洗涤定容至500ml。立即精密量取2ml，加甲醇定容至25ml，混匀，滤过，精密吸取10μl按上述色谱条件注入高效液相色谱仪，测定黄芩苷的含量。将测定结果作为评价指标进行正交分析，结果见。
　　由实验结果的直观分析及方差分析可知，影响提取效果的因素顺序为：B(粉碎粒度)>C(加水量) >A(煎煮时间)，B(粉碎粒度)对提取效果有显著影响（P<0.05）,次要因素A（煎煮时间）和C（加水量）对提取效果无显著影响，故优选制备方法为A1B1C1，即黄芩饮片粉碎成中粉，少量冷水分散，加入30 倍开水（150ml）冲调后煎煮1min，黄芩苷即可达到较好的溶出效果。根据此条件进行重复性验证实验。
　　3.4 验证实验按正交实验
　　筛选的工艺条件进行重复性验证实验，实验结果见表6。
　　从重复性验证实验结果可见，筛选条件提取结果黄芩苷含量波动不大，提取液中黄芩苷含量的变异系数为0.932%，且黄芩苷溶出率为95.51%，可见该提取条件是合理、可行的。
　　4 结论及讨论
　　4.1 本实验选用的研究对象——中药黄芩，是中医临床配方常用的中药饮片品种，在国外的应用也十分普遍，不仅用于临床配方，也作为药品公司加工药物粉末及提取物胶囊的原料。黄芩中的主要有效成分为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等黄酮类成分，其中黄芩苷的含量最高，易溶于热水，含量测定方法成熟，因此选用黄芩进行汤剂不同用法的合理性比较研究具有代表性。
　　4.2 根据实验结果，就黄芩苷溶出率而言，粉末用冷水分散，沸水冲调不及饮片传统煎煮方法，而用沸水冲调后短时间煎煮（1-3 分钟）可以达到90%以上的溶出率，优于饮片传统煎煮方法，通过正交实验表明粉末入药的影响因素是粉碎粒度>加水量>煎煮时间，其中粉碎粒度对溶出率有显著影响（P<0.05），以中粉为最佳。根据溶质扩散原理，药物颗粒半径越小，浸出药物的量越多。粉碎后的药物增加了表面积，能使药材中有效成分迅速、高效、充分地溶出；提高了药效和药物的利用率，使药物显效迅速，极大地发挥了药物的作用。
　　而实验结果表明：中药粉末粉碎到一定粒度，随着粒径的减小，其煎煮效果不会发生明显的改变；粉末越细，不仅药粉的制备难度增加，而且煎煮过程中粉末包裹、吸附、团聚等现象越显著，药物的煎煮效率和质量均受到影响，因此就本实验而言，粉碎成中粉最为合理，利于实际操作和服用。
　　4.3 本实验的研究结果表明，用中药粉末作为临床汤剂配方用药，采用中粉，沸水冲调并短时间煎煮的使用方法更加合理。通过短时间煎煮的方法，不仅可以大大提高药物的溶出率，也符合国际上的用药习惯，同时达到节约药材、降低成本，使用方便的目的。采用短时间煎煮的方法，在理论上也符合中医复方配伍用药的原则，可以达到复方汤剂“药力共出”
　　的目的，本实验仅对单味中药黄芩不同用法的合理性进行了研究，该方法是否适合其他种类中药及对中药复方的影响，还需进行进一步比较研究。